保健食品的毒理和功能學(xué)檢驗(yàn)及評(píng)價(jià)

1、保健食品毒理和功能檢驗(yàn)及評(píng)價(jià),仲 偉 鑒上海市疾病預(yù)防控制中心,2010.10,主要內(nèi)容提綱,中國(guó)保健食品簡(jiǎn)介 保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià) 保健食品新原料安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)原則 保健食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)中存在的問(wèn)題 保健食品功能性檢驗(yàn)與評(píng)價(jià) 保健食品功能評(píng)價(jià)方法更改情況,第一部分,中國(guó)保健食品簡(jiǎn)介,第二部分,保健食品安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)及評(píng)價(jià),主 要 內(nèi) 容,檢驗(yàn)評(píng)價(jià)依據(jù) 審評(píng)基本要求 選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則

2、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 樣品的預(yù)處理原則 毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介紹 毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)考慮的問(wèn)題 審評(píng)結(jié)論的判定,毒性及功能檢驗(yàn)評(píng)價(jià)依據(jù),1996年3月衛(wèi)生部《保健食品的管理方法》 保健食品的標(biāo)準(zhǔn)、功能評(píng)價(jià)、審批程序和監(jiān)督管理辦法1996年7月GB15193《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》 衛(wèi)生部《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》 僅包含了12項(xiàng)功能檢驗(yàn)及評(píng)價(jià)方法2001年7月 衛(wèi)生部《保健

3、食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》 可受理和評(píng)價(jià)的功能調(diào)整到31項(xiàng)2003年2月衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》 將功能學(xué)、毒理學(xué)、功效成分及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)方法三者合一,審評(píng)的基本要求,1. 配方 原（輔）料、用量、理化性質(zhì)2. 劑量 食用方法及用量3. 工藝 規(guī)格化產(chǎn)品 符合配方、工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)4. 批號(hào) 注意批號(hào)是否一致,益生菌、奶制品等保

4、質(zhì)期短的除外,1. 毒理學(xué)評(píng)價(jià)的四個(gè)階段第一階段：急性毒性試驗(yàn) 經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)：LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗(yàn)第二階段：遺傳毒性試驗(yàn)，30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 遺傳毒性試驗(yàn)：原核細(xì)胞和真核細(xì)胞，體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)相結(jié)合Ames或基因突變?cè)囼?yàn)；微核試驗(yàn)或染色體畸變?cè)囼?yàn)；精子畸變?cè)囼?yàn)等第三階段：亞慢性毒性試驗(yàn) 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)、繁殖試驗(yàn)、代謝試驗(yàn)第四階段：慢性毒性試驗(yàn)（包括致癌試驗(yàn)）,選

5、擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則,2.無(wú)需進(jìn)行毒性試驗(yàn)的保健食品以普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)為原料生產(chǎn)的； 1）以傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)且食用方式與傳統(tǒng)方式相同的 2）以水提物配制生產(chǎn)、服用量為原料常規(guī)用量，且資料未提示具有不安全性用已列入營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑或營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑名單的營(yíng)養(yǎng)素化合物為原料的，如其原料來(lái)源、生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量均符合國(guó)家有關(guān)要求；,選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則,3. 需進(jìn)行一階段和三項(xiàng)致突變毒性試驗(yàn)的保健食品 屬于普通食品

6、和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)且用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的：（1）服用量與常規(guī)用量相同 急性毒性、三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)（2）服用量大于常規(guī)用量 還需加做30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，必要時(shí)進(jìn)行傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)和第三階段毒性試驗(yàn),選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則,選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則,4. 需進(jìn)行一、二階段毒性試驗(yàn)的保健食品 以普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)以及允許用作保健食品的物質(zhì)以外的動(dòng)植物或動(dòng)植物提取物、微生物、化學(xué)合成

7、物等為原料生產(chǎn)的保健食品，原則上須進(jìn)行第一、二階段的毒性試驗(yàn)，必要時(shí)進(jìn)行下一階段的毒性試驗(yàn)。衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動(dòng)植物及其提取物或微生物為原料的。,5.需進(jìn)行一至三階段毒性試驗(yàn)的情況：一、二階段試驗(yàn)結(jié)果與國(guó)外產(chǎn)品不一致的國(guó)外少數(shù)國(guó)家或地區(qū)食用的原料或成分水提取物，大于常規(guī)服用量用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量,選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則,6.需進(jìn)行一至四階段毒性試驗(yàn)的原料和成分國(guó)內(nèi)外均無(wú)食用先例7.敏感指標(biāo)及

8、敏感試驗(yàn)的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品,選擇毒理學(xué)試驗(yàn)的基本原則,對(duì)受試保健食品的要求,單一已知化學(xué)成分，應(yīng)提供物理和化學(xué)性質(zhì) 多種原料的配方產(chǎn)品，應(yīng)提供配方 配方產(chǎn)品，必要時(shí)還應(yīng)提供各組分，功效成分的 物理和化學(xué)性質(zhì)及其檢測(cè)報(bào)告 提供原料來(lái)源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使 用說(shuō)明書(shū)等有關(guān)資料 受試物應(yīng)符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇及給樣量,1.根據(jù)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的具體要求，合理選擇

9、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。2.動(dòng)物應(yīng)符合《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》 清潔級(jí)或清潔級(jí)以上 動(dòng)物合格證號(hào)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室合格證號(hào)3.灌胃量 大鼠：10 ml/kg?BW（若以水為溶劑，推薦 20 ml/kg?BW） 小鼠：20ml/kg?BW,樣品的預(yù)處理原則,1.介質(zhì)的選擇 應(yīng)選擇適合于受試動(dòng)物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無(wú)毒、與受試物不發(fā)生反應(yīng)、

