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1、第一向等電聚焦(IEF)圖示:圖示:EttanIPGph3等電聚焦儀器和等電聚焦儀器和EttanIPGph3控制軟件控制軟件雙向電泳的第一向IEF電泳采用IPGph,實(shí)驗(yàn)將變得很簡(jiǎn)單。IPGph包括半導(dǎo)體溫控系統(tǒng)(18C25C)和程序化電源(8000V,1.5mA)??刹捎闷胀ㄐ湍z條槽一步完成膠條的水化、上樣和電泳,大大減少操作步驟。IPGph一次可進(jìn)行12個(gè)膠條槽的電泳(71113,18,24cm),因采用高電壓(8000V),可縮短
2、聚焦時(shí)間。最新推出的通用型杯上樣膠條槽因采用可移動(dòng)的上樣杯和電極,適合任何長度的IPG膠條,尤其適合極性等電點(diǎn)蛋白的分離。1IPG膠條的水化和電泳(1)儀器:IPGph(2)試劑:水化液(8M尿素,2%CHAPS,15mMDTT和0.5%IPG4)IPG膠條上覆蓋適量(1.5mL)ImmobilineDryStrip覆蓋油(從兩側(cè)往中間加),蓋上蓋子。5)將標(biāo)準(zhǔn)型膠條槽的尖端背面電極與IPGph儀器的陽極平臺(tái)接觸;膠條槽的平端背面電極與
3、IPGph儀器的陰極平臺(tái)接觸(在此過(在此過程中,需用水平儀檢查平臺(tái)是否平衡,然后用兩塊白色條形板壓在膠程中,需用水平儀檢查平臺(tái)是否平衡,然后用兩塊白色條形板壓在膠條槽上,最后蓋上條槽上,最后蓋上IPGph的蓋子)的蓋子)。6)設(shè)置IPGph儀器運(yùn)行參數(shù):IPG膠條水化的電壓,溫度和時(shí)間;等電聚焦電泳時(shí)的梯度電壓和溫度。電泳參數(shù)見表2.2。表2.2:IPGph運(yùn)行條件運(yùn)行條件步驟電壓時(shí)間S1Stp30V11:00HrS2Stp100V1
4、:00HrS3Grd1000V1:00HrS4Grd8000V2:00HrS5Stp8000V50000VhrS6Stp500V12:00Hr低電壓時(shí)水化,有利于高分子量蛋白進(jìn)入膠中,并減少蛋白形成聚集體。低電壓時(shí)水化,有利于高分子量蛋白進(jìn)入膠中,并減少蛋白形成聚集體。7)IPG膠條水化后可自動(dòng)進(jìn)行等電聚焦電泳。8)暫時(shí)不進(jìn)行第二向的IPG膠條可夾在兩層塑料薄膜中于80C保存幾個(gè)月。注意:不推薦每條IPG膠條的電流超過50μA,因?yàn)檫@有
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