基于PC-IGS序列檢測(cè)微囊藻的方法研究.pdf

1、近年來(lái)，世界范圍內(nèi)藍(lán)藻水華大量爆發(fā)，水華藍(lán)藻產(chǎn)生的毒素已造成嚴(yán)重的污染和經(jīng)濟(jì)損失，藍(lán)藻水華越來(lái)越受到關(guān)注。微囊藻是現(xiàn)有產(chǎn)毒藍(lán)藻中的優(yōu)勢(shì)種。常規(guī)的藍(lán)藻監(jiān)測(cè)以顯微鏡下形態(tài)觀察、計(jì)數(shù)為主，它要求操作者對(duì)各種藍(lán)藻的細(xì)胞形態(tài)非常熟悉，否則易漏檢或誤檢。因此，有待開(kāi)發(fā)藍(lán)藻尤其微囊藻的預(yù)警預(yù)測(cè)、分析方法。
　　 現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展以及基因數(shù)據(jù)庫(kù)中海量的生物信息為我們建立以基因?yàn)闄z測(cè)對(duì)象、快速有效的檢測(cè)方法提供了可能。PCR檢測(cè)基因法已被報(bào)道，

2、但它易產(chǎn)生假陽(yáng)性。由于核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性，DNA探針—雜交方法可用于環(huán)境監(jiān)測(cè)，此法更快速、靈敏。
　　 因此，本研究的目的是以微囊藻的PC-IGS 序列為檢測(cè)對(duì)象，建立一種水華藍(lán)藻的預(yù)警預(yù)測(cè)的分子生物學(xué)方法，其主要工作內(nèi)容和結(jié)論有：
　　 1．對(duì)微囊藻和魚(yú)腥藻的PC-IGS 序列進(jìn)行比對(duì)分析并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，在PC-IGS系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中，微囊藻和魚(yú)腥藻形成兩個(gè)獨(dú)立的分枝，證實(shí)了PC-IGS 序列在藍(lán)

3、藻種間具有高度的特異性，可用于建立檢測(cè)藍(lán)藻的分子生物技術(shù)?；谖⒛以宓腜C-IGS序列成功地設(shè)計(jì)、合成了對(duì)于微囊藻的檢測(cè)具有較高特異性的捕獲探針和信號(hào)探針。
　　 2．通過(guò)優(yōu)化雜交液、雜交溫度和時(shí)間等多項(xiàng)參數(shù)，建立了可以檢測(cè)微囊藻的酶聯(lián)夾心雜交方法。對(duì)實(shí)驗(yàn)室多株藻的雜交檢測(cè)，驗(yàn)證了該法的可靠性和準(zhǔn)確性，進(jìn)而建立酶聯(lián)夾心雜交方法標(biāo)準(zhǔn)曲線（y=0.00002x+0.1225，R2=0.9883）實(shí)現(xiàn)了水樣的定量檢測(cè)。該法的最低可檢出