hbxknockdown對hepg2.2.15細(xì)胞hbv復(fù)制和線粒體鈣通道的影響及其表達(dá)譜分析

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文Hbxknockdown對HepG2.2.15細(xì)胞HBV復(fù)制和線粒體鈣通道的影響及其表達(dá)譜分析姓名：謝海洋申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)；乙肝相關(guān)性肝病指導(dǎo)教師：鄭樹森201104浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 摘要因表達(dá)譜，為后續(xù)的深入相關(guān)基因功能和調(diào)控機制研究奠定基礎(chǔ)。方法：本研究通過合成H B x 基因1 6 9 4 起始位點s i R N A ，轉(zhuǎn)染含H B V 全基因組的H e p G 2 ．2 ．1 5 細(xì)胞，運用

2、微粒子酶免疫分析技術(shù)( M E l A ) 對H B V 表面抗原( H B s A g ) 、e 抗原( H B e A g ) 進(jìn)行定量檢測，R e a I - t i m e P C R 分析H B x m R N A 及H B V D N A 拷貝數(shù)的變化．運用流式細(xì)胞儀定量分析胞內(nèi)線粒體M P T P 狀態(tài)變化引發(fā)c a l c e i n 激發(fā)的熒光強度變化，利用A 衄m e 研x 表達(dá)譜芯片篩選H B x K n o c

3、k d o 啪前后的差異表達(dá)基因，對部分基因用R e a l - t i m e P C R 進(jìn)行驗證。結(jié)果：H B xs i I 洲A 1 6 9 4 可明顯下調(diào)H e p G 2 ．2 ．1 5 細(xì)胞H B xm R N A 的表達(dá)，抑制培養(yǎng)上清H B s A g 和H B e A g 的表達(dá)分泌，減低培養(yǎng)上清H B VD N A 拷貝數(shù)；H B xs i R N A l 6 9 4 和M 胛P 抑制劑環(huán)孢素A ( C s A ，C

4、 y c I o s p o r i n eA ) 可拮抗胞內(nèi)鈣離子釋放劑A 2 3 1 8 7 引發(fā)的c a I c e i n 熒光強度的降低。H B x K n o c k d o w n 前后表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示差異2 倍( P < 0 ．0 5 ) 以上的基因有3 8 5 個，其中在H B x s i R N A l 6 9 4 處理后明顯下調(diào)的有2 8 8 個基因，9 7 個基因明顯上調(diào)表達(dá)，并對H s P B 8 、P