10、穩(wěn)定性好。 常用的介質(zhì)有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基纖維素等。2.液體類(lèi) 受試物濃縮倍數(shù)應(yīng)符合試驗(yàn)要求。 濃縮方法不應(yīng)破壞其有效成份，常用的有60℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。 按工藝要求。,樣品的預(yù)處理原則,3.袋泡茶類(lèi) 處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同 推薦用：80℃--90℃ 常壓用水浸泡30min 水量為受試物的10倍，提取2次，2次提取液合并濃縮

11、至所需濃度 標(biāo)明該濃縮液與受試物的比例,樣品的預(yù)處理原則,4.含乙醇類(lèi)（1）不需濃縮的受試物 乙醇濃度15％ 乙醇濃度應(yīng)調(diào)至15％（2）需濃縮的受試物 乙醇濃度15％ 濃縮后調(diào)至15％乙醇濃度 在進(jìn)行乙醇濃度調(diào)整時(shí)必須用原酒基,樣品的預(yù)處理原則,5.膨脹系數(shù)較高的受試物 選擇可溶性介質(zhì) 給受試物的方法：灌胃 其最高濃度最大灌胃量時(shí)達(dá)不到人體推薦量的1

12、00倍，按采用實(shí)際達(dá)到的倍數(shù) 標(biāo)明受試物的膨脹系數(shù),樣品的預(yù)處理原則,6.益生菌等微生物類(lèi)保健食品 在進(jìn)行 Ames試驗(yàn)或體外細(xì)胞試驗(yàn)時(shí)需將受試物滅活。 需濃縮的應(yīng)采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方法、技術(shù)參數(shù)）。7.以食品為載體的受試物 （1）有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值：按設(shè)計(jì)量進(jìn)行飼料的營(yíng)養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細(xì)的說(shuō)明。 （2）大豆蛋白、乳清蛋白 如質(zhì)量、工藝等符合食品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。

13、 如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請(qǐng)免做毒理學(xué)試驗(yàn)。,毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介紹,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Ames）試驗(yàn) 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 小鼠精子畸形試驗(yàn) 小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn) 30天喂養(yǎng)試驗(yàn),急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),目的：測(cè)定LD50，毒性分級(jí)。了解毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供劑量和觀(guān)察指標(biāo)的選擇依據(jù)。原理：急性毒性：經(jīng)口一次性、24h內(nèi)多次給予，短時(shí)間內(nèi)的

14、毒性反應(yīng)。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量LD50表示。急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計(jì)算和判定標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定這三種不同的作用。,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),時(shí)間周期：一般為3周 3-5天，大、小鼠適應(yīng)期 7-14天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀(guān)察期 發(fā)生動(dòng)物死亡時(shí)，應(yīng)進(jìn)行大體解剖觀(guān)察和評(píng)價(jià)指標(biāo)：毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的異常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿

15、系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化死亡情況：死亡的時(shí)間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。大體尸檢結(jié)果：如果發(fā)生死亡動(dòng)物,急性毒性（LD50）劑量分級(jí)表,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果的判定：1. LD50＜人可能攝入量的100倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗(yàn)。2. LD50≥10g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動(dòng)物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗(yàn)。,鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Ames）試驗(yàn),目的：檢測(cè)受試物的誘變性，預(yù)測(cè)其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性。 時(shí)間周

16、期：一般為2周 第一周，鼠傷寒沙門(mén)氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備 第二周，染毒，培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)劑量設(shè)計(jì)：決定受試物最高劑量的因素是對(duì)細(xì)菌的毒性及其溶解度。最低劑量為0.2ug/皿；最高劑量為5mg/皿，或最大溶解劑量，最大飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O(shè)五個(gè)劑量組，組間距不超過(guò)5倍。同時(shí)設(shè)：陽(yáng)性對(duì)照組，溶劑對(duì)照組和未處理對(duì)照組。,鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Ames）試驗(yàn),觀(guān)察及評(píng)價(jià)指標(biāo)： 各受試物組及三個(gè)對(duì)照組的四種菌株（

17、TA97a，TA98，TA100和TA102）分別在加和不加S9情況下的菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果評(píng)價(jià)（摻入法）： 受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)≥2×未處理對(duì)照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù)的陽(yáng)性反應(yīng)，即可判試驗(yàn)陽(yáng)性。,骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),目的：檢測(cè)整體動(dòng)物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率，以評(píng)價(jià)受試物致突變的可能性。原理：微核是在細(xì)胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進(jìn)入子細(xì)胞形成細(xì)胞核時(shí)，仍然留在細(xì)胞質(zhì)中的色單

18、體或染色體的無(wú)著絲點(diǎn)斷片 。末期之后，單獨(dú)形成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核，被包含在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱(chēng)為微核。,骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),時(shí)間周期：一般為2周 3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口染毒，30h給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢劑量設(shè)計(jì)：至少設(shè)置3個(gè)劑量，最高劑量組為動(dòng)物出現(xiàn)嚴(yán)重中毒表現(xiàn)和/或個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒性反應(yīng)。一般取LD50的1/2、1/4、1/8作為三個(gè)劑量。當(dāng)受

19、試物的LD50≥10g/kg.bw時(shí)，最高劑量通常采用10g/kg.bw。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組和溶劑對(duì)照組。,骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),觀(guān)察及評(píng)價(jià)指標(biāo)：每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞 ，記錄含有微核的細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算微核千分率。同時(shí)觀(guān)察嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比例。 結(jié)果評(píng)價(jià)：受試物組與對(duì)照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),目的：檢測(cè)受試物對(duì)整體動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變的致突變

20、性，以評(píng)價(jià)其致突變的可能性。原理：當(dāng)受試物作用于細(xì)胞周期G1期和S期時(shí)，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2期時(shí)則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動(dòng)物腹腔注射秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時(shí)紡錘體的形成，增加中期分裂相細(xì)胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀(guān)察染色體數(shù)目和形態(tài)。,哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),時(shí)間周期：一般為3周 3-5天適應(yīng)期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒2-4次，每次間隔24h，在末次染毒18-24h

