兒茶素對農桿菌介導的茶樹遺傳轉化的影響.pdf

1、I摘要本研究證明茶樹難以被農桿菌轉化與茶樹的一些特定的化合物有關。茶樹含有豐富的次生代謝物質。由于其含有不同種類的、豐富的黃酮類化合物，常被用來研究植物類黃酮代謝。茶樹這些有益特點的遺傳改良和生物研究需要一個簡單有效而且低成本的方法。農桿菌介導的遺傳轉化已經(jīng)被作為一種常規(guī)的實驗室方法來進行植物的遺傳工程和生物研究。然而，茶樹難以被農桿菌轉化，相關機理知之甚少。盡管一些報道已經(jīng)得到轉基因茶樹和毛發(fā)根，但目前還沒有建立一套高效的茶樹轉基因體

2、系。先前的研究已經(jīng)表明，茶多酚有明顯的抑菌活性，所以茶多酚可能會影響農桿菌的生理活性和植物轉化的效率。本研究中，LB液體培養(yǎng)基提取的茶樹葉片及愈傷組織內含物被用來檢測對農桿菌及其轉化煙草的影響。高效液相色譜法（HPLC）檢測了茶樹葉片及愈傷組織提取液中的主要次生代謝物質，并將這些物質的標準品按照檢測的含量加入到培養(yǎng)基中檢測對農桿菌的影響。與生長在LB培養(yǎng)基中的對照組相比，農桿菌在含有茶樹葉片次生代謝物質（6.5mgml兒茶素）的培養(yǎng)基中

3、生長受到抑制，六個致病基因表達也受到了不同程度抑制（36%73%），而且被侵染的煙草外植體出現(xiàn)褐化，沒有外源基因的瞬時和穩(wěn)定表達。茶愈傷組織提取液含有0.22mgmL兒茶素，對農桿菌生長和煙草轉基因毛發(fā)根的產(chǎn)生沒有顯著影響，然而大部分致病基因表達增強。LB培養(yǎng)基中添加兒茶素混合物標準品，對農桿菌生長、致病基因表達和煙草的轉化有明顯抑制作用，而LB培養(yǎng)基添加咖啡堿對農桿菌沒有明顯影響。上述結果表明兒茶素是茶葉中影響農桿菌的主要次生代謝物質