n39;注入選育高產(chǎn)β葡聚糖酶菌株及其發(fā)酵條件優(yōu)化的研究

1、分類號密級十位代碼： l 塑鯉學(xué)號：一S 0 3 0 —9 0 5 0 2 —0 0 8名微震業(yè)天學(xué)學(xué)位論文N + 注入選育高產(chǎn)1 3 一葡聚糖酶菌株及其發(fā)酵條件優(yōu)化的研究S t u d i e s O nB r e e d i n g o f H i g h P r o d u c i n g 1 3 - g l u c a n a s eb y N +I m p l a n t a t i o na n dO p t i m i z

2、 i n g F c r m c n t a t i o nC o n d i t i o n研 究 生：指 導(dǎo) 教 師：合作指導(dǎo)教師：申請學(xué)位門類級別：專 業(yè) 名 稱：研 究 方 向：所 在 學(xué) 院：型墅撞程藎基 熬攮蕉 堂亟±動塑萱羞量塑型型堂坷牲生物蘧苤動塑抖撞堂醫(yī)答辯委員會主超2 0 0 6 年0 6 月A b s t r a c tp ．G l u c a n c a r l b e d e c o m p o s

3、e ds m a l l m o l e c u l e sb y S —g l u c a n a s e ．T h u s r e s t r a i n a b l ee ／l e t o f f 3 一g l u c a n i s e l i m i n a t e d ．S oi t i s b e i n ga t t a c h e di m p o r t a n c e t o i n f e e da d d i

4、t i v ef i e l d ．B u t ，i t ’S a p p l i c a t i o nw a s r e s t r i c t e d f o ri t sl o w e n z y m e a c t i v i t y a n dc o m p l e x f e r m e n t a t i o nc o n d i t i o n s ．T h e s t r a i n A s p e r g i l

5、l u sn i g e rY 2 4 4 9 w a s t h es t u d i n g m a t e r i a li n t h i se x p e r i m e n t ．F i r s t l y , t h ec u l t u r em e d i u m f o raB —g l u c a n a s ep r o d u c t i o nb yA s p e r g i l l u sn i g e r

6、Y 2 4 4 9 w a ss t u d i e di nt h i s e x p e r i m e n t ；T h a n ，t h ee f f e c t so nt h es u r v i v a l r a t ea n d t h e p o s i t i v em u t a t i o nr a t e b yi o ni m p l a n t a t i o nw i t h d i f f e r e

7、 n tp a r a m e t e r sw e r es t u d i e d ，b y al a r g en u m b e ro fs c r e e n i n g s ，o n e s t r a i n S D l 6 w a sb r e e d e d ．F i n a l l y ，t h e f e r m e n t a t i o n c o n d i t i o n s o fm u t a g e

8、n i c s t r a i nS D l 6 w e r e s t u d i e d ．B ys i n g l ea n dO r t h o g o n a lt e s t ，Ac u l t u r em e d i u mf o r aB - g l u c a n a s ep r o d u c t i o n b yA s p e r g i l l u sn i g e rY 2 4 4 9 w a s s t

9、 u d i e d —F r o mt h ee x p e r i m e n t ，t h eo p t i m a lm e d i u m c o n s i s t i n go f 3 ％b a r l e y p o w d e r , 2 ％b e a n c a k e p o w d e r a n d O ．1 4 ％N H 4 N 0 3 ．w a so b t a i n e d ，，B —g l u c a

10、 n 0 ．1 ％，N a H c 0 ．1 ％，V i t a m i n e 0 ．1 ％，C a C 0 3 0 _ 3 ％，K 2 H P 0 4 ．3 H 2 0 0 ．1 ％，M g S 0 4 ．7 H 2 00 ．0 5 ％，F(xiàn) e S O d ．7 H 2 0O ．0 0 1 ％．T h ec o m p o s i t i o no f f e r m e n t a t i o n B - g l u c a n

11、a s ea c t i v i t yw a s7 3 U ／m 1 ．b u to r i g i n a l a c t i v i t y w a s4 0 ．3 U ／m l ，T h er e s u l t s u g g e s t e dt h a t 礦i m p l a n t a t i o ni sa n e f f e c t i v em e a n s i ns c r e e n i n gp —g l

12、 u c a n a s e ．T h e e f f e c t so nt h es t r a i nA s p e r g i I l u sn i g e r ‘Ss u r v i v a lr a t ei nv a c u u m i nt h i se x p e r i m e n tw e r es t u d i e d ．T h es t u d i e si n d i c a t e d ：T h ev a

13、 c u u m ．c a n n o t a b l yi n f l u e n c e s u r v i v a lr a t e ．W h e nt h em a i nw a s d e p o s i t e df o r3 0s e c o n d s ，i t s s u r v i v a lr a t eW a S8 2 ．7 ％, w h e n l 8 0s e c o n d s ，i t ss u r v

14、i v a l r a t e W a s2 0 ％，w h e n l 8 0s e c o n d s ，i t s s u r v i v a l r a t e w a s5 ．4 ％．H o w e v e r , w h e nt h es t r a i n w a s p r o t e c t e db yg l y c e r i ni nv a c u u m ，I t ss u r v i v a l r a t

15、 e W a sa f f e c t e di n d i s t i n c t i v l y ．W h e nt h es t r a i n w a sd e p o s i t e df o r3 0 s e c o n d s 、i t s s u r v i v a l r a t e w a s9 8 ．2 ％，w h e n2 4 0s e c o n d s ，i t s s u r v i v a lr a t

16、e w a s 9 3 ．3 ％．T h e n ，t h i se x p e r i m e n ts t u d i e da b o u tt h ee f f e c t so n t h es u r v i v a lr a t ea n d t h e p o s i t i v em u t a t i o nr a t eb yi o ni m p l a n t a t i o nw i t l ld i f f

17、e r e n t p a r a m e t e r s ．T h e r e s u t si n d i c a t e d ：i t ss u r v i v a lr a t ew a s d e c r e a s e d s l o w l y ；T h em o r ei m p l a n t a t i o n e n e r g y ,t h e m o r ep o s i t i v em u t a t i

18、o nr a t e ．T h es u r v i v i n g c u r v e o f t h ea n t i b i o t i c ·p r o d u c e r s c a u s e db yi o nb e a mi m p l a n t a t i o nw a ss t u d i e d ．I tw a s 卸i c a l “s a d d l e - s h a p e d ”d o s a

19、 g ee f f e c tc u r v e ．T h er e s u l t s s h o w e d t h e o p t i m i z a t i o n a l p a r a m e t e r s a s f o l l o w i n g ：i o n t y p e - N + ，i o ne n e r g y ‘1 5 K e V , d o s a g er a n g eo f i o ni m p

20、l a n t a t i o n ：8 0 ×2 ．6 ×1 0 ”N 7 c m 2 ．B ya l a r g en u m b e ro f s c r e e n i n g s ，o d e s t r a i n S D l 6 w h i c h p r o d u c e d p - g l u c a n a s e w i t h a c t i v i t y 4 8 9 ．3 2U ／m 1

21、 ．S t u d i e ss h o w e d t h a tS D l 6 h a s ag o o d g e n e t i c a ls t a b i l i t y ．F i n a l l y , f e r m e n t a t i o n c o n d i t i o n s o f m u t a g e n i c s t r a i n S D l 6 w e r e s t u d i e d ．T