21、進(jìn)行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢劑量設(shè)計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),觀(guān)察及評(píng)價(jià)指標(biāo)：每只動(dòng)物分析100個(gè)中期相細(xì)胞 ，每個(gè)劑量組不少于1000個(gè)。記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果評(píng)價(jià)：受試物組與對(duì)照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,小鼠精子畸形試驗(yàn),目的：檢測(cè)整體動(dòng)物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評(píng)價(jià)受試物對(duì)體內(nèi)

22、生殖細(xì)胞的致突變作用。原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及其蛋白產(chǎn)物的改變。,小鼠精子畸形試驗(yàn),時(shí)間周期：一般為7周 3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，于首次給樣后的35天處死動(dòng)物 取兩側(cè)附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢劑量設(shè)計(jì)：同骨髓

23、細(xì)胞微核試驗(yàn),小鼠精子畸形試驗(yàn),觀(guān)察及評(píng)價(jià)指標(biāo)：每只動(dòng)物檢查1000個(gè)精子 ，記錄精子畸形數(shù)目及類(lèi)型。結(jié)果評(píng)價(jià)：受試物組與對(duì)照組精子畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn),目的：檢測(cè)整體動(dòng)物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評(píng)價(jià)受試物對(duì)整體哺乳動(dòng)物睪丸生殖細(xì)胞的致突變性。原理：不同周期的雄性生殖細(xì)胞對(duì)化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同，多數(shù)情況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必須經(jīng)過(guò)DNA復(fù)制期，故在前細(xì)線(xiàn)期處

24、理。第12～14d采樣，以觀(guān)察作用于前細(xì)線(xiàn)期引起的精母細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)。,小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn),時(shí)間周期：一般為7周 3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，與首次給樣后的12-14天處死動(dòng)物取材，（取材前6h，腹腔注 射秋水仙素）。取兩側(cè)睪丸，收集生殖細(xì)胞，滴片，染色，鏡檢劑量設(shè)計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn),觀(guān)察及評(píng)價(jià)指標(biāo)：每只動(dòng)物分析100個(gè)中期相細(xì)胞 ，記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變（包

25、括斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常染色體單價(jià)體、性染色體單價(jià)體等）。結(jié)果評(píng)價(jià)：受試物組與對(duì)照組的斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常染色體單價(jià)體、性染色體單價(jià)體等差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,遺傳毒性試驗(yàn)組合,試驗(yàn)結(jié)果的判定：如三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)，微核或骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，精子畸形或睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn)）中，體外或體內(nèi)有一項(xiàng)或以上陽(yáng)性，一般應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。如三項(xiàng)試驗(yàn)均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性試驗(yàn)。,30天喂

26、養(yǎng)試驗(yàn),目的：急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，此試驗(yàn)可進(jìn)一步了解毒性作用，特別是觀(guān)察對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的影響，并可初步估計(jì)最大觀(guān)察到的無(wú)作用劑量，估計(jì)亞慢性攝入的危害性。原理： 以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，連續(xù)30天。染毒期間每日密切觀(guān)察動(dòng)物的毒性反應(yīng)，染毒結(jié)束后進(jìn)行大體解剖、血生化及病理檢查，以此觀(guān)察重復(fù)喂食不同劑量的受試物對(duì)動(dòng)物引起的有害作用。,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),時(shí)間周期：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為2月 3-5天，大鼠適

27、應(yīng)期 30天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀(guān)察期 再進(jìn)行大體解剖、血液、生化、器官病 理檢查。,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),劑量設(shè)計(jì)：至少設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組。高劑量應(yīng)能引起動(dòng)物明顯毒效應(yīng)但不造成動(dòng)物死亡。低劑量應(yīng)不出現(xiàn)任何毒作用，同時(shí)在這二劑量之間設(shè)幾個(gè)中間劑量組。 對(duì)于能獲得LD50的受試物：最高劑量為10％～25％的LD50，最低劑量組至少為人可能攝入量的3倍。 對(duì)于不能獲得LD50的受試物：最高

28、劑量為人可能攝入量的100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻入量。,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),觀(guān)察及評(píng)價(jià)指標(biāo)：一般情況觀(guān)察：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每周1次體重及2次食物攝入量，計(jì)算食物利用率。血液學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定血紅蛋白、紅和白細(xì)胞總數(shù)及分類(lèi)，必要時(shí)測(cè)定血小板或網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)。生化學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、總蛋白、膽固醇和甘油三酯。病理檢查：大體解剖、臟器稱(chēng)重、組織

29、病理學(xué)檢查。,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果的判定： 對(duì)于只要求進(jìn)行一、二階段試驗(yàn)者，最大未觀(guān)察到有害作用劑量≥人可能攝入量的100倍，綜合其它試驗(yàn)結(jié)果可初步做出安全性評(píng)價(jià)。 最小觀(guān)察到有害作用劑量≤人可能攝入量的100倍，或觀(guān)察到毒性反應(yīng)的最小劑量組其受試物在飼料中比例≤10％，放棄。 在中低劑量組中個(gè)別指標(biāo)與對(duì)照組相比有差異，應(yīng)綜合分析，決定取舍或進(jìn)行下一步毒理試驗(yàn)。,其它試驗(yàn)結(jié)果判斷,傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)： 需大于

30、或等于人攝入量的100倍。在50倍至100倍之間需進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，小于50倍需放棄。 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)、繁殖試驗(yàn)：1.僅在國(guó)外少數(shù)國(guó)家或國(guó)內(nèi)局部地區(qū)有食用歷史的原料或成分，需大于或等于人攝入量的100倍。2.國(guó)內(nèi)外均無(wú)食用歷史的原料或成分時(shí)，需大于或等于人攝入量的300倍。在100倍至300倍之間需進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)，小于100倍需放棄。,其它試驗(yàn)結(jié)果判斷,慢性毒性試驗(yàn)： 以L(fǎng)D50或30天喂養(yǎng)試驗(yàn)的最大未觀(guān)察到有害作用劑量設(shè)計(jì)

