青錢(qián)柳、黑靈芝、獨(dú)角蓮中的活性物質(zhì)對(duì)人源宮頸癌HeLa細(xì)胞的作用研究.pdf

1、宮頸癌是婦科三大惡性腫瘤之一，在我國(guó)的發(fā)病率較高。其治療手段較為單一，且副作用較大，受到一定限制，因此篩選和研究更為有效的天然低毒治療藥物對(duì)宮頸癌的治療具有重要意義。青錢(qián)柳、靈芝、獨(dú)角蓮作為我國(guó)名貴中藥材，其有效成分對(duì)某些腫瘤的預(yù)防和治療具有一定作用，但對(duì)宮頸癌是否有治療作用鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。本文通過(guò)研究青錢(qián)柳多糖 (polysaccharides isolated from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljin

2、skjk，PCP)、黑靈芝子實(shí)體甾醇(sterol from fruit body ofGanoderma atrum，SGA)、獨(dú)角蓮有機(jī)溶劑提取物(the solvent extracts of Typhonieum giganteum Engler．，STGE)對(duì)人源宮頸癌HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)作用，探討了其是否有抑制宮頸癌生長(zhǎng)的作用及其可能機(jī)理，為青錢(qián)柳、靈芝和獨(dú)角蓮的抑癌作用，及其抑癌的活性成分的研究提供理論參考。 本研究

3、通過(guò)采用倒置顯微鏡對(duì)PCP、SGA和不同提取方法得到的STGE作用了24 h、48 h的HeLa細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察；用不同濃度的PCP、SGA和不同提取方法得到的STGE分別作用 HeLa 24 h、48 h后，通過(guò)四噻唑藍(lán)法(MTT法)，檢測(cè)PCP、SGA和STGE對(duì)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；Annexin法檢測(cè)PCP、SGA和STGE A對(duì)HeLa細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用；流式細(xì)胞儀對(duì)PCP、SGA作用后的HeLa細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)及RT

4、-PCR法檢測(cè)PCP、SGA作用后的HeLa細(xì)胞p16、p21、cyclinBl、bax、bcl-2 基因表達(dá)變化，得出了以下結(jié)果： ①在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，PCP組中的細(xì)胞形態(tài)變圓，生長(zhǎng)稀疏，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞體積增大；SGA組中的細(xì)胞貼壁率差，破碎細(xì)胞較多；不同提取方法得到的STGE各組中細(xì)胞形態(tài)呈圓形，體積變小，細(xì)胞核濃縮，多數(shù)細(xì)胞脫落而懸浮于培養(yǎng)基中，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，破碎細(xì)胞增多，STGE各組中STGEA對(duì)H

5、eLa細(xì)胞形態(tài)的影響性較大。 ②濃度為50、100、200、400μg/mL 的 PCP，20、40μg/mL 的SGA和100 mg/mL(生藥濃度) 不同提取方法得到的 STGE 均顯著性抑制 HeLa 細(xì)胞的生長(zhǎng)(P<0.01)；SGA對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制作用有時(shí)間和濃度依賴性。 ③Annexin法檢測(cè)表明：PCP和SGA引起HeLa細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用較弱，但隨著 SGA 作用時(shí)間的延長(zhǎng)，能微弱的增高細(xì)胞的凋亡率與

6、死亡率；STGE A引起 HeLa 細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用較強(qiáng)，并隨著STGEA作用時(shí)間的延長(zhǎng)，凋亡晚期細(xì)胞增多。 ④流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明：PCP作用HeLa細(xì)胞24h能夠顯著阻滯細(xì)胞于S期，且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞阻滯在S期的比例呈升高趨勢(shì)：SGA 能夠阻滯細(xì)胞于S期，但作用不明顯。 ⑤用RT-PCR法對(duì) PCP和SGA作用HeLa細(xì)胞基因的檢測(cè)表明：各組所提取的總RNA均有β-actin、p16、p21、cyclinB1