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文檔簡介
1、本研究是從自然界土壤中分離篩選得到一株產(chǎn)殼聚糖酶的微生物菌株，經(jīng)過紫外線照射6min和1.00mg/mL濃度的亞硝基胍(NTG)作用30min后，傳代五代，發(fā)現(xiàn)其遺傳穩(wěn)定性較高，并且該菌株產(chǎn)殼聚糖酶的能力有了很大的提高，將其命名為H1。通過對菌株H1發(fā)酵產(chǎn)酶條件進行優(yōu)化研究，確定其最適發(fā)酵培養(yǎng)基組分為(w/v)：(NH4)2SO41.00％，酵母提取物0.30％，蛋白胨0.50％，K2HPO40.070％，KH2PO40.030％，Na
2、Cl0.50％，MgSO4·7H2O0.050％，葡萄糖0.10％，粉末殼聚糖1.00％，調(diào)pH至5.00，接種量為3.0％(v/v)，統(tǒng)一型號的500mL錐形瓶培養(yǎng)基裝量為100mL，150rpm，30℃搖床培養(yǎng)96h。在最適發(fā)酵條件下，培養(yǎng)96h后，菌株H1發(fā)酵液中殼聚糖酶活力可達到9U/mL。該殼聚糖酶是一種誘導型的胞外酶，先后采用30％-70％(NH4)2SO4分級鹽析、超濾器超濾脫鹽、Q-SepharoseFastFlow陰離
3、子交換層析、SephadexG-75凝膠過濾對菌株H1發(fā)酵液中的殼聚糖粗酶進行分離提純，獲得了一定的殼聚糖純酶。經(jīng)過SDS-PAGE電泳，該殼聚糖酶呈單條帶，分子量約為43kD。對該酶進行部分酶學性質(zhì)的研究表明：該殼聚糖酶的最適作用溫度為60℃，最適反應pH為pH5.2；該殼聚糖酶活力隨著殼聚糖底物分子量的增加而增加；最適作用底物濃度為1.00％(w/v)；金屬離子Mg2+，F(xiàn)e2+，Mn2+對酶活力有明顯的促進作用，Cu2+、Zn2+
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