hpv6bl139;△ebvlmp2多表位嵌合核酸疫苗的構(gòu)建、表達(dá)和免疫效應(yīng)研究

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文HPV6bL1/EBV LMP2多表位嵌合核酸疫苗的構(gòu)建、表達(dá)和免疫效應(yīng)研究姓名：劉建曉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：張麗芳;夏克棟20100501溫州醫(yī)學(xué)院碩{ ：學(xué)位論文和嵌合重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位免疫B A L B ／c 小鼠，每次l O O “g ／1 0 0 p lP B S ／R ，同時設(shè)置對照組

2、P B S 組、p c D N A 3 ．1 ( + ) 組、p c D N A 3 ．0 ( + ) ／H P V 6 b L l△組和p c D N A 3 ．0 ( + ) ／H P V 6 b L l △+ p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B VL M P 2 多表位聯(lián)合組，通過E L I S A ，C T L 細(xì)胞殺傷活性檢測和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測等，分析重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B

3、 VL M P 2 多表位和嵌合重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．1 ( + ) H - I P V 6 b L l △／E B VL M P 2多表位誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的體液免疫和細(xì)胞免疫效應(yīng)。結(jié)果：1 - 經(jīng)酶切分析和測序證實(shí)多表位重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B V L M P 2 多表位構(gòu)建成功；轉(zhuǎn)染C O S ．7 細(xì)胞后，經(jīng)R T - P C R 和間接免疫熒光證實(shí)了該多表位質(zhì)粒在C O S ．7 細(xì)胞的

4、m R N A 轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)，且定位于胞漿。2 ．經(jīng)P C R ，酶切及測序鑒定嵌合重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位構(gòu)建成功；轉(zhuǎn)染C O S 一7 細(xì)胞后，經(jīng)R T - P C R ，間接免疫熒光和W e s t e r nB l o t 分析，均證實(shí)了其可以在真核細(xì)胞中表達(dá)，，且主要定位于胞漿，呈不均勻顆粒狀。電鏡觀察顯示細(xì)胞胞漿中有5 0 ．6

5、0 n m 的病毒樣顆粒形成，提示嵌合重組質(zhì)粒p c D N A 3 ．I ( + ) ／H P V6 b L l △／E B V L M P 2 多表位可在真核細(xì)胞胞漿表達(dá)，且不影響H P V 6 b L l 病毒樣顆粒的組裝。3 ．E B VL M P 2 多表位重組質(zhì)粒誘導(dǎo)B A L B ／c 小鼠產(chǎn)生的血清抗體經(jīng)W e s t e r nb l o t 驗(yàn)證能特異性識別E B V L M P 2 多表位蛋白和E B V 膜蛋白；

6、p c D N A 3 ．I ( + ) m B V L M P 2 多表位和p c D N A 3 ．I ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位免疫B A L B ／c 小鼠后，E L I S A 結(jié)果顯示其能產(chǎn)生對p E T 3 2 a ／E B V L M P 2 多表位的特異性I g G ( 末次免疫后一周達(dá)峰值，與對照組p c D N A 3 ．1 ( + ) 組和P B S 組比較，有

7、顯著性差異，p < O ．0 5 ) 和s I g A ( 末次免疫后一周達(dá)峰值，與對照組p c D N A 3 ．1 ( + ) 組和P B S 組比較，有顯著性差異，p < 0 ．0 5 ) ，也能產(chǎn)生對E B V 膜蛋白的特異性I g G ，且在末次免疫后1 周達(dá)到峰值；p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位組還可以產(chǎn)生抗H P V 6 b L l

8、V L P 的特異性I g G 抗體( 與對照組比較均有顯著性差異p < 0 ．0 5 ) ，與p c D N A 3 ．O ( + ) ／H P V6 b L l △+ p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B VL M P 2 多表位聯(lián)合組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C T L 細(xì)胞活性檢測結(jié)果顯示小鼠核酸免疫后能產(chǎn)生對靶細(xì)胞的特異性殺傷作用，并隨效靶比( E f t ) 的增高殺傷率也增高，與對照組p c D N A 3 ．