氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其在pc12細胞上延遲整流器鉀電流

1、氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其在氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其在PC12PC12細胞上延遲整流器鉀電細胞上延遲整流器鉀電流（流（IKIK）療效觀察）療效觀察摘要摘要：為了觀察電壓激活鉀氧化苦參堿（OMT）和它的作用鎮(zhèn)痛效果呢K通道，鼠標醋酸誘發(fā)的腹部收縮模型用于測試體內的鎮(zhèn)痛效果，并且在體外，延遲整流器K電流（IK）的PC12細胞（大鼠嗜鉻細胞瘤細胞）使用自動膜片鉗方法記錄下來。結果表明，應用的OMT后，對乙酸引起的動物腹部收縮的數目是顯著降低，謚

2、PC12細胞是顯著降低，并表現出濃度依賴性的方式。應用OMT后，PC12細胞謚既激活和失活曲線轉移到負的電位。這項研究表明，OMT在小鼠中顯示鎮(zhèn)痛作用。的電壓激活K時抑制K通道可能是在其中增強的K既激活和失活機理之一K渠道參與，可能會發(fā)揮重要作用。關鍵詞關鍵詞：苦參素鎮(zhèn)痛效果PC12細胞全自動膜片鉗K通道介紹介紹苦參（RadixSophaflavescensAit），一個著名的傳統(tǒng)中國草藥，在中國反病毒方面進行了廣泛研究，抗炎和抗疼痛的

3、效果。氧化苦參堿（OMT），一種苦參堿型生物堿，從苦參提取，顯示出抑制組胺的釋放，減少過敏反應的和免疫調節(jié)作用的。最近已經報道的苦參堿型生物堿的鎮(zhèn)痛效果[13]，但OMT的鎮(zhèn)痛作用及其機理不明，直到如今。據了解，疼痛信號通過神經系統(tǒng)調節(jié)。多種類型的離子通道，神經元興奮性，特別是在K通道，其動作電位的音響環(huán)后復極化細胞膜，引起在某些神經元超極化后，并分別對神經元信號[4]突觸后時間積分是至關重要的。K渠道包括瞬時外向鉀通道，延遲整流鉀通道

4、，內向整流鉀通道，鈣激活的鉀離子通道和ATP活性鉀離子通道的電壓依賴性鉀通道，因此，產生了復雜的細胞的變化。神經元電壓依賴性鉀的抑制電流通過一些止痛藥已經報警，可能是鎮(zhèn)痛機制研究[57，18]的解釋廣泛。延遲整流器K電流（IK），主電流的作用電位的音響環(huán)后細胞膜的復極化，是電壓依賴性鉀從而起到如神經遞質的釋放，膜興奮性，增殖和細胞凋亡的細胞的信號傳導過程中起重要作用的電流[89]。膜片鉗測量一直是黃金標準分析，離子通道藥物研究。然而，由

5、于費時和勞動密集性，常規(guī)的膜片鉗不適合有效的篩選藥物發(fā)現的早期階段?，F在，自動化膜片鉗設備的開發(fā)克服了所有的缺點，并迅速用于離子通道藥物發(fā)現和安全藥理學[1012]?？寺∈茹t細胞瘤（PC12）細胞，從大鼠腎上腺髓質嗜鉻細胞衍生的，表達延遲整流器K電流（IK）和代表了電和分泌，而不是背根神經節(jié)細胞（DRG）一個很好的神經元模型。在這項研究中，乙酸誘導的腹部收縮試驗是用來測試OMT的鎮(zhèn)痛效果和OMT對謚通過神經PC12細胞記錄使用自動化膜片

6、鉗法的電壓門控鉀通道的作用。研究結果將提供應用信息，這可能有助于解釋OMT的鎮(zhèn)痛機制。實驗步驟實驗步驟藥物和化學品OMT（分子式：C15H24N2O2H2O，分子量：282.38CAS號：16837528HPLC純度98％）是由北京雙鷺藥業(yè)股份有限公司（北京，中國）提供。聚L賴氨酸，乙二醇雙（二）氨基乙基N，N，N，N四乙酸（EGTA），N2羥乙基哌N02乙磺酸（HEPES）得自SigmaAldrich公司購買（圣路易斯，密蘇里州，美國

