血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗

1、血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗一實驗原理一實驗原理1、電泳是指帶電質(zhì)點在電場中向本身所帶電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。在一定pH條件下，不同的質(zhì)點由于具有不同的等電點而帶不同性質(zhì)的電荷，因而在一定的電場中它們的移動方向和移動速度也不同，即它們的電泳遷移率不同，因此，可使它們分離。2、影響電泳遷移率的外界因素：電場強(qiáng)度、溶液的pH值、溶液的離子強(qiáng)度和電滲現(xiàn)象。3、影響電泳遷移率的內(nèi)在因素：質(zhì)點所帶凈電荷的量、質(zhì)點的大

2、小和形狀。4、采用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法稱為醋酸纖維素薄膜電泳。醋酸纖維素薄膜電泳具有微量、快速、簡便、分辨力高，對樣品無拖尾和吸附現(xiàn)象等優(yōu)點。5、醋酸纖維素是纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸酯，將它溶于有機(jī)溶劑（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度約為120μm，有很強(qiáng)的通透性，對分子移動阻力很小。6、本實驗以醋酸纖維素為電泳支持物，分離各種血清蛋

3、白。血清中含有清蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白和各種脂蛋白等。各種蛋白質(zhì)由于氨基酸組成、分子量、等電點及形狀不同，在電場中的遷移速度不同。以醋酸纖維素薄膜為支持物，正常人血清在pH8.6的緩沖體系中電泳，染色后可顯示5條區(qū)帶。其中清蛋白的泳動速度最快，其余依次為α1、α2、β及γ球蛋白。二實驗儀器和試劑二實驗儀器和試劑?器材器材醋酸纖維素薄膜（38cm），培養(yǎng)皿，載玻片，電泳儀，電泳槽，粗濾紙，鑷子?材料材料新鮮血清（未溶血）?試劑

4、試劑1、巴比妥緩沖液巴比妥緩沖液（pH8.6，離子強(qiáng)度0.06）：巴比妥1.66g巴比妥鈉12.76g，加水至1000ml。置4℃冰箱保存，備用。（已配置）2、染色液染色液：氨基黑10B0.5g甲醇50ml冰醋酸10ml，蒸餾水40ml，混勻。3、漂洗液漂洗液：含95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸餾水50ml，混勻。4、NaOH溶液：稱取NaOH16g，定容至1000ml。三實驗過程三實驗過程一.準(zhǔn)備與點樣準(zhǔn)備與點樣1.將薄膜剪成38

5、cm的小條，在薄膜無光澤面距一端1.5cm處用鉛筆輕輕劃一條直線，表示點樣位置。?注意醋酸纖維膜的質(zhì)量，至少浸泡10分鐘，浸泡很久仍有大塊白色硬點者須棄之不用。?加樣時一定要呈直線、垂直、分布均勻，這樣泳動的區(qū)帶整齊、不歪。以免影響蛋白質(zhì)區(qū)帶圖譜的完美。?電泳槽兩邊的緩沖液應(yīng)保持液面在同一水平面上，槽里的緩沖液要保持清潔。?電泳電壓大小，時間長短與緩沖液的離子強(qiáng)度都有一定的關(guān)系。一般電流約0.4—0.6mAcm電壓110—160V，通電

6、時間40—60min。電壓高，電流大，電泳速度加快，時間可縮短，但薄膜上蒸發(fā)嚴(yán)重，因此不能無限增大電流。?使用比色皿時要潤洗。?染色的同時也是蛋白質(zhì)的固定，所以，不要將很多蛋白條重疊在一起。?注意薄膜正負(fù)極不要搭反，注意簿膜的正反不要放反。放的時候注意血樣不要與濾紙接觸了。?通電完畢時，必須切斷電源，以防觸電事故。五、失敗圖譜的分析五、失敗圖譜的分析?拖尾狀拖尾狀點樣量過多，被分離的血清蛋白不能分離成5條區(qū)帶或產(chǎn)生拖尾。?有斑點有斑點點

7、樣不均勻，不整齊，導(dǎo)致被分離的區(qū)帶出現(xiàn)斑點。?邊流現(xiàn)象邊流現(xiàn)象點樣板蘸取血清一邊多一邊少，導(dǎo)致區(qū)帶分離不清，出現(xiàn)邊流現(xiàn)象。?區(qū)帶模糊區(qū)帶模糊薄膜過濕，樣品擴(kuò)散迅速，導(dǎo)致樣品分離不成區(qū)帶。?鋸齒狀鋸齒狀薄膜用濾紙吸水過度（薄膜上出現(xiàn)白斑）或點樣過慢，又未及時大橋，導(dǎo)致薄膜過于干燥，使區(qū)帶成鋸齒狀。?區(qū)帶傾斜區(qū)帶傾斜薄膜搭載濾紙上的位置歪斜，彎曲，與電流方向不平行，或點樣一邊多一邊少，區(qū)帶容易泳斜。?顯色過淺顯色過淺點樣太少，區(qū)帶顯色不明顯