31、受試物各劑量組，未見(jiàn)有毒性作用。 致癌試驗(yàn)陽(yáng)性判定依據(jù)：腫瘤只發(fā)生在實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物，對(duì)照組中無(wú)腫瘤發(fā)生。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均發(fā)生腫瘤，但實(shí)驗(yàn)組發(fā)生率高。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組腫瘤發(fā)生率無(wú)明顯差異，但實(shí)驗(yàn)組發(fā)生時(shí)間較早。符合以上三項(xiàng)中的情況之一，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可認(rèn)為致癌試驗(yàn)陽(yáng)性。,安全性評(píng)價(jià)的科學(xué)性和藝術(shù)性,安全性評(píng)價(jià)的藝術(shù)性：1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人必須考慮動(dòng)物與人的種屬差異；2.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會(huì)經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)、技術(shù)能力的相符性；

32、3.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會(huì)和公眾利益之間的平衡性。結(jié)論：在對(duì)化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行科學(xué)地安全性評(píng)價(jià)之后，應(yīng)結(jié)合試驗(yàn)的局限性，社會(huì)經(jīng)濟(jì)狀況，人們的生活習(xí)慣等因素，對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果作出一個(gè)合理的分析，為衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的制定提供具有實(shí)際指導(dǎo)意義的依據(jù)。,應(yīng)綜合考慮的問(wèn)題,1.試驗(yàn)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和生物學(xué)意義 在分析試驗(yàn)組與對(duì)照組指標(biāo)統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性時(shí)，應(yīng)根據(jù)其有無(wú)劑量反應(yīng)關(guān)系及與本實(shí)驗(yàn)室的歷史性對(duì)照值范圍比較的原則,來(lái)綜合考慮指標(biāo)差異有無(wú)生物學(xué)意義。2.

33、生理作用與毒性作用 對(duì)實(shí)驗(yàn)中某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)果分析時(shí)要注意區(qū)分是生理學(xué)表現(xiàn)還是受試物的毒性作用。,應(yīng)綜合考慮的問(wèn)題,3.時(shí)間-毒性效應(yīng)關(guān)系 對(duì)由受試物引起的毒性效應(yīng)進(jìn)行分析評(píng)價(jià)時(shí)，要考慮在同一劑量水平下毒性效應(yīng)隨時(shí)間的變化情況。4.特殊人群和敏感人群 對(duì)孕婦、乳母或兒童食用的保健食品，應(yīng)特別注意其胚胎毒性或生殖發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性和免疫毒性。,應(yīng)綜合考慮的問(wèn)題,5.人的可能攝入量較大的保健食品

34、 應(yīng)考慮給予受試物量過(guò)大時(shí)，可能影響營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入量及其生物利用率，從而導(dǎo)致某些毒理學(xué)表現(xiàn)，而非受試物本身的毒性作用所致。6.含乙醇的保健食品 對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)果分析評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)注意區(qū)分是乙醇本身還是其它成分的作用。,應(yīng)綜合考慮的問(wèn)題,7.動(dòng)物年齡對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響 對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，要考慮是否因動(dòng)物年齡選擇不當(dāng)所致。8.安全系數(shù) 鑒于動(dòng)物、人的種屬和個(gè)體之

35、間的生物學(xué)差異，安全系數(shù)通常為100。,應(yīng)綜合考慮的問(wèn)題,9.人體資料 在評(píng)價(jià)保健食品的安全性時(shí)，應(yīng)盡可能收集人群食用受試物后反應(yīng)的資料。10.綜合評(píng)價(jià) 在對(duì)保健食品進(jìn)行最后評(píng)價(jià)時(shí)，必須綜合考慮受試物的原料來(lái)源、理化性質(zhì)、毒性大小、代謝特點(diǎn)、蓄積性、接觸的人群范圍、食品中的使用范圍、人的可能攝入量及保健功能等因素，確保其對(duì)人體健康的安全性。,應(yīng)綜合考慮的問(wèn)題,11.保健食品安全性的重新評(píng)價(jià)：很早的毒性評(píng)價(jià)可 能

36、因?yàn)楫?dāng)時(shí)科學(xué)水平和技術(shù)條件的限制，現(xiàn)已不適用需重新評(píng)價(jià)。12.若受試物摻入飼料的最大加入量（10％）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達(dá)不到最大觀(guān)察到有害作用劑量為人的可能攝入量的規(guī)定倍數(shù)時(shí)，如何綜合其它的毒性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。,審評(píng)結(jié)論的判定,1.認(rèn)可毒理學(xué)試驗(yàn)：試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，操作規(guī)范，試驗(yàn)結(jié)果能夠證明受試物的安全性。2.屬以下幾種情況之一，補(bǔ)充資料后建議批準(zhǔn)：（1）檢驗(yàn)報(bào)告格式不規(guī)范，需要重新出具檢驗(yàn)報(bào)告毒理學(xué)試驗(yàn)報(bào)告。（2）數(shù)據(jù)

37、偏離歷史對(duì)照較大，需檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)做出解釋。（3）未提供某些試驗(yàn)數(shù)據(jù)，需要補(bǔ)充提供。,審評(píng)結(jié)論的判定,3.重做試驗(yàn)，大會(huì)再審，屬以下幾種情況之一：（1）由于實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，根據(jù)提供的檢驗(yàn)報(bào)告無(wú)法評(píng)價(jià)產(chǎn)品的安全性，需要做除30天/90天喂養(yǎng)試驗(yàn)以外的毒理學(xué)試驗(yàn)；（2）已有數(shù)據(jù)提示可能存在安全性問(wèn)題，但難以下結(jié)論，需要重復(fù)試驗(yàn)。,（1）毒理學(xué)評(píng)價(jià)的結(jié)果表明產(chǎn)品在推薦劑量下對(duì)人體具有一定的毒性，存在安全性問(wèn)題。（2）產(chǎn)品的原料、配方存在明顯

