茶樹(shù)兒茶素在芽中積累規(guī)律及茶樹(shù)f339;539;h2的功能分析

1、 I 摘要 摘要 茶多酚是茶樹(shù)中的多酚類(lèi)化合物的總稱(chēng)，主要由黃烷醇類(lèi)(兒茶素類(lèi))、黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)、花青素和原花青素類(lèi)構(gòu)成。茶多酚中成分最多的為兒茶素類(lèi)，在茶多酚中的含量比可以達(dá)到 65%至 80%。兒茶素對(duì)茶葉的品質(zhì)和藥理作用起著決定性的作用，具有抗氧化、防癌、降血壓、降血脂和降血糖等功效。類(lèi)黃酮 3′5′-羥基化酶(flavonoid 3′5′-hydroxylase，F(xiàn)3′5′H)是已發(fā)現(xiàn)的促進(jìn) B-環(huán) 5′端羥基化的唯有的酶類(lèi)，是

2、細(xì)胞色素 P450 酶家族(CYP)中的一員。F3′5′H 是生成藍(lán)色飛燕草花色素苷的關(guān)鍵基因，所以被人們稱(chēng)作“藍(lán)色基因” 。本文以茶樹(shù)品種舒茶早的芽為材料，將其分為莖尖(shoot tip，ST)和未展開(kāi)的幼葉(young leaf，YL)兩部分，通過(guò)高效液相色譜（HPLC） ，二甲基乙酰胺二甲基縮醛（DMACA）染色,熒光定量 PCR（qRT-PCR）和原位雜交技術(shù)對(duì)兒茶素的積累進(jìn)行研究。另外，本文在茶樹(shù)紫芽轉(zhuǎn)錄組中篩選出一個(gè)新的

3、F3′5′H 基因(CsF3′5′H2)，并在克隆CsF3′5′H2 基因的基礎(chǔ)上， 利用 qRT-PCR 技術(shù)分析其在不同組織器官與誘導(dǎo)的表達(dá)特異性；通過(guò)真核表達(dá)技術(shù)體系，替換基因信號(hào)肽，研究了 F3′5′H2 基因的體外功能。 本文對(duì)幼嫩器官的兒茶素基因表達(dá)差異的研究為兒茶素代謝途徑的關(guān)鍵基因和調(diào)控基因的挖掘奠定了理論基礎(chǔ)，主要研究結(jié)果如下： 1、 HPLC 分析表明 YL 的兒茶素含量高于 ST， 其中酯型兒茶素表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食

4、子酸酯（EGCG）和表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）的含量在 YL 中依次上升了 74%和 71.8%，而非酯型兒茶素表沒(méi)食子兒茶素（EGC） 、沒(méi)食子兒茶素（GC） 、兒茶素（C）和表兒茶素（EC）依次上升了 1.3， 4.0，1.0 和 1.2 倍。與 ST 相比，YL 中酯型兒茶素和非酯型兒茶素含量均有提高；其中，非酯型兒茶素的提高的幅度高于酯型兒茶素。 2、 利用 DMACA 染色進(jìn)行兒茶素的組織定位分析， 結(jié)果表明茶樹(shù)芽中兒茶素積

5、累于幼葉葉肉細(xì)胞(包括柵欄組織和海綿組織)和芽軸，在幼葉表皮和葉原基中則沒(méi)有觀察到染色。 3、利用qRT-PCR進(jìn)行兒茶素代謝的相關(guān)基因表達(dá)量分析，結(jié)果表明兒茶素代謝相關(guān)基因（PAL、C4H1、C4H2、CHS2、ANR1、DFR1、DFR1和F3′5′H1）在茶樹(shù)芽YL的相對(duì)表達(dá)量要顯著高于ST。 4、 通過(guò)基因的原位雜交技術(shù)進(jìn)一步研究了茶樹(shù)芽中兒茶素代謝的相關(guān)基因表達(dá)模式，結(jié)果顯示DFR1、DFR2、LAR和ANR1基因表達(dá)在芽的葉