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文檔簡(jiǎn)介
1、青錢(qián)柳中含有多種活性成分,是一種很好的保健食品資源,但由于其資源匱乏且繁殖困難,嚴(yán)重制約青錢(qián)柳資源的開(kāi)發(fā)利用。本文選用青錢(qián)柳葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),采用目視法及二分法篩選獲得了高產(chǎn)三萜酸的細(xì)胞系,建立了穩(wěn)定的青錢(qián)柳細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系,在此基礎(chǔ)上采用攪拌式生物反應(yīng)器進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),對(duì)接種量、槳葉攪拌轉(zhuǎn)速及通氣量等重要參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,并研究了擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗規(guī)律,以期為工業(yè)化培養(yǎng)青錢(qián)柳細(xì)胞生產(chǎn)三萜酸類活性物質(zhì)提供理論支持。結(jié)
2、果如下:
以青錢(qián)柳葉片為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),并擇優(yōu)進(jìn)行繼代培養(yǎng),研究了細(xì)胞的生長(zhǎng)規(guī)律和三萜酸積累規(guī)律。(1)不同青錢(qián)柳葉片外植體所誘導(dǎo)的愈傷組織在生長(zhǎng)狀態(tài)及三萜酸含量方面存在顯著差異,通過(guò)篩選可獲得高產(chǎn)三萜酸愈傷系;(2)繼代次數(shù)對(duì)愈傷組織生物量及三萜酸積累有較大的影響,當(dāng)繼代到第10代左右,其生長(zhǎng)量及三萜酸含量基本趨于穩(wěn)定;(3)初步篩選獲得9個(gè)優(yōu)良的愈傷系,進(jìn)一步對(duì)其生長(zhǎng)量、三萜酸含量和產(chǎn)量進(jìn)行了系統(tǒng)篩查,發(fā)現(xiàn)6號(hào)愈傷
3、系生產(chǎn)性能最好,其三萜酸含量為2.55 mg/g。
研究了5L攪拌式生物反應(yīng)器的溶氧性能。通過(guò)對(duì)通氣量、攪拌速率、溫度、槳葉安裝位置及槳葉組合對(duì)氧傳質(zhì)系數(shù) KLa的影響的系統(tǒng)試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)上述五個(gè)參數(shù)對(duì)KLa均有較大影響,其中通氣量、攪拌速度和不同槳葉組合影響極顯著,培養(yǎng)溫度及槳葉安裝位置影響顯著。當(dāng)通氣量為1000 ml/min,攪拌速度為200 rpm,溫度為35℃,安裝高度H=8cm,槳葉在組合為2FDI時(shí),氧傳質(zhì)系數(shù)KLa
4、均達(dá)到最大值,分別為7.32、7.20、6.48、6.36、5.82 h-1。
優(yōu)化了攪拌式生物反應(yīng)器擴(kuò)大培養(yǎng)青錢(qián)柳懸浮細(xì)胞的主要工藝參數(shù)。優(yōu)化培養(yǎng)條件如下:培養(yǎng)溫度28℃,pH5.8±0.2,接種量5%,轉(zhuǎn)速80rpm,通氣量800 ml/min。優(yōu)化培養(yǎng)條件下,細(xì)胞的鮮重、干重、總?cè)扑岷考翱側(cè)扑岙a(chǎn)量均達(dá)到最大值分別為275.16 g/L、12.99g/L、4.64 mg/g和60.21mg/L。
研究了生物
5、反應(yīng)器擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗規(guī)律。(1)總糖濃度逐漸減少,至培養(yǎng)結(jié)束總糖濃度為4.6 g/L;(2)0-4d蔗糖濃度迅速減少,8d后濃度僅為2.72 g/L,16d后隨著蔗糖被消耗,細(xì)胞干重下降,三萜酸產(chǎn)量的積累速度增加;(3)0-4d還原糖濃度大幅度增加,最高濃度達(dá)到37.64 g/L,細(xì)胞干重增加,三萜酸產(chǎn)量積累減少;之后還原糖濃度直線下降,三萜酸產(chǎn)量急劇上升,細(xì)胞干重達(dá)到最大值,至培養(yǎng)結(jié)束還原糖濃度基本消耗完全;(4)8-16d
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