38、的安全性問(wèn)題，如配方含有“可用于保健食品的原料”名單以外的原料，且未進(jìn)行新資源食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)。（3）選擇安全性毒理學(xué)試驗(yàn)不符合程序規(guī)定，未完成相應(yīng)階段的毒理學(xué)試驗(yàn)。,4.對(duì)產(chǎn)品的安全性不予認(rèn)可的情況如下（一）：,（4）毒理、功能、興奮劑與衛(wèi)生學(xué)、穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品的批號(hào)不一致。（5）未按規(guī)定提供安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)資料的。（6）30天/90天喂養(yǎng)試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)不合理或某些指標(biāo)異常，結(jié)果不可信。,4.對(duì)產(chǎn)品的安全性不予認(rèn)可的情況如下(二

39、)：,第三部分,保健食品新原料安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)原則,保健食品新原料（以下簡(jiǎn)稱(chēng)新原料）是指不在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品、衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)可以食用以及生產(chǎn)普通食品的范圍內(nèi)，擬用于保健食品的原料。 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局和國(guó)家有關(guān)部門(mén)規(guī)定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作為新原料。,保健食品新原料定義,在已批準(zhǔn)的保健食品中使用過(guò)，或衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為新資源食品的原料，符合以下情況的仍按新原料進(jìn)行管理：未列入

40、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品的物品名單；尚未列入衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)的食品新資源或新資源食品名單內(nèi)；衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為食品新資源或新資源食品，但保健食品注冊(cè)申請(qǐng)人與食品新資源或新資源食品生產(chǎn)批件中載明的申報(bào)單位不一致。,保健食品新原料定義,評(píng)價(jià)新原料安全性的基本原則,符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和衛(wèi)生要求，無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)當(dāng)提供行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或自行制定并在相關(guān)部門(mén)備案的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；新原料的名稱(chēng)、物種（基源）、生物學(xué)或生態(tài)學(xué)特征、來(lái)源及使用部位應(yīng)確切；

41、加工工藝安全合理，質(zhì)量穩(wěn)定、可控；主要成分（或組成）、化學(xué)結(jié)構(gòu)明確，含量穩(wěn)定；適宜人群范圍和可能攝入量明確，確定依據(jù)充分；,評(píng)價(jià)新原料安全性的基本原則,國(guó)內(nèi)外安全性毒理學(xué)文獻(xiàn)資料、人體食用情況的檢索報(bào)告及流行病學(xué)資料顯示，該新原料無(wú)食用中毒或有害作用史；安全性毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示，該原料在可能攝入量下對(duì)人體不產(chǎn)生急性、慢性或其它潛在的健康危害；微生物類(lèi)新原料必須有食用習(xí)慣和安全食用歷史，培養(yǎng)基、菌種及其代謝產(chǎn)物必須無(wú)毒無(wú)害。,新原

42、料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 ①無(wú)食用史 需做四階段試驗(yàn) ②局部地區(qū)有食用史 需做三階段試驗(yàn) 可只做一、二階段實(shí)驗(yàn)的包括 1）推薦食用量未超過(guò)人群常規(guī)用量的新原料，若根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)資料及成分分析，未發(fā)現(xiàn)有毒或毒性甚微不至對(duì)健康構(gòu)成損害，或者較大數(shù)量人群有長(zhǎng)期食用歷史且未發(fā)現(xiàn)有害作用的 2）已有權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)，且有資料證明所用原料與其一致 如試驗(yàn)結(jié)果與權(quán)威機(jī)構(gòu)

43、進(jìn)行的評(píng)價(jià)不一致，需進(jìn)入下階段的試驗(yàn),新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)要求,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 ③ 多個(gè)國(guó)家或國(guó)內(nèi)多數(shù)地區(qū)廣泛食用 1）推薦食用量未超過(guò)人群常規(guī)用量：先進(jìn)行第一、二階段毒性試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果決定是否進(jìn)行下一階段毒理學(xué)試驗(yàn) 2）推薦食用量超過(guò)人群常規(guī)用量：進(jìn)行第一、二、三階段的毒性試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果決定是否進(jìn)行第四階段毒性試驗(yàn)。,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)要求,新原料安全性毒理學(xué)試

44、驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 ④ 根據(jù)新原料的特性、作用機(jī)制、已有的試驗(yàn)資料及產(chǎn)品的適宜人群等信息，有針對(duì)性地選擇敏感試驗(yàn)、敏感動(dòng)物、敏感指標(biāo)，以全面了解新原料的毒性。,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)要求,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)要求,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 ⑤ 微生物類(lèi)新原料除按上述要求進(jìn)行安全性毒理學(xué)試驗(yàn)外，還應(yīng)進(jìn)行以下試驗(yàn)： 1）菌種毒力試驗(yàn)； 2）耐藥性試驗(yàn)； 3）有可能產(chǎn)生抗菌素、真菌毒素或其他活性物質(zhì)的菌種，應(yīng)進(jìn)行

45、有關(guān)抗菌素、真菌毒素或其他活性物質(zhì)的檢測(cè)； 4）菌種代謝產(chǎn)物分析及其不產(chǎn)生有毒有害作用的試驗(yàn)。,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)要求,毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)1、高劑量組應(yīng)出現(xiàn)毒性作用但不引起動(dòng)物死亡，低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒性作用，并求出未觀(guān)察到有害作用劑量（NOAEL）。2、若根據(jù)已掌握的資料（包括第一、二階段的毒性試驗(yàn)及預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果等）判定新原料毒性較小，或人體推薦量較大，則試驗(yàn)最高劑量應(yīng)為可給予的最大劑量（即：飼料中最大摻入量或最大灌胃濃度

46、下一次最大灌胃量）。,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)要求,毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果新原料的未觀(guān)察到有害作用劑量（NOAEL）應(yīng)大于或等于人群可能攝入量的100倍；如果人體推薦攝入量較大，試驗(yàn)中可給予的最大劑量小于人群可能攝入量的100倍，則在可給予的最大劑量下不應(yīng)觀(guān)察到有害作用。,第四部分,保健食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)中存在的問(wèn)題,存在的問(wèn)題,鑒于制訂此程序的歷史背景與目前情況有所不同，因此，對(duì)保健食品的安全性評(píng)價(jià)時(shí)，出現(xiàn)了選擇毒理試驗(yàn)的項(xiàng)目、劑量、樣

