腫瘤表面抗原p18539;cerbb2單克隆抗體的基因工程抗體研究

1、中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤表面抗原p185單克隆抗體的基因工程抗體研究姓名：程聯(lián)勝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉兢;王玉珍2002.10.1搦∞，乙糯摘 要苯芟蓯本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的三種臨床上具有良好應(yīng)用潛力的坑鹽／瘤表面抗原P 1 8 5 的單克隆抗體出發(fā)，對(duì)它們的可變區(qū)的基因序列進(jìn) ／n ，———一——_ 。_ ?一——～行了克隆和序列分析，并通過(guò)分子生物學(xué)的方法將兩種單抗的輕鏈和 ———————————

2、～ 一—，—’—‘—’————一重鏈基因連接在一起構(gòu)建了單鏈抗體( s c F v ) ，隨后在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)。其中一種表達(dá)產(chǎn)物純化后，完成了對(duì)此重組單鏈抗體的E L I S A 、w e s t e r n b l o t 、免疫組化和F A C S 等免疫學(xué)活性的鑒定。在單鏈抗體的基礎(chǔ)上，初步摸索了多價(jià)抗體和噬菌體庫(kù)構(gòu)建的條件。廠 ( 在確定單鏈抗體保留了原有親代抗體的抗原結(jié)合特性后，通過(guò)分 ＼～∑’子生物學(xué)手段將其與人抗體I

3、 g G l 的恒定區(qū)F c 片段連接，構(gòu)建了s c F v ．F c 融合分子。該融合分子在C H O ．G S 系統(tǒng)中得到了高效的表達(dá)，表達(dá)量在1 0 ．2 0 0 微克／m l 之間。對(duì)融和分子進(jìn)行親和純化后，通過(guò)E L I S A 、競(jìng)爭(zhēng)性抑制、w e s t e r nb l o t 、免疫組化、F A C S 等手段鑒定了它的抗原結(jié)合特性，證明它是一個(gè)雙價(jià)同二聚體分子且與親代抗體有著完全相同的抗原結(jié)合位點(diǎn)。隨后對(duì)融合分子又進(jìn)