PMOXA-PAA混合刷用于毛細(xì)管電泳在線富集牛血清蛋白.pdf

1、蛋白質(zhì)的分離分析問題一直是一個(gè)挑戰(zhàn)性的課題，而毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis，CE)因其樣品用量少、分離效率高以及分離速度快等特點(diǎn)，在蛋白質(zhì)的分離分析領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　商用CE一般采用紫外檢測(cè)器(CE-UV)，但紫外檢測(cè)器的光程較短，并且毛細(xì)管的進(jìn)樣量比較小，導(dǎo)致CE-UV的檢測(cè)靈敏度比較低。為了提高CE-UV的檢測(cè)靈敏度，目前最有效的方法是在線富集法(on-line preconcen

2、tration)。常用的在線富集方法有毛細(xì)管等速電泳(capillary isotachophoresis，CITP)、堆積(stacking)、吹掃(sweeping)等。而堆積因其方法種類較多在毛細(xì)管分析蛋白質(zhì)方面最為常用，例如常規(guī)堆積、大體積樣品堆積（large volume sample stacking，LASS）、場(chǎng)放大樣品堆積(field-amplified injection，F(xiàn)ASS)等。盡管堆積的方法能有效地提高CE

3、-UV的檢測(cè)靈敏度，但因其進(jìn)樣量小，無(wú)法對(duì)極低濃度的樣品進(jìn)行有效檢測(cè)。而采用毛細(xì)管涂層法，能夠有效解決毛細(xì)管電泳進(jìn)樣量少的缺點(diǎn)。本論文采用聚（2-甲基-2-噁唑啉）(poly(2-methyl-2-oxazoline)，PMOXA）和聚丙烯酸(poly(acrylic acid)，PAA)響應(yīng)性混合涂層(PMOXA/PAA)毛細(xì)管，對(duì)牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)進(jìn)行了在線富集，并對(duì)這種方法的檢測(cè)靈敏度進(jìn)

4、行了分析。
　　首先，通過陽(yáng)離子開環(huán)聚合(cationic ring-opening polymerization，CROP)、可逆加成斷裂鏈轉(zhuǎn)移(reversible addition fragmentation chain transfer，RAFT)聚合分別合成了末端為氨基的PMOXA(PMOXA-NH2)以及末端為巰基的PAA(PAA-SH)。然后通過聚多巴胺(polydopamine，PDA)黏合層將PMOXA-NH2和

5、PAA-SH依次涂覆在毛細(xì)管內(nèi)表面。掃描電鏡(SEM)和X射線光電子能譜(XPS)結(jié)果表明，通過這種方法成功地制備了PMOXA/PAA混合刷涂層毛細(xì)管。熒光標(biāo)記牛血清蛋白(FITC-BSA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在pH5.0、離子強(qiáng)度(I)為10-4M的條件下，PMOXA/PAA涂層毛細(xì)管能夠吸附大量的BSA;而當(dāng)pH9.0、I為10-1M時(shí)，該涂層管能夠釋放大部分吸附在表面的BSA，此結(jié)果表明PMOXA/PAA涂層毛細(xì)管具有pH和I刺激響應(yīng)性，