47、品前處理等問(wèn)題，現(xiàn)就上述問(wèn)題一并提出供討論。,存在的問(wèn)題,充分了解受試物1.要求提供規(guī)格化產(chǎn)品，至少是中試產(chǎn)品。符合既定的配方，生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2.仔細(xì)閱讀配方以了解受試物的物理、化學(xué)性質(zhì)（包括化學(xué)結(jié)構(gòu)、純度、穩(wěn)定性等）。3.了解生產(chǎn)工藝。4.按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的最大人體推薦量進(jìn)行劑量設(shè)計(jì)。,存在的問(wèn)題,動(dòng)物年齡 主要指30天和90天喂養(yǎng)試驗(yàn)，“程序”中規(guī)定用離乳大鼠，而保健食品應(yīng)視具體情況而異。最典型的是人參、鹿茸、減肥

48、產(chǎn)品，并非受試物本身有毒影響了動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，而是因?yàn)檫@類(lèi)產(chǎn)品的服用對(duì)象是成人，所用的動(dòng)物是離乳大鼠。,存在的問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的選擇配方中含有僅限局部地區(qū)人群食用而又不在“51號(hào)”名單上的原料，只對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行了兩階段毒理試驗(yàn)，而未對(duì)原料本身按要求進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)，有的進(jìn)行了評(píng)價(jià)但給予動(dòng)物受試物的方式與實(shí)際食用方式不一樣，如袋泡茶摻在飼料中給予動(dòng)物。含“51號(hào)”文附錄二名單上原料的產(chǎn)品只做了LD50和三項(xiàng)致空變?cè)囼?yàn)。,存在的問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的

49、選擇藥食同源產(chǎn)品經(jīng)有機(jī)溶劑提取未做毒理試驗(yàn)，或只做LD50和微核試驗(yàn)。從食品中提取某一成分的粗提物只做了LD50和三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)，如大豆異黃酮。配方中僅有單一成分，如人參、西洋參、蜂王漿不必進(jìn)行全部二階段毒理試驗(yàn)。,存在的問(wèn)題,樣品前處理（一）液體類(lèi)（二）酒類(lèi)（三）固體類(lèi)（四）菌類(lèi)（五）以某些食品為載體的保健食品：如富含微量元素的雞蛋、南瓜粉等,存在的問(wèn)題,LD50中存在的問(wèn)題 1.經(jīng)口LD50還用對(duì)照組。 2.

50、不寫(xiě)禁食時(shí)間。 3.做到了21.5g/KgBW,結(jié)論是﹥10g/KgBW。 4.將受試物摻入飼料吃24小時(shí)。,存在的問(wèn)題,Ames實(shí)驗(yàn) 1.以油為載體的產(chǎn)品直接倒入平皿 2.工藝是低溫提取或低溫冷凍干燥的產(chǎn)品用8磅15分鐘高壓滅菌。 3.有溶劑對(duì)照而無(wú)自發(fā)回變對(duì)照。 4.菌落回變數(shù)隨劑量的增加而增多已超過(guò)正常值而不是二倍而出具了合格的報(bào)告,存在的問(wèn)題,Ames實(shí)驗(yàn) 5.有抑菌作用的產(chǎn)品不進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)找出抑菌劑量

51、而出具了5mg/皿菌落回變數(shù)正常的報(bào)告。 6.產(chǎn)品中明顯含有組氨酸，而不進(jìn)行除組氨酸的前處理。 7.應(yīng)該用XAD-2樹(shù)脂對(duì)樣品進(jìn)行前處理 8.沒(méi)有理解5mg/皿含義：系指有效成份，如某些產(chǎn)品含有80%的糖，沒(méi)進(jìn)行樣品前處理或向送樣方提出要求，直接用產(chǎn)品做5mg/皿，實(shí)際上是1mg/皿。,存在的問(wèn)題,微核、精子畸形以及睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn) 1.微核試驗(yàn)：幾份報(bào)告中都有陽(yáng)性對(duì)照的數(shù)據(jù)，而這幾份原始記錄中皆無(wú)陽(yáng)性對(duì)照。 2.

52、精子畸形試驗(yàn)：陽(yáng)性對(duì)照組精子畸形率﹤3.4%，即判斷陰性對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組相比差異有顯著性P﹤0.05。（正常畸形率為0.8-3.4%）。 3.睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn)：陽(yáng)性對(duì)照持續(xù)應(yīng)用一年以上。,存在的問(wèn)題,30天或90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)1.雌性鼠的體重比雄性鼠還重或一樣重,上表為SD大鼠正常體重,存在的問(wèn)題,30天或90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2.食物利用率雌雄分不開(kāi)，或?yàn)閷⒋?、雄性大鼠食物利用率拉開(kāi)差距，雌性和雄性大鼠的進(jìn)食量基本一致。3.大鼠的進(jìn)

53、食量越來(lái)越高，雌性大鼠700多克、 4.雄性大鼠600多克，而體重與食物利用率和以前的差不多。5.劑量設(shè)計(jì)：相當(dāng)于推薦量（以g/Kg BW計(jì)）的6.56、26和105倍，這是先設(shè)計(jì)再做試驗(yàn)，還是先做試驗(yàn)再設(shè)計(jì)？6.受試物摻入飼料的量高達(dá)18%，袋泡茶摻入飼料給予動(dòng)物。,存在的問(wèn)題,30天或90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)7.動(dòng)物攝入飼料的量在30天喂養(yǎng)試驗(yàn)以體重的10%計(jì)，90天喂養(yǎng)試驗(yàn)以體重的8%計(jì)，這是經(jīng)過(guò)大量資料統(tǒng)計(jì)得出，但將受試物以10

