山銀花多酚氧化酶及過氧化物酶酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、本研究從山銀花的花蕾中分離純化出多酚氧化酶(PPO)，對多酚氧化酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)表征。經(jīng)過硫酸銨分級沉淀和DEAE-纖維素離子交換層析柱后，多酚氧化酶純度達(dá)到25.48倍，使用多角度激光光散射法和電泳法測定分子量約為28.8kDa。山銀花中PPO以L-dopa為底物時(shí)，發(fā)生酶促反應(yīng)的最佳pH值和最適溫度分別為8.5和15℃。在熱穩(wěn)定性試驗(yàn)中，多酚氧化酶在10℃、20℃中預(yù)處理60min后依然穩(wěn)定，酶活性保持在90％以上，溫度升高穩(wěn)定性降低

2、。PPO底物專一性具有二元酚和三元酚特性，以L-dopa作為多酚氧化酶反應(yīng)底物的米氏常數(shù)確定為2.26mmol/L。根據(jù)Vmax/Km常數(shù)的特異性，鄰苯二酚為PPO較適底物。此外，抗壞血酸對PPO活性的抑制作用最強(qiáng)，濃度僅為1 mmol/L時(shí)，就可以抑制78％以上的PPO酶活性。
　　對山銀花中過氧化物酶(POD)進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)表征。山銀花中POD以愈創(chuàng)木酚為底物最適pH值為6.0，最適反應(yīng)溫度較低，僅為15℃，且熱穩(wěn)定性較高，當(dāng)溫

3、度低于50℃時(shí)，預(yù)處理60min后酶活性變化均不大，在高溫條件達(dá)到80℃時(shí)，發(fā)生失活。POD的愈創(chuàng)木酚和H2O2的米氏常數(shù)分別為14.33mmol/L、0.2mmol/L。常見的化合物對于POD具有一定的影響作用，其中抗壞血酸對POD的抑制率最強(qiáng)，當(dāng)濃度為1 mmol/L時(shí)，抑制達(dá)到90％以上。常見金屬離子對過氧化物酶活力也有一定程度的影響。
　　研究不同干燥方法對山銀花酶活性及相關(guān)活性成分含量的影響，為確定山銀花最佳干燥方法，提

4、高山銀花品質(zhì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。采用真空微波干燥、恒溫鼓風(fēng)干燥、陰干對山銀花樣品進(jìn)行干燥處理;利用分光光度計(jì)法測定樣品多酚氧化酶、過氧化物酶的酶活性以及總酚、總黃酮含量;利用高效液相色譜法測定綠原酸及木犀草苷的含量。真空微波處理的山銀花樣品，多酚氧化酶及過氧化物酶酶活性最低，剩余酶活性僅為鮮樣的30％和13％，產(chǎn)生輕微褐變，總酚、總黃酮、綠原酸、木犀草苷含量最高;陰干樣品大部分酶活性仍保留，褐變嚴(yán)重，活性成分含量最低。因此，不同干燥方法對山銀