最新實(shí)驗(yàn)原理與方法2

1、1實(shí)驗(yàn)原理與方法蔬菜生理與生態(tài)實(shí)驗(yàn)室蔬菜生理與生態(tài)實(shí)驗(yàn)室南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院二零零九年十月二零零九年十月1一氮藍(lán)四唑（氮藍(lán)四唑（NBTNBT）法測(cè)定超氧化物岐化酶（）法測(cè)定超氧化物岐化酶（SODSOD）【實(shí)驗(yàn)原理】【實(shí)驗(yàn)原理】SOD是含金屬輔基的酶。高等植物含有兩種類型的SOD：Mn－SOD和Cu.Zn－SOD，它們都催化下列反應(yīng)：由于超氧自由基（O2.－）為不穩(wěn)定自由基，壽命極短，測(cè)定SOD活性一般為間接方法。并利

2、用各種呈色反應(yīng)來測(cè)定SOD的活力。核黃素在有氧條件下能產(chǎn)生超氧自由基負(fù)離子O2.－，當(dāng)加入NBT后，在光照條件下，與超氧自由基反應(yīng)生成單甲月替（黃色），繼而還原生成二甲月替，它是一種藍(lán)色物質(zhì)，在560nm波長(zhǎng)下有最大吸收。當(dāng)加入SOD時(shí)，可以使超氧自由基與H結(jié)合生成H2O2和O2，從而抑制了NBT光還原的進(jìn)行，使藍(lán)色二甲月替生成速度減慢。通過在反應(yīng)液中加入不同量的SOD酶液，光照一定時(shí)間后測(cè)定560nm波長(zhǎng)下各液光密度值，抑制NBT光還