54、-20%的濃度飲水給予動(dòng)物，又不計(jì)飲水量，與報(bào)告的劑量設(shè)計(jì)是否基本一致？有的按每100gBw給10ml含有受試物的水，飲畢再給飲用水？8.有的試驗(yàn)動(dòng)物體重增長(zhǎng)緩慢，解釋是受試物不好吃。9.生化指標(biāo)：不做TG、AST；TC高達(dá)2.8mmol/L；BUN12.9mmol/L。,存在的問(wèn)題,30天或90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)10.以大鼠為試驗(yàn)動(dòng)物測(cè)尿酸，大鼠的代謝與人不完全一樣，可將尿酸轉(zhuǎn)化為尿囊素排出。11.病理報(bào)告：心肝脾無(wú)毒性損傷，兩個(gè)產(chǎn)品

55、，兩份報(bào)告來(lái)自同一檢測(cè)單位；A4紙寫(xiě)了一大篇，詳細(xì)描述了病理組織結(jié)構(gòu)，沒(méi)有一點(diǎn)異常，四個(gè)產(chǎn)品、四份報(bào)告來(lái)源同一檢驗(yàn)單位；寫(xiě)一小段也比較詳細(xì)的描述了病理組織結(jié)構(gòu)，亦無(wú)任何異常三個(gè)產(chǎn)品、三份報(bào)告亦來(lái)源于同一檢驗(yàn)單位。,存在的問(wèn)題,傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 其劑量設(shè)計(jì)比30天喂養(yǎng)還高，程序已明確以亞急性試驗(yàn)的最大無(wú)作用劑量為高劑量，目的是：找強(qiáng)致畸物，即具有致畸作用，但無(wú)母體毒性出現(xiàn)，這種受試物致畸作用往往較強(qiáng),存在的問(wèn)題,其他典型問(wèn)題

56、推薦量較大的產(chǎn)品，同一檢測(cè)單位，30天喂養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行了樣品前處理達(dá)到足夠倍數(shù)，但LD50、三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)未進(jìn)行樣品前處理，相當(dāng)于人推薦量的倍數(shù)很低；樣品進(jìn)行了前處理但折合到樣品的量不一致；樣品進(jìn)行了前處理，但報(bào)告中寫(xiě)取一定量的樣品用回旋蒸發(fā)儀濃縮至所需濃度，劑量設(shè)計(jì)寫(xiě)的是25、50、100ml/KgBw；有的報(bào)告要從字里行間為依據(jù)替檢測(cè)單位計(jì)算出劑量設(shè)計(jì)是否正確；Ames試驗(yàn)的劑量以每皿百分之多少計(jì)。,第五部分,保健食品功能性檢驗(yàn)及評(píng)價(jià),

57、主要內(nèi)容,基本要求（一般程序） 動(dòng)物功能學(xué)試驗(yàn)基本要求 人體功能學(xué)試驗(yàn)基本要求 各功能學(xué)試驗(yàn)主要指標(biāo)評(píng)審要求,保健食品功能評(píng)價(jià)的基本要求,1.對(duì)受試樣品的要求 提供樣品物理、化學(xué)性質(zhì)的有關(guān)資料 必須是規(guī)格化的定型產(chǎn)品 提供衛(wèi)生學(xué)和毒理學(xué)檢驗(yàn)報(bào)告，樣品必須同一批次 提供功效成分和特征成分或營(yíng)養(yǎng)成分的名稱(chēng)及含量2.對(duì)受試樣品載體的要求 以乙醇和糖為載體的樣品必須提供乙醇和糖的含量,1.受試物 所提供的受

58、試物為組成成分、比例及純度與實(shí)際產(chǎn)品相同的樣品；必須在保質(zhì)期內(nèi)。2.受試物的預(yù)處理（具體方法同安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)） 處理方法需在試驗(yàn)報(bào)告中詳細(xì)描述 必須說(shuō)明受試物濃縮或稀釋倍數(shù)、濃度，據(jù)此計(jì)算出的給予劑量,動(dòng)物功能學(xué)試驗(yàn)基本要求,3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、受試物給予方式及時(shí)間（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物： 性別 單一性別 年齡 依試驗(yàn)要求進(jìn)行選擇 數(shù)量 大鼠每組8-12只 小鼠每組10-15

59、只 其余要求同安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)要求,動(dòng)物功能學(xué)試驗(yàn)基本要求,（2）受試物給予方式： 必須經(jīng)口給予，首選灌胃；若選擇飲水或摻入飼料，最高劑量不超過(guò)10％；提供每日每劑量組平均飲水量、食物攝入量及周食物利用率（3）給樣時(shí)間： 根據(jù)具體功能主要指標(biāo)而定，7天-120天，一般為30天。,動(dòng)物功能學(xué)試驗(yàn)基本要求,4.劑量設(shè)計(jì)原則 （1）根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)注明的食用方法及用量，確定功能學(xué)試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)是否合理。（2）進(jìn)行動(dòng)

60、物實(shí)驗(yàn)時(shí)至少設(shè)三個(gè)劑量組，一個(gè)陰性對(duì)照組，必要時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組或空白對(duì)照組。 以大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須有相當(dāng)于人體推薦量（折算為每公斤體重）的5倍劑量組。 以小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須有相當(dāng)于人體推薦量（折算為每公斤體重）的10倍劑量組。 最高劑量組不超過(guò)30倍，還必須在毒理學(xué)評(píng)價(jià)確定的安全劑量范圍內(nèi)。 當(dāng)載體或輔料本身可能具有與受試物相同的功能時(shí)，應(yīng)設(shè)載體對(duì)照。,動(dòng)物功能學(xué)試驗(yàn)基本要求,人體功能學(xué)試驗(yàn)基本要求,1.觀(guān)察對(duì)象的選擇 （1）合

61、理選擇受試者 按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年）》規(guī)定的試驗(yàn)對(duì)象納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，并同時(shí)考慮試食設(shè)計(jì)要求、受試樣品的性質(zhì)等因素。（2）人數(shù) 試食組和對(duì)照組的有效例數(shù)不少于50人，且試驗(yàn)的脫離率一般不得超過(guò)10%。試驗(yàn)報(bào)告中必須注明脫離率，否則應(yīng)予以補(bǔ)充說(shuō)明。（3）均衡性 試驗(yàn)組間年齡、性別、社會(huì)狀況構(gòu)成、身體狀況以及試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各項(xiàng)功能主要指標(biāo)均衡可比。,人體功能學(xué)試驗(yàn)基本要求,2.

