水稻oryzasatival.osgrp2啟動(dòng)子維管束特異表達(dá)元件及其反式作用因子研究

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文水稻（Oryza sativa L.）Osgrp-2啟動(dòng)子維管束特異表達(dá)元件及其反式作用因子研究姓名：陳萬(wàn)利申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：作物栽培學(xué)與耕作學(xué)指導(dǎo)教師：李文華;方榮祥20040601S T U D Y O NC I S —E L E M E N T A N D T R A N S ·A C T I N G F A C T O R R E S P O N S I B L E F O RV A S

2、C U L A R ·S P E C I F I CE X P R E S S I O N O F O S G R P - 2P R O M O T O R I NR I C E ( O r y z as a t i v a )A b s t r a c tG l y c i n e —r i c hp r o t e i n s ( G R P s ) o f p l a n t s a r e w i d e I ys p

3、 r e a di na v a r i e t yo fm o n o c o t y l e d o n sa n dd i c o t y l e d o n s ，i m p l y i n g t h e i rd i v e r s e a n d e s s e n t i a l r o l e s ．S t u d yo f g e n e e x p r e s s i o nr e g u l a t i o n

4、o f G R P s b y p r o m o t e r a n a l y s i s c a nh e l p t o u n r a v e l t h e i r p o s s i b l e b i o l o g i c a lf u n c t i o n s ，Ar i c eG R P g e n e ，O s g r p 一2 ，h a sb e e np r e v i o u s l yi s o l a

5、 t e da n ds e q u e n c e d ( G e n B a n kU 4 0 7 0 8 ) ． I t s e x p r e s s i o ni sv i r u s —i n d u c i b l ea sw e l la sr e g u l a t e dd e v e I o D m e n t a i l va n d i n d u c e db y m e c h a n i c a li n

6、 j u r y T h e5 ’d e l e t i o n a n a l y s i s o f t h eO s g r p ·2p r o m o t e r i n t o b a c c o t r a n s i e n te x p r e s s i o n s y s t e m s r e v e a l e dt h ep r e s e n c e o f ap o s i t i v er e

7、g u l a t o r yr e g i o n ( ·2 2 9 0t o 一14 0 6 ) a n dt w on e g a t i v er e g u l a t o r y r e g i o n s ( - 2 4 0 1 ／- 2 2 9 I a n d —1 4 0 5 ／- 1 0 2 2 ) f o rt h ep r o m o t e ra c t i v i t y A1 0 2 3 b p

8、f r a g m e n t o fO s g r p 一2 p r o m o t e r ( ·1 0 2 1t o + 2 ) f u s e dw i t hG U S w a s t r a n s f o r m e di n t ot o b a c c oa n d p r o v e dt ob ec a p a b l e o f c o n f e r r i n gv a s c u l a r ．s

9、 p e c i f i ce x p r e s s i o nI n t h i s s t u d y , a V S 9 9 f r a g m e n t o fO s g r p - 2 p r o m o t e rh a d b e e n s t r i c t l y t e s t e d f o r i t sf u n c t i o na c q u i r e d ．D i r e c t e dr e p

10、 e a tt h eV S 9 9f r a g m e n ta n d t h e nf u s e di t t ot h eu p s t r e a mo ft h e3 5 S - 8 9 m i n i m a l p r o m o t e r ．T h e f u s e ds e q u e n c e w a s c l o n e d t o H i n d I l l ．E c o R I d i g e s

11、 t e de x p r e s s i o n v e c t o r p B I l 2 1 ．T r a n s f o r m t o b a c c o s w i t h t h e r e c o m b i n e d p l a s m i d ．a(chǎn) n d G U Sa c t i v i t yW a s a s s a y e d i nv a r i o u st i s s u e s T h e e x

12、p e r i m e n t sh a d r e v e a l e d t h a tt h eV S 9 9f r a g m e n tc a r lc o n f e rv a s c u l a r ·s p e c i f i ce x p r e s s i o n ．T o i d e n t i f y t h ec i s —e l e m e n t s ．N u c l e o p r o t e

13、i n so fs t e ma n d l e a fo f s i x —w e e kt o b a c c o s h a d b e e ne x t r a c t e d a n de l e c t r o p h o r e t i cm o b i l i t y s h i f t a s s a y( E M S A ) b a db e e np r e c e d e dw i t h t h eV S 9

14、9f r a g m e n t ．T h es p e c i f i c b l o t s u g g e s t e ds p e c i f i cb i n d i n g s e q u e n c ei n t h eV S 9 9f r a g m e n t ．A l i g n i n g t h eV S 9 9f r a g m e n tw i t h t h ef i v e e x i s t e dp

15、r o m o t e r s o f v a s c u l a r - s p e c i f i c e x p r e s s i o n l i m i t e d 1 3 - b p h i g h —s p e c i f i c s e q u e n c e ．Y e a s to n e ·h y b r i dw o u l db e p r o c e d e db e t w e e n d i r

16、e c t e d t h r e ec o p i e s o f1 3 - b p f r a g m e n ta n de D N Al i b r a r y ．o f r i c e f o rs c r e e n i n gt r a n s 。a c t i n g f a c t o r s i n t e r a c t i n gw i t h t h e 1 3 - b O f r a g m e n t ．A

17、 tp r e s e n t ，4 5c l o n e s h a d b e e no b t a i n e da n d2 3o f t h e mh a v eb e e n c o r r e c t l ya m p l i f i c a t e d b yP C RT h eP C R p r o d u c t s w i l lb es e q u e n c e d a n d t h e na l i g n

18、 e di nN C B IG r a d u a t es t u d e n t ：C h e nW a n I j I V l a j o r ：C r o pC u l t u r ea n d F a r m i n g S y s t e mS u p e r v i s o r ：A s s o c i a t eP r o f ．L i W e n h u aP r o f ．F a n g R o n g x i a