低溫保護劑對4℃保存豬精液的活率影響

1、低溫保護劑對4℃保存豬精液的活率影響孫時軍1，朱華鴻2，陳曉峰3，俞頌東，李俊婷1，羅松1，馮夢31.浙江省寧波市鄞州區(qū)畜牧獸醫(yī)站，浙江寧波，315100；2.浙江省寧波市鄞州區(qū)咸祥鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，浙江寧波，315141；3.浙江寧波福寧種豬有限公司，浙江寧波，315141；摘要：本實驗采用1%濃度的甘油、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲亞砜作為精液低溫保護劑，通過精子降溫冷藏復(fù)蘇三個重要步驟，觀察第七天保護劑對精子活率的影響。結(jié)果表明：在4℃

2、下，乙二醇對精子活率保護作用最好，第7天仍能達到0.6以上，其次是甘油、二甲基乙酰胺和二甲亞砜組，空白對照組活率最低，低于0.2。關(guān)鍵字：低溫保護劑；豬精液；精子活率；復(fù)蘇家畜精液保存技術(shù)是二十世紀隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的，原理是通過降低或抑制精子新陳代謝程度達到延長精子在體外壽命的目的。為此，研究者試驗將精液放在低溫狀態(tài)(非結(jié)冰)或冷凍(結(jié)冰)狀態(tài)下保存。精液低溫保存通常是在0～5℃范圍施行，這是在冷凍保存以前常用的方法。據(jù)報

3、道，在脫脂乳中加甘油10％～13％用于稀釋牛精液，在低溫下可保存14天仍具有很高的受精能力；在含有咖啡因6～10mg的脫離子緩沖溶液中保存牛精子，在6～7℃時，最長能維持生存時間達519小時。低溫保存精液的局限性仍很大，當(dāng)冷凍保存技術(shù)成熟以后，已很少再使用和研究，另一方面，與牛精液相比，豬精液對低溫更敏感，因此，至今仍沒有成熟穩(wěn)定的低溫保存豬精液的方法。理論上來說，低溫下精子代謝活動水平更低，保存時間比常溫下長的多。同時可應(yīng)用普通冰箱保

4、存，生產(chǎn)運輸成本和操作技術(shù)與常溫精液基本相同，對于多數(shù)人工授精站無需增加設(shè)備及專業(yè)人員，則可較大副度地提升優(yōu)良種畜利用度，擴展供精范圍，具有很廣的應(yīng)用前景。本實驗首次對豬帶漿精液在4℃條件下，四種低溫保護劑對精子活率的影響進行研究，以期為低溫保存精液探索可行之路。1.材料及方法1.1精液采集1作者簡介：孫時軍，高級畜牧師，主要研究方向為動物遺傳育種通訊作者：羅松，碩士研究生，主要研究方向為動物營養(yǎng)。郵箱：lsbjx@，電話：152582

5、20640基金項目：寧波市鄞州區(qū)農(nóng)業(yè)科研攻關(guān)項目0.6，和二甲亞砜及空白對照組差異顯著；二甲基乙酰胺組活率率高于0.5，和乙二醇、二甲亞砜及空白對照組差異顯著；二甲亞砜組精子活率約為0.4，和其他四組均差異顯著；空白組活率低于0.2，和其他四組均差異顯著。3.討論3.1豬精液低溫保存的可行性由于豬精子對低溫較馬和牛等其他家畜更為敏感，耐受能力差，容易發(fā)生冷休克等特點，使得豬精液低溫保存技術(shù)的研究進展較為緩慢。DeIeeuw提出，隨著溫度

6、的降低，精子質(zhì)膜的磷脂由液相轉(zhuǎn)變?yōu)槟z相，使膜的通透性變強，導(dǎo)致精子內(nèi)部的陽離子和酶外漏，及膜控制酶活性和擴散能力的降低，致使精子的獲能、頂體反應(yīng)及死亡[1]。Ahhouse等研究發(fā)現(xiàn)，低于12℃，精子的存活時間和活率均急劇下降[2]。但Funahashia等在10℃條件下稀釋保存豬精液9天后，精子仍具有較高的活率和體外穿透卵子的能力[3]；徐振軍等用糖類，卵黃和檸檬酸鈉配制的稀釋劑在4℃下保存精液，發(fā)現(xiàn)在6天后，活力仍高于0.5[4]；

7、本實驗中，豬精液在4℃下保存7天仍然具有較高活動，提示豬稀釋精液保存的溫度界限可以降低。3.2不同低溫保護劑對精子活率的影響龍翔等使用甘油、乙二醇和二甲亞砜作為冷凍保護劑，通過液氮熏蒸法冷凍豬精液，解凍后觀察精子活率，發(fā)現(xiàn)二甲亞砜對精子的毒性最大[5]，與本實驗中二甲亞砜組在個處理組中精子活率最低結(jié)果類似。甘油組和乙二醇組對精子保護作用最好，本實驗得出相同結(jié)論。李兆華等在豬精液中加入牛血清白蛋白作為冷凍保護劑，發(fā)現(xiàn)第7天的精子活率仍可達