氧化苦參堿拮抗TNF-a對(duì)巨噬細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、本文研究目的：研究氧化苦參堿(OM)拮抗腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制； 研究方法：健康雄性Wistar大鼠，采用支氣管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬細(xì)胞進(jìn)行純化培養(yǎng)，加入100μg/mlSiO<,2>對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行刺激培養(yǎng)24h后，收集上清液，分為空白對(duì)照組、TNF-a(5、10、20μg/L)+AM-石英培養(yǎng)上清液組、氧化苦參堿(200、400、800 mg/L)+10μg/L TNF-a+AM-石英培養(yǎng)上清

2、液組，將上清液作用于純化培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞。1)運(yùn)用流式細(xì)胞分析技術(shù)(flow cytometry FCM)分析細(xì)胞凋亡的情況；2)用免疫組化法檢測(cè)巨噬細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子(NF-к BP65)的表達(dá)，并用MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)，采用陽性單位(PU)數(shù)值對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析；3)采用Western-blot法對(duì)巨噬細(xì)胞膜G(Gαs)蛋白含量進(jìn)行檢測(cè)，凝膠成像系統(tǒng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。 研究結(jié)果： 1)巨噬細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果：與對(duì)照組相比

3、，各TNF-a組凋亡率顯著升高(P<0.05)，其中10μg/L組與5、20μg/L組相比凋亡率顯著下降(P<0.05)；與對(duì)照組相比，各氧化苦參堿組細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.05)。400mg/L組與200、800mg/L組相比凋亡率顯著降低(P<0.05)； 2)NF-к BP65免疫組化檢測(cè)結(jié)果：MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)分析顯示：與對(duì)照組相比，各TNF-a組NF-к BP65陽性單位數(shù)值有所下降，5μg/L組與對(duì)照

4、組、10μg/L組、20μg/L組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各氧化苦參堿組NF-кBP65陽性單位數(shù)值顯著減少，200、800mg/L組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且NF-к BP65陽性單位數(shù)值與巨噬細(xì)胞凋亡率呈負(fù)相關(guān)(r=-0.812，P<0.001)，同時(shí)與G(Gαs)蛋白表達(dá)量也呈負(fù)相關(guān)(r=-0.538，P<0.05)； 3)Western-blot檢測(cè)G(Gαs)蛋白表達(dá)結(jié)果：與對(duì)照組相

5、比，各TNF-a組G(Gαs)蛋白表達(dá)量顯著升高，其中5μg/L組、20μg/L組與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，10μg/L組與5、20μg/L組比較，G(Gαs)蛋白表達(dá)量有所降低(P<0.05)，G(Gαs)蛋白表達(dá)量與細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)(r=0.740，P<0.01)；隨著氧化苦參堿濃度增加，G(G α s)蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，且G(G α s)蛋白表達(dá)量與細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)(r=0.831，P<