蘋果多酚中原花青素B-,2-、兒茶素及表兒茶素的大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué).pdf

1、蘋果多酚是蘋果中所含多元酚類物質(zhì)的通稱,是果實(shí)在生長(zhǎng)發(fā)育期間產(chǎn)生的次生代謝物,主要包括羥基肉桂酸類、兒茶素類及其聚合物、黃酮醇類、二氫查耳酮類等。具有很強(qiáng)的抗氧化和抑菌能力,能抑制脂質(zhì)過氧化,抗腫瘤,抗突變,抗動(dòng)脈粥樣硬化,防治冠心病與中風(fēng),防齲齒,防輻射等,在心血管疾病、軟骨病、視力退化、過敏、齲齒及中風(fēng)等病癥上的應(yīng)用具有很高的療效,在醫(yī)學(xué)及化工領(lǐng)域均有相當(dāng)大的作用,其優(yōu)異的藥理學(xué)活性,必將使其成為新藥研究開發(fā)領(lǐng)域的新星,而新藥開發(fā)前

2、的藥代動(dòng)力學(xué)的研究十分重要。
　　 目的：建立同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中蘋果多酚主要活性成分原花青素B2、兒茶素和表兒茶素濃度的HPLC-MS/MS法。采用HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定分別給予高(2g/kg)、中(1.0g/kg)、低(0.5g/kg)濃度的蘋果多酚灌胃的大鼠血漿中原花青素B2、兒茶素和表兒茶素的濃度,計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),了解吸收、分布及消除規(guī)律,為新藥報(bào)批及其臨床研究提供理論依據(jù)。
　　 方法：取雄性健康Wi

3、star大鼠168只,于實(shí)驗(yàn)前一天禁食12小時(shí),稱重,隨機(jī)分為低、中、高劑量組各56只,設(shè)14個(gè)取血點(diǎn),每個(gè)取樣點(diǎn)設(shè)4只大鼠,用配好的0.20g/mL的蘋果多酚溶液按照低(0.5g/kg)、中(1.0g/kg)、高(2g/kg)劑量組灌胃,計(jì)時(shí),分別于0,0.083,0.167,0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,8,12h時(shí),從頸動(dòng)脈竇采血1.50mL,肝素抗凝,以2000g離心10min,分離血漿,-80℃保存血

4、漿。血漿樣品100μL加100ng·mL-1巖白菜素內(nèi)標(biāo)溶液10μL,渦旋1min,混勻,加入甲醇0.5mL,渦旋混合2min,10000rpm離心5min,取上清液,40℃水浴N2吹干,100μL流動(dòng)相溶解。采用HPLC-MS/MS法,測(cè)定血藥濃度。采用DSA2.0藥代動(dòng)力學(xué)程序計(jì)算高、中、低劑量原花青素B2、兒茶素及表兒茶素在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)果：1.原花青素B2、兒茶素和表兒茶素的保留時(shí)間分別為4.406

5、min、4.951min、6.188min,巖白菜素的保留時(shí)間為4.9min,三者之間達(dá)到基線分離,并不受空白血漿和代謝物以及蘋果多酚中其他成分的干擾,基質(zhì)效應(yīng)在85.76％～100.86％之間;三者的絕對(duì)回收率在85.48％～99.35％之間,相對(duì)回收率在75.65％～111.00％之間;原花青素B2和兒茶素線性范圍為1～100ng·mL-1,表兒茶素為1～500ng·mL-1;直線回歸方程:原花青素B2為y=0.0982x-0.01

6、16(R2=0.99241149);兒茶素為y=0.0168x-0.0043(R2=0.99198981);表兒茶素為y=0.0050x+0.0028(R2=0.99220807);最低定量限均為1ng·mL-1,相對(duì)偏差均小于15％;日內(nèi)、日間變異均小于11％;血漿樣品在-20℃放置24h和7天的穩(wěn)定性良好,經(jīng)歷兩次冷凍-解凍循環(huán)以及提取后室溫放置6h穩(wěn)定,相對(duì)偏差均小于7.79％。
　　 2.原花青素B2高、中、低劑量的藥代

7、動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別為:t1/2:(1.21±0.08)h,(1.18±0.41)h和(1.09±0.12)h,第一次Tmax均為0.5h,第二次Tmax分別為2h,3h,2h,Cmax分別為(64.78±3.15)ng·mL-1,(30.21±7.89)ng·mL-1和(3.80±0.46)ng·mL-1,AUC0-t分別為(194.07±15.22)ng·mL-1·h,(77.20±14.04)ng·mL-1·h和(9.31±0.64)n

8、g·mL-1·h,AUC0～∞分別為(194.54±15.27)ng·mL-1·h,(77.70±14.19)ng·mL-1·h和(9.76±0.58)ng·mL-1·h。
　　 兒茶素高、中、低劑量的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別為:t1/2:(1.22±0.15)h,(1.27±0.12)h和(1.29±0.41)h,第一次Tmax均為0.5h,第二次Tmax均為3h,Cmax分別為(125.32±20.37)ng·mL-1,(35.4

9、2±4.84)ng·mL-1和(13.49±3.90)ng·mL-1,AUC0-t分別為(374.98±44.54)ng·mL-1·h,(120.91±27.60)ng·mL-1·h和(38.17±8.39)ng·mL-1·h,AUC0～∞分別為(376.50±44.86)ng·mL-1·h,(121.40±27.73)ng·mL-1·h和(39.40±7.75)ng·mL-1·h。
　　 表兒茶素高、中、低劑量的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

10、分別為:t1/2:(0.87±0.19)h,(1.04±0.35)h和(0.87±0.19)h,第一次Tmax為0.5h,第二次Tmax分別為3h,2h,2h,Cmax分別為(827.31±74.43)ng·mL-1,(322.55±38.23)ng·mL-1和(77.43±12.83)ng·mL-1,AUC0-t分別為(2016.20±97.39)ng·mL-1·h,(420.07±14.29)ng·mL-1·h和(122.64±14

11、.25)ng·mL-1·h,AUC0～∞分別為(2017.26±98.06)ng·mL-1·h,(421.86±14.21)ng·mL-1·h和(123.04±14.08)ng·mL-1·h。
　　 結(jié)論：1.本文建立了同時(shí)測(cè)定大鼠血漿樣品中蘋果多酚主要活性成分原花青素B2、兒茶素及表兒茶素的HPLC-MS-MS研究方法。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證表明該法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好,可用于動(dòng)物及人體藥動(dòng)學(xué)研究。
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