靶向啟動(dòng)子的雙鏈小rna改變核小體組織結(jié)構(gòu)激活基因表達(dá)

1、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文博士學(xué)位論文學(xué)校代碼： 1 0 0 2 3學(xué) 號(hào)：B 2 0 1 0 0 1 8 0 0 2靶向啟動(dòng)子的雙鏈小R N A 改變核小體組織結(jié)構(gòu)激活基因表達(dá)S m a l ld o u b l e —s t r a n d e dR N A t a r g e t i n ga tp r o m o t e r a c t i v a t eg e n ee x p r e s s i o n b y

2、a l t e r i n g t h en u c l e o s o m e s a r c h i t e c h u r e所 院 ： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院姓 名 ： 王斌指導(dǎo)教師： 胡云章導(dǎo)師小組： 胡云章胡凝珠孫靜學(xué)科專(zhuān)業(yè)： 生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向： R N A 激活完成日期： 2 0 1 3 ．4 ．8中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博+ 學(xué)位論文目錄摘要?????????????????????????????

3、???????3英文摘要???????????????????????????????????5前言????????????????????????????????????71 關(guān)于R N A 激活???????????????????????????????7I ．I D s R N A 激活的定義和特點(diǎn)?????????????????????????71 ．2 R N A 激活機(jī)制的研究進(jìn)展????????????????????

4、??????81 ．3 D s R N A 激活機(jī)制仍未闡明?????????????????????????1 02 S a R N A 的設(shè)計(jì)規(guī)律?????????????????????????????．1 l2 ．1 D s R N A 設(shè)計(jì)規(guī)律的研究進(jìn)展???????????????????????．．1 12 ．2 調(diào)控元件、轉(zhuǎn)錄因子和s a R N A 的相互作用 ????????????????l l2 ．3 S a R

5、 N A 按四種啟動(dòng)子類(lèi)型激活基因表達(dá)???????????????????1 23D s R N A 激活機(jī)制假說(shuō)的提出????????????????????????．．1 44 染色質(zhì)重塑和核小體定位的研究方法?????????????????????1 6第一部分多能干基岡s a R N A 的篩選和設(shè)計(jì)規(guī)律研究?????????????? 1 81 材料與方法????????????????????????????????1

6、81 ．1 實(shí)驗(yàn)材料?????????????????????????????????1 81 ．2 實(shí)驗(yàn)步驟????????????????????????????????2 72 結(jié)果與分析????????????????????????????????4 22 ．1 多能干因子s a R N A 篩選??????????????????????????4 22 ．1 ．1 O C T 4 、S O X 2 、N A N O G 三

7、個(gè)基因s a R N A 篩選????????????????4 22 ．1 ．2O c t 4 、S o x 2 、N a n o g 三個(gè)因子存在相互激活作用???????????????4 52 ．2s a R N A 的激活規(guī)律????????????????????????????4 62 ．2 ．1 兩個(gè)或三個(gè)s a R N A 聯(lián)合轉(zhuǎn)染的規(guī)律????????????????????4 62 ．2 ．2 I 型啟動(dòng)子被d s

8、 R N A 激活后比I V 型獲得更高的激活表達(dá)量??????????4 72 ．2 ．3 越靠近T S S 的s a R N A 具有更高的激活效應(yīng)????????????????4 82 ．2 ．4 在R N A 酶結(jié)合位點(diǎn)和T S S 之問(wèn)設(shè)計(jì)d s R N A 具有激活效應(yīng)???????????5 03 討論???????????????????????????????????5 33 ．1 D s R N A 激活能針對(duì)所有

9、啟動(dòng)了類(lèi)型的基因??????????????????5 33 ．2 I 型啟動(dòng)子激活表達(dá)量高于I V 型???????????????????????5 43 ．3 S a R N A 激活規(guī)律?????????????????????????????5 53 ．4 本部分研究的創(chuàng)新點(diǎn)???????????????????????????5 63 ．5 對(duì)下一步研究的啟示???????????????????????????5 7第二部

10、分R N A 激活的機(jī)制研究???????????????????????5 81 材料與方法???????????????????????????????5 81 ．1 實(shí)驗(yàn)材料????????????????????????????????5 81 ．2 實(shí)驗(yàn)步驟????????????????????????????????5 92 結(jié)果與分析???????????????????????????????6 02 ．1 S a R

11、 N A 誘導(dǎo)核小體重定位導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄激活???????????????????6 12 ．2 轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件與s a R N A 靶位點(diǎn)結(jié)合相互作用激活基因表達(dá)???????????7 43 討論???????????????????????????????????7 73 ．1s a R N A 誘導(dǎo)核小體重定位激活基因表達(dá)???????????????????7 73 ．2 啟動(dòng)子上的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、轉(zhuǎn)錄因子與s a R N A 相互作用