小鼠室旁核內(nèi)雌激素受體與催產(chǎn)素、加壓素表達(dá)的免疫組化研究

1、1小鼠室旁核內(nèi)雌激素受體與催產(chǎn)素、加壓素表達(dá)的免疫組化研究作者：趙承軍，鄧其躍，張東梅，蔡文琴，阮懷珍，張吉強(qiáng)【摘要】目的研究雌激素的核受體ERα和ERβ以及催產(chǎn)素、加壓素在成年雌性小鼠下丘腦室旁核內(nèi)的表達(dá)。方法采用硫酸鎳銨增強(qiáng)顯色的免疫組化SP法檢測(cè)ERα、ERβ、催產(chǎn)素和加壓素在室旁核內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果雌激素的兩種核受體在室旁核內(nèi)都有表達(dá)，但是以ERβ為主（P＜0.001），其免疫陽性產(chǎn)物均在細(xì)胞核內(nèi)，未見核外免疫陽性反應(yīng)。催

2、產(chǎn)素的免疫陽性產(chǎn)物主要在細(xì)胞核周圍的胞漿即核周質(zhì)內(nèi)，而加壓素的免疫陽性物質(zhì)除了在核周質(zhì)內(nèi)有很強(qiáng)的反應(yīng)外，在突起內(nèi)也可見很強(qiáng)的免疫反應(yīng)。ERα的免疫陽性胞體主要在大細(xì)胞部內(nèi)側(cè)，而ERβ、催產(chǎn)素和加壓素的免疫陽性胞體主要在背側(cè)帽部或大細(xì)胞部的外側(cè)。結(jié)論室旁核內(nèi)兩種雌激素受體可能都參與了對(duì)催產(chǎn)素和加壓素的調(diào)節(jié)，但ERβ可能發(fā)揮了主要的調(diào)節(jié)作用?！娟P(guān)鍵詞】雌激素受體；催產(chǎn)素；加壓素；室旁核；小鼠Abstract:ObjectiveTost

3、udytheexpressionsofthetwoestrogenrecepts(ERαERβ)oxytocinvasopressinintheparaventricularnucleus(PVN)ofmice.MethodsTheexpressionsofERαERβoxytocinvasopressinweredetectedusingnickelammoniumsulfateintensifiedimmunohistoch

4、emicalSPmethod.ResultsBothofthetwoERs(ERαERβ)immuneactivitiesweredetectedinthecellnucleiofthePVNwhileERβshowedstrongerstaining.Positivestainingofoxytocinvasopressinwereinthecytosoloftheneuronsthefmergavelessintensitym

5、anypositivevaricositiesfvasopressinwerealsonoticedinneurite.MostofERαwerefoundinthemagnocellularpartotherswerefoundoutthemagnocellularpartdsalcupofthePVN.ConclusionBothERsmightinvolvetheaccommodationofPVNbutERβmightbet

6、hepredominantERinmediatingthisER31.3免疫組化染色硫酸鎳銨增強(qiáng)顯色的免疫組化技術(shù)按文獻(xiàn)［5］進(jìn)行。簡述如下：切片經(jīng)3%H2O2封閉15min，PBS漂洗后用正常血清封閉30min，然后加入一抗（ERα1∶1000；ERβ1∶1000；OT1∶8000；VP1∶8000）于37℃孵育1h后轉(zhuǎn)4℃孵育48h。PBS漂洗過夜后加入各自對(duì)應(yīng)的二抗，室溫孵育1h，PBS漂洗后用SPHRP孵育1h，最后用硫酸

7、鎳銨DAB顯色5min，梯度酒精脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片。1.4圖像分析與數(shù)據(jù)處理所有染色切片經(jīng)Leica顯微攝像系統(tǒng)采集后，用ImageProPlus軟件進(jìn)行光密度（OD）分析，每只小鼠隨機(jī)測(cè)量5張切片，共計(jì)5只小鼠。用Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。2結(jié)果兩種雌激素受體在正常雌性小鼠PVN內(nèi)的免疫陽性產(chǎn)物都位于細(xì)胞核內(nèi)，未見核外陽性產(chǎn)物。ERα免疫陽性細(xì)胞數(shù)量較多但是染色淺，主要見于大細(xì)胞部的內(nèi)側(cè)（圖1a）；ERβ