啟動(dòng)子的反式激活導(dǎo)致fascin在食管癌中過(guò)表達(dá).pdf

1、目的：Fascin在食管癌(ESCC)等腫瘤中過(guò)表達(dá)，直接參與了癌細(xì)胞的分裂增殖和侵襲轉(zhuǎn)移，與患者不良預(yù)后密切相關(guān)。但其過(guò)表達(dá)調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本研究的目的是檢測(cè)該基因啟動(dòng)子的甲基化情況，探討ESCC中fascin基因的調(diào)控模式。
　　 方法：采用MSP(-56/+114)和BGS技術(shù)(-218/+55)對(duì)食管癌細(xì)胞系和組織樣本進(jìn)行啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測(cè)；從EC109細(xì)胞擴(kuò)增fascin 基因的+168/+2838 片段(包括第一外

2、顯子和部分第一內(nèi)含子)，分別克隆到含有fascin基因核心啟動(dòng)子和SV40 啟動(dòng)子的表達(dá)載體下游，并聯(lián)合采用漸進(jìn)式截短策略和雙熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)確認(rèn)該區(qū)域?qū)?dòng)子的調(diào)控活性；然后用BGS方法分別檢測(cè)食管癌細(xì)胞系和癌組織樣本中該區(qū)域(+237/+513 和+560/+859)甲基化情況；為了確認(rèn)該區(qū)域活性是否由甲基化位點(diǎn)引起，采用甲基化抑制劑5-aza-2’-deoxycytidine處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，通過(guò)雙熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)其活性變化進(jìn)行分析

3、。
　　 結(jié)果：運(yùn)用MSP技術(shù)和BGS技術(shù)檢測(cè)fascin 啟動(dòng)子區(qū)甲基化情況發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是細(xì)胞系或者臨床樣本該啟動(dòng)子區(qū)均以非甲基化形式存在。雙熒光素酶分析結(jié)果證明，+168/+2838 區(qū)域?qū)ascin 的啟動(dòng)子區(qū)有抑制作用。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，發(fā)揮抑制作用的主要為+262/+2838 片段；該區(qū)段的BGS檢測(cè)顯示，在EC109、EC18、SHEE 3個(gè)細(xì)胞系和5對(duì)臨床樣本中+560/+859(位于第一外顯子區(qū))區(qū)中41 CpG島