麻瘋樹jatrophacurcasl.外植體愈傷組織中毒蛋白curcinwesternblot鑒定及其煙草轉(zhuǎn)基因研究

1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文麻瘋樹（Jatropha curcas L.）外植體愈傷組織中毒蛋白（curcin）Western-blot鑒定及其煙草轉(zhuǎn)基因研究姓名：戎芳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：陳放20040501四川大學(xué)碩士學(xué)位論文測到 c u r c i n 。因此， 利用麻瘋樹胚乳為外植體誘導(dǎo)出的愈 傷組織可以 作為種子毒蛋白c u r c i n 的另一個(gè)生 產(chǎn)來源， 是有效 解決自 然資 源匿乏的 途徑之一， 具有簡便、

2、快速、規(guī)模化、不受地區(qū)、 季節(jié)與氣候限制等優(yōu)勢。我們依據(jù)麻瘋樹毒蛋白( c u r c i n ) 的c D N A序列 ( 林娟等， 2 0 0 2; G e n B a n k注冊號A Y 0 6 9 9 4 6 ) 設(shè)計(jì)一 對引 物， 以 麻瘋樹幼葉的總D N A為 模板， 擴(kuò)增出 與c D N A一致的開放閱讀框 ( O R F ) 。 將這個(gè)O R F 構(gòu)建入植物雙元表達(dá)載體 p B I 1 2 1中， 在 C a M V

3、3 5 S 組成型啟動子和T - n o s 終止子的 控制下，構(gòu)成了 麻瘋樹的毒蛋白基因的植物表達(dá)載體 p B I 1 2 1 - c u r c i n ，并成功地將其轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌( A g r o b a c t e r i u m t u m e f a c i e n s ) E H A 1 0 5 。 然后利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化， 在含卡那霉素的M S S : 培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽， 叢生芽在 M S S , 培