7、）。Dulbecco氏改性音響編Eagle氏培養(yǎng)基（DMEM），熱滅活的馬血清（HS）和胎牛血清（FBS）購自Gibco（GrIsl的，NY，USA）購得。其他試劑購自國藥集團化學試劑有限公司（上海，中國）獲得的。峰值幅度應用之前和OMT后，分別地）。為了記錄IK的動能激活曲線，將細胞保持在70mV，而電流是引起與步驟電壓脈沖的應用，范圍從70mV到80毫伏，以10毫伏遞增。30.6莫耳濃度被選擇以記錄動力學活化曲線上的藥物的效果，因為

8、IK被這種藥物濃度（IC50）下抑制近似50％。用于IK的活化動力學曲線的回歸分析，IK是由下式轉換成電導：G=1（VVrev），其中G是電導，我被K電流，V為膜電位，并Vrev是逆轉勢。歸一化電導顯示由波爾茲曼方程，GGmax=1EXP[（V12V）k]的，其中GGmax的歸一電導，V12為膜電位在半活化，和k是斜率因子。為了記錄IK的滅活動力學曲線，將細胞保持在70mV，第二電流分別引出用的測試脈沖至40毫伏，跟隨6080毫伏一個預

9、脈沖，在10mV遞增。30.6莫耳濃度被選擇以記錄IK的滅活動力學曲線上的藥物的效果，對于滅活動力學曲線的回歸分析，穩(wěn)態(tài)失活曲線呈由波爾茲曼方程：II最大=1EXP[（V12V）K]，其中II最大是標準化的電流，V12為膜電位的半失活，而k是斜率因子。記錄只從細胞中，阻力大于1GX.當電流達到平衡至少要200秒，細胞外液換成含有使用40微L解決方案NPC16補丁班輪藥物via4槍頭細胞外液。數據分析結果以均數標準差。全細胞數據網絡萊導入

10、到伊戈爾臨（Wavemetrics公司，波特蘭，俄勒岡，美國）。SIGMAPLOT（SPSS科學，芝加哥，IL，USA），和MicrosoftExcel（Microsoft公司，雷德蒙，美國）軟件被用于顯示或分析。學生t檢驗和單向方差分析程序被用來比較的藥物作用的差異。p0.05為統(tǒng)計學顯著的。結果OMT的在乙酸誘導的腹部收縮試驗中的作用乙酸（0.7％，10毫升千克）給藥產生的腹部收縮行為的典型圖案。立即觀察到腹部收縮的在20分鐘內的數

11、量的乙酸注射后示于表1由乙酸的比較藥（阿司匹林）抑制的腹部收縮。OMT（100毫克千克）的應用顯示出顯著的鎮(zhèn)痛活性，這是由腹部收縮醋酸引起腹部收縮試驗的數量減少重新反映并提出了一些濃度依賴性。OMT對PC12細胞IK的影響如在圖1所示，IK的峰值幅度應用OMT之后且在顯眼的濃度依賴性方式被降低。半數抑制濃度（IC50）和OMT的hillcoefficient為37.2LM，0.87，分別為（N=5）。討論該研究為抗在炎性和鎮(zhèn)痛藥從天然產

12、物過的苦參堿型生物堿得到世上效果的熱點引起廣泛關注他們提取后和普里音響版，并且據報道，苦參堿型的酰胺基生物堿是一個重要的官能團，苦參堿型生物堿的影響造成的他們提取和提純后的廣泛關注，而且據報道，苦參類生物堿的酰胺基是必不可少的官能團，影響著鎮(zhèn)痛效力[3]。OMT，作為苦參堿的類似物，其包含在一個以上氧原子的1個N比苦參堿，是由中國國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的藥物，并已廣泛用于抗在炎性效果。因此，OMT是否具有鎮(zhèn)痛效果我們感興趣。這項研究