麻瘋樹(shù)jatrophacurcasl.毒蛋白curcin基因及其啟動(dòng)子的初步研究

1、四川I 大學(xué)碩士學(xué)位論文題 目：盎疸撾f 絲! ￡型生￡堅(jiān)! 絲苧生：2 圭置魚(yú)璺旦! 璺i 墜塞圈丞甚星重量魚(yú)塑生盟霆作 者 喹壘± 完成日期 至Q 籃年上月培養(yǎng)單位 翌型盤堂生金莖瞳指導(dǎo)教師—— 睦蕉耋絲專 業(yè) 擅塹鱟研究方向墊塑塞盞生塹堂魚(yú)壘墊墊查授予學(xué)位日期 生 旦 目四朋1 大學(xué){ 哦} ：學(xué)位論文從麻瘋樹(shù)基因組中擴(kuò)增出五條啟動(dòng)子，分別命名為c p a l 、c p a 2 、c p a 3 、c p a 4 、c

2、p a 5 。將所得序列與已知麻瘋樹(shù)毒蛋白c u r c i n 啟動(dòng)子序列比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)麻瘋樹(shù)毒蛋白c u r c i n 基因啟動(dòng)予區(qū)存在部分變異，變異涉及到幾個(gè)假定的順式調(diào)控元件。五條啟動(dòng)子片段大致來(lái)源于三個(gè)基因，其中c p a l 與c p a 2 同屬一條基因的不同長(zhǎng)度的片段，c p a 3 與c p a 5 副屬另一條基因的不同長(zhǎng)度的片段，而c p a 4與前兩條基因都不在同一基因序列上。隨后，將五個(gè)麻瘋樹(shù)毒蛋白c u r

3、c i n 基因啟動(dòng)子片段插入用B a m HI 和H i n d I I I 雙酶切切除了C a M V 3 5 S 啟動(dòng)子的p B l l 2 1載體中，成功構(gòu)建了麻瘋樹(shù)毒蛋白c u r c i n 基因啟動(dòng)子表達(dá)載體p B I c p a l 、p B l c p a 2 、p B I c p a 3 、p B I c p a 4 、p B l c p a 5 。煙草葉片瞬時(shí)表達(dá)和G U S 組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)證明，在用含有麻瘋樹(shù)毒

4、蛋白c u r c i n 基因啟動(dòng)子表達(dá)載體的農(nóng)桿菌感染煙草葉片并共培養(yǎng)6 0 h r 以后，c p a l 、c p a 2 啟動(dòng)子可以啟動(dòng)G U S 基因表達(dá)，而其余啟動(dòng)子在此期間不能啟動(dòng)G U S 基因表達(dá)。將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入煙草形成再生苗，驗(yàn)證證明，一般條件下所有啟動(dòng)子都不能啟動(dòng)G U S 基因在煙草植株葉片中表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步說(shuō)明，c p a l 與c p a 2啟動(dòng)子在受到某種信號(hào)分予的誘導(dǎo)后才能啟動(dòng)其下游基因表達(dá)，而在一般條