漢族瘢痕疙瘩家系標(biāo)本保存及15q22.3123和18q21.1易感基因定位研究

1、第一軍醫(yī)大學(xué)2 0 0 3 級(jí)博士學(xué)位論文V , 9 7 S 0 0 ；漢族瘢痕疙瘩家系標(biāo)本保存及1 5 q 2 2 ．3 l 一2 3 和1 8 q 2 1 ．I易感基因定位研究S t u d yo n s a m p l e s t o r a g ea n d g e n e t i c m a p p i n g o f s u s c e p t i b i l i t yg e n e o n c h r o m o s o

2、 m e s 1 5 q 2 2 ．3 1 —2 3 & 1 8 q 2 1 ．1i na H a n C h i n e s ek e l o i d p e d i g r e e課題來(lái)源：廣東省名醫(yī)工程( 2 0 0 4 )專(zhuān) 業(yè) 名 稱(chēng)學(xué)位申請(qǐng)人指 導(dǎo) 教 師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員論文評(píng)間人整形外科學(xué)嚴(yán)欣高建華教授李世榮教授于國(guó)中教授羅深秋教授羅錦輝教授張金明教授李世榮教授于國(guó)中教授羅深秋教授2 0 0 6 年5

3、月2 0 日廣州摘 要短串聯(lián)重復(fù)序Y O ( S T R ) 廣泛存在于真核生物基因組中，是具有高度多念性的新一代遺傳標(biāo)記。通過(guò)家系分析和分子生物學(xué)方法，進(jìn)行連鎖分析和相關(guān)分析，尋找與疾病高度相關(guān)S T R 位點(diǎn)，是目前定位疾病易感基因的主要方法。經(jīng)過(guò)課題組成員的共同努力，我們采集了一個(gè)較完整的瘢痕疙瘩家系的l 臨床資料和外周血標(biāo)本，運(yùn)用E B V 轉(zhuǎn)化技術(shù)建立了其中具有顯著遺傳學(xué)意義個(gè)體的永生化細(xì)胞庫(kù)，并針對(duì)人S M A D 蛋白基因

4、所在的1 5 q 2 2 ．3 1 - q 2 3 及1 8 q 2 1 ．1 染色體區(qū)域，選擇7 個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，采用S T R 連鎖分析方法對(duì)此家系疾病易感基因的定位進(jìn)行了初步研究。材料與方法l 、采集中國(guó)東北地區(qū)1 個(gè)5 代瘢痕疙瘩發(fā)病家系的l 臨床資料及5 6 人的外周血標(biāo)本，其中確診患者1 l 例( 男5 例、女6 例) ，并進(jìn)行初步的遺傳學(xué)分析。2 、瘢痕疙瘩家系外周血淋巴細(xì)胞永生化細(xì)胞庫(kù)的建立選擇此家系中先證者家庭及唯一四代

5、家庭共四代2 8 人的外周血樣本，先后應(yīng)用新鮮血法和凍存血法來(lái)建立淋巴細(xì)胞永生化細(xì)胞庫(kù)。新鮮血法：在無(wú)菌條件下，從外周血樣本中分離出淋巴細(xì)胞，加入E B V 懸液、C y A 等，置于3 7 。C ，5 ％C 0 2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。轉(zhuǎn)化成功后經(jīng)轉(zhuǎn)瓶、傳代培養(yǎng)，4 —5 代后進(jìn)行凍存建株。3 個(gè)月后對(duì)凍存細(xì)胞株進(jìn)行復(fù)蘇，常規(guī)培養(yǎng)、傳代。凍存血法：所有血樣均經(jīng)液氮凍存，1 月后抽取6 例凍存血標(biāo)本，復(fù)蘇后加入E B V 懸液進(jìn)行轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、