62、倫理學(xué)審查要點(diǎn)（1）保證受試對(duì)象的食用安全。 必須在衛(wèi)生學(xué)試驗(yàn)、動(dòng)物毒理學(xué)安全性試驗(yàn)及興奮劑檢測(cè)（僅限改善生長(zhǎng)發(fā)育、減肥功能)完成之后確定產(chǎn)品是安全的，符合有關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求的情況下再進(jìn)行。 原則上還應(yīng)在動(dòng)物功能學(xué)試驗(yàn)證明其有效的前提下進(jìn)行。注意： 報(bào)告中應(yīng)注明試驗(yàn)開(kāi)始日期和報(bào)告日期。開(kāi)始時(shí)間應(yīng)晚于其它試驗(yàn)報(bào)告時(shí)間。 如果試驗(yàn)在不同單位進(jìn)行的，必須提供同批號(hào)的受試樣品。 人體試驗(yàn)必須得到檢查單位

63、倫理學(xué)審查委員會(huì)的批準(zhǔn)方能進(jìn)行，送審資料必須有審查委員的簽字。,人體功能學(xué)試驗(yàn)基本要求,（2）受試者在試驗(yàn)開(kāi)始前應(yīng)進(jìn)行常規(guī)體檢 主觀(guān)感覺(jué) 生理指標(biāo)，癥狀和體征。 常規(guī)的血液學(xué)指標(biāo) 生化指標(biāo) 功效性指標(biāo)，即與保健作用有關(guān)的指標(biāo)，如抗氧化、減肥等方面的指標(biāo)。 兒童一般不要求測(cè)心電圖、胸透、腹部B超及肝、腎功能項(xiàng) 改善生長(zhǎng)發(fā)育、緩解視疲勞、輔助改善記憶功能不要求便常規(guī)，其他人體試驗(yàn)便常規(guī)為必做項(xiàng)目。,人體功能學(xué)試驗(yàn)基

64、本要求,（3）報(bào)告中需提供必要的體檢常規(guī)項(xiàng)目資料及詳細(xì)的數(shù)據(jù)。（4）對(duì)于選擇的受試人群需要長(zhǎng)期服藥的試驗(yàn)，受試者必須在服藥的基礎(chǔ)上進(jìn)行試食試驗(yàn)。（5）如需與醫(yī)院共同完成的試驗(yàn)，必須選擇三級(jí)甲等醫(yī)院，報(bào)告中應(yīng)同時(shí)加蓋兩單位公章，同時(shí)需提供三級(jí)甲等醫(yī)院的等級(jí)證明。（6）改善生長(zhǎng)發(fā)育和減肥功能的產(chǎn)品在人體功能試驗(yàn)進(jìn)行前需提供興奮劑檢測(cè)報(bào)告。,各功能試驗(yàn)審評(píng)要點(diǎn),（一）只要求動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的項(xiàng)目有：1. 增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法 主要指標(biāo)

65、：細(xì)胞免疫功能 體液免疫功能 單核－巨噬細(xì)胞功能 NK細(xì)胞活性測(cè)定 判定：四項(xiàng)指標(biāo)中任兩項(xiàng)結(jié)果陽(yáng)性。 注意事項(xiàng)：不認(rèn)可增強(qiáng)單項(xiàng)免疫力功能。,各功能試驗(yàn)審評(píng)要點(diǎn),2. 改善睡眠功能檢驗(yàn)方法 主要指標(biāo)：戊巴比妥納睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn) 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn) 戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

66、 判定：3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任2項(xiàng)陽(yáng)性，且直接睡眠作用。 注意事項(xiàng)：對(duì)動(dòng)物進(jìn)行直接睡眠實(shí)驗(yàn)時(shí)，也要同樣注意進(jìn) 行30天灌胃。,各功能試驗(yàn)審評(píng)要點(diǎn),3. 緩解體力疲勞檢驗(yàn)方法 主要指標(biāo)：血乳酸 血清尿素 肝糖原/肌糖原 動(dòng)物負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn) 判定：負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，血乳酸曲線(xiàn)下面積、血清尿素、肝糖/肌糖原3項(xiàng)生化指標(biāo)中任2項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性。 注意事項(xiàng)：

67、 （1）對(duì)同批受試樣品進(jìn)行違禁藥物的檢測(cè)。 （2）在負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)時(shí)，酒類(lèi)樣品測(cè)試當(dāng)天可以不灌胃。,各功能試驗(yàn)審評(píng)要點(diǎn),4. 提高缺氧耐受力功能檢驗(yàn)方法 主要指標(biāo)：常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn) 急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn) 判定：三項(xiàng)試驗(yàn)中任二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。 注意事項(xiàng)：每批實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重盡量保持一致。,各功能試驗(yàn)審評(píng)要點(diǎn),5. 對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)功能檢驗(yàn)

68、方法 主要指標(biāo)：外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù) 骨髓細(xì)胞DNA含量或骨髓有核細(xì)胞數(shù) 小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn) 血/組織中SOD活性實(shí)驗(yàn) 血清溶血素含量實(shí)驗(yàn) 判定：以上5項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任3選項(xiàng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任何2項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。 注意事項(xiàng)：選用小鼠，受試樣品于照射前給予14～30天，照射后仍然給予受試物，必要時(shí)可延至45天。,各功能試驗(yàn)