基于mcyJ基因檢測產(chǎn)毒微囊藻方法的研究.pdf

1、微囊藻是一類能在富營養(yǎng)化水體中形成水華的有害藍(lán)藻,并且多數(shù)都能產(chǎn)生微囊藻毒素,嚴(yán)重威脅了水生態(tài)系統(tǒng)及供水安全,近年來受到了越來越多的關(guān)注。常規(guī)微囊藻毒素的檢測分析方法主要有生物分析法(如小鼠腹腔注射)、物理化學(xué)分析法(如HPLC)和生物化學(xué)分析法(如ELISA,PPIA等)。但是上述方法均不能用于判斷微囊藻的潛在產(chǎn)毒能力。PCR法可以對(duì)產(chǎn)毒微囊藻進(jìn)行檢測,但它易產(chǎn)生假陽性。故開發(fā)產(chǎn)毒微囊藻的早期監(jiān)測、分析、預(yù)警系統(tǒng)具有十分重要的意義。<

2、br>　　現(xiàn)代分子生物技術(shù)的發(fā)展以及基因數(shù)據(jù)庫中的海量信息為我們建立以基因?yàn)闄z測對(duì)象的方法提供了可能。本文基于 mcyJ序列建立的酶聯(lián)夾心雜交法可對(duì)微囊藻的產(chǎn)毒基因直接進(jìn)行檢測,能有效、快速的用于產(chǎn)毒微囊藻的監(jiān)測和預(yù)警。
　　該論文的主要工作內(nèi)容和結(jié)論有:
　　(1)對(duì)產(chǎn)毒微囊藻的mcyJ基因序列進(jìn)行 BLAST分析并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,證實(shí)了mcyJ基因在產(chǎn)毒藍(lán)藻種間具有高度的保守性,可用于建立檢測產(chǎn)毒微囊藻的分子生物技術(shù)。<

3、br>　　(2)基于產(chǎn)毒微囊藻的mcyJ序列成功地設(shè)計(jì)、合成了捕獲探針和信號(hào)探針,并用酶聯(lián)夾心雜交法對(duì)該組探針進(jìn)行了檢驗(yàn),表明該組探針對(duì)于產(chǎn)毒微囊藻的檢測具有較高的特異性。
　　(3)基于產(chǎn)毒微囊藻的mcyJ序列建立了酶聯(lián)夾心雜交法,并對(duì)雜交條件進(jìn)行了優(yōu)化,通過對(duì)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)多株藻種的檢測,驗(yàn)證了該法的可靠性和準(zhǔn)確性。
　　(4)利用酶聯(lián)夾心雜交法檢測采集于喻家湖、南湖的水樣,并結(jié)合水樣的其他檢測指標(biāo)(總氮、總磷、葉綠素 a、