醫(yī)學(xué)免疫學(xué)8.細(xì)菌的檢查方法

1、,細(xì)菌學(xué)診斷,標(biāo)本采集和送檢六原則,避免雜菌污染,不同期不同標(biāo)本,用抗生素以前,采集病變明顯部位,,,,,,,,,,,,,標(biāo)本作好標(biāo)記,標(biāo)本必須新鮮,顯微鏡放大法： 普通光學(xué)顯微鏡 ：0.25um 0.25mm 電子顯微鏡：透射電鏡、掃描電鏡染色法,,病原菌檢測,細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查,結(jié)晶紫1min,盧戈碘 1min,95%乙醇30s,稀釋復(fù)紅 30s,的意義1.將細(xì)菌區(qū)分為2大類,Gram St

2、ain,2.指導(dǎo)選擇抗菌藥物3.用于細(xì)菌致病性等方面的研究,直接涂片鏡檢 形態(tài)和染色性具有特征的致病菌，直接涂片染色后鏡檢有助初步診斷。 痰液 抗酸性細(xì)長桿菌 結(jié)核桿菌 腦脊液 淤血點(diǎn) 腎形,G-雙球菌 腦膜炎奈瑟菌 膿液 G+葡萄串狀球菌 葡萄球菌,,,,,,,,病原菌檢測,分離培養(yǎng)和鑒定 確診細(xì)菌感染性疾病最可靠的方法（金標(biāo)準(zhǔn)),有助于選用抗菌藥物及評價(jià)療效。 ①

3、普通培養(yǎng)法（需氧培養(yǎng)法） ②高滲培養(yǎng)法 ③厭氧培養(yǎng)法,病原菌檢測,臨床標(biāo)本,,預(yù)處理,,增 菌,,接種培養(yǎng)基，分離單個(gè)菌落,,,,,,,,各種鑒定試驗(yàn),涂片染色,,快速診斷試驗(yàn),,生化試驗(yàn),血清學(xué)實(shí)驗(yàn),,,,涂片染色,,藥敏試驗(yàn),,動(dòng)物試驗(yàn),,初步診斷報(bào)告,,,一般檢驗(yàn)程序,病原學(xué)診斷,分離培養(yǎng)和鑒定 ①培養(yǎng)特征：營養(yǎng)、生長條件、 菌落特征 ②形態(tài)特征：細(xì)菌

4、形態(tài)、排列、 染色性 ③生化反應(yīng)：檢測細(xì)菌對各種基質(zhì)（糖類和蛋白質(zhì)）的代謝作用和代謝產(chǎn)物的差異，借以區(qū)別和鑒定細(xì)菌。,病原菌檢測,生化反應(yīng) 如:幽門螺桿菌尿素酶分解尿素產(chǎn)氨,使培養(yǎng)液變堿,pH指示劑變色。 微量、快速、半自動(dòng)或自動(dòng)細(xì)菌生化鑒定和細(xì)菌藥敏分析系統(tǒng)，使病原菌檢出水平提高，時(shí)間縮短。,病原菌檢測,病原菌檢測,血清學(xué)試驗(yàn) 用含已知特異性抗體的免疫血清

5、，可有效檢出標(biāo)本中極微量細(xì)菌特異抗原，或與分離培養(yǎng)出的未知純種細(xì)菌進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)，確定致病菌的種或型。 常用方法有玻片凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、協(xié)同凝集、乳膠凝集、免疫電泳、間接血凝等試驗(yàn)。,病原菌檢測,動(dòng)物試驗(yàn)利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可進(jìn)行病原菌的分離鑒定，檢測細(xì)菌毒力等。 常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有小鼠,豚鼠和家兔等。 接種途徑有皮內(nèi)、皮下、腹腔、肌肉、靜脈等。,病原菌檢測,藥物敏感試驗(yàn) 紙片法 試管稀釋法,

6、病原菌檢測,其他方法 分子生物學(xué)技術(shù) 核酸雜交技術(shù) PCR 生物芯片技術(shù),聚合酶鏈反應(yīng)是一種模擬天然DNA復(fù)制的體外擴(kuò)增法，其基本原理如下：加熱使雙鏈DNA解開螺旋↓在退火溫度條件下引物同模板雜交↓在Taq DNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物↓重復(fù)上述變性→退火→引物延伸過程至25-40個(gè)循環(huán)。靶序列被擴(kuò)增上百萬倍，達(dá)到體外擴(kuò)增核酸

7、序列的目的。,PCR技術(shù),核酸雜交技術(shù),雜交方法是一種分子生物學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，用于檢測DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。 DNA或RNA先轉(zhuǎn)移并固定到硝酸纖維素或尼龍膜上，與其互補(bǔ)的單鏈DNA或RNA探針用放射性或非放射性標(biāo)記。 在膜上雜交時(shí)，探針通過氫鍵與其互補(bǔ)的靶序列結(jié)合，洗去未結(jié)合的游離探針后，經(jīng)放射自顯影或顯色反應(yīng)檢測特異結(jié)合的探針。,生物芯片技術(shù),該技術(shù)系指將大量（通常每平方厘米點(diǎn)陣密度高