土壤過(guò)氧化氫酶、過(guò)氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶測(cè)定方法

1、土壤酶活性測(cè)定方法土壤酶活性測(cè)定方法土壤脲酶的測(cè)定方法（苯酚鈉土壤脲酶的測(cè)定方法（苯酚鈉—次氯酸鈉比色法）次氯酸鈉比色法）一、原理一、原理脲酶存在于大多數(shù)細(xì)菌、真菌和高等植物里。它是一種酰胺酶作用是極為專性的，它僅能水解尿素，水解的最終產(chǎn)物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、全氮和速效磷含量呈正相關(guān)。根際土壤脲酶活性較高，中性土壤脲酶活性大于堿性土壤。人們常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素狀況。土壤中脲酶活性的

2、測(cè)定是以脲素為基質(zhì)經(jīng)酶促反應(yīng)后測(cè)定生成的氨量，也可以通過(guò)測(cè)定未水解的尿素量來(lái)求得。本方法以尿素為基質(zhì)，根據(jù)酶促產(chǎn)物氨與苯酚次氯酸鈉作用生成藍(lán)色的靛酚，來(lái)分析脲酶活性。二、試劑二、試劑1）甲苯2）10%尿素：稱取10g尿素，用水溶至100ml。3）PH6.7檸檬酸鹽緩沖液：184g檸檬酸和147.5g氫氧化鉀（KOH）溶于蒸餾水。將兩溶液合并，用1molLNaOH將PH調(diào)至6.7，用水稀釋定容至1000ml。4）苯酚鈉溶液（1.35mol

3、L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀釋至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。將A、B溶液保存在冰箱中。使用前將A液、B液各20ml混合，用蒸餾水稀釋至100ml。5）次氯酸鈉溶液：用水稀釋試劑，至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定。6）氮的標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.4717g硫酸銨溶于水并稀釋至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的標(biāo)準(zhǔn)液。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，再將此溶液

4、稀釋10倍供用。三、操作步驟三、操作步驟標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：分別吸取稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后補(bǔ)加蒸餾水至20ml。再加入4ml苯酚鈉溶液和3ml次氯酸鈉溶液，隨加隨搖勻。20min后顯色，定容。1h內(nèi)在分光光度66~7、8~10。因此，測(cè)定酸性、中性和堿性土壤的磷酸酶，要提供相應(yīng)的PH緩沖液才能測(cè)出該土壤的磷酸酶最大活性。測(cè)定磷酸酶常用的PH緩沖體系有乙酸鹽緩沖液（PH5.0~5.4）、

5、檸檬酸鹽緩沖液（PH7.0）、三羥甲基氨基甲烷緩沖液（PH7.0~8.5）、和硼酸緩沖液（PH9~10）。磷酸酶測(cè)定時(shí)常用基質(zhì)有磷酸苯二鈉、酚酞磷酸鈉、甘油磷酸鈉等?，F(xiàn)介紹磷酸苯二鈉比色法。二、試劑二、試劑1）緩沖液：a.醋酸鹽緩沖液PH5.00.2molL醋酸溶液:11.55ml95%冰醋酸溶至1L.0.2molL醋酸鈉溶液:16.4gC2H3O2Na或27gC2H3O2Na.3H2O溶至1L?；蛘呷?4.8ml0.2molL醋酸溶液

6、和35.2ml0.2molL醋酸鈉溶液稀釋至1L.b.檸檬酸鹽緩沖液PH7.00.1molL檸檬酸溶液：19.2gC6H7O8溶至1L.0.2molL磷酸氫二鈉溶液：53.63gNa2HPO4.7H2O或者71.7gNa2HPO4.12H2O溶至1L.取6.4ml0.1molL檸檬酸溶液加43.6ml0.2molL磷酸氫二鈉溶液稀釋至100ml.c.硼酸鹽緩沖液PH9.60.05molL硼砂溶液19.05g硼砂溶至1L.0.2molLN