dl-96試劑 sop文件

1、XXX檢驗(yàn)科臨床微生物實(shí)驗(yàn)室DL96細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：WSWSOP1日期：年月版號(hào)：第1頁(yè)，共4頁(yè)【目的目的】規(guī)范DL96細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)隨機(jī)體外診斷試劑操作規(guī)程，保證檢驗(yàn)質(zhì)量?！驹揝OPSOP變動(dòng)程序變動(dòng)程序】本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任?！驹碓怼吭噭┌逵缮磻?yīng)孔和抗菌藥物MIC測(cè)定孔組成。在生化反應(yīng)孔中加入細(xì)菌懸液，經(jīng)3537℃孵育，在細(xì)菌代謝作用下

2、生化反應(yīng)直接顏色變化或經(jīng)加入顯色劑后產(chǎn)生顏色變化；抗菌藥物MIC采用微量肉湯稀釋法，加入還有細(xì)菌的MH肉湯培養(yǎng)基，經(jīng)3537℃孵育，根據(jù)試驗(yàn)孔是否出現(xiàn)渾濁（沉淀）確定細(xì)菌是否生長(zhǎng)。測(cè)定系統(tǒng)采用比色法對(duì)各項(xiàng)生化反應(yīng)進(jìn)行結(jié)果判定，根據(jù)細(xì)菌生化反應(yīng)的概率來(lái)完成細(xì)菌的鑒定；測(cè)定系統(tǒng)通過(guò)比濁法對(duì)抗生素進(jìn)行MIC半定量測(cè)定分析MIC值?！静僮鞒绦虿僮鞒绦颉?使用本試劑板的基本要求：1.1無(wú)特殊營(yíng)養(yǎng)要求的革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌和真菌等病原菌1.21

3、824小時(shí)分離培養(yǎng)的單個(gè)純菌落（或純培養(yǎng)物）。2隨機(jī)試劑板的選擇：2.1根據(jù)待測(cè)菌的培養(yǎng)特性、菌落特征、氧化酶實(shí)驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)結(jié)果以及革蘭染色情況，選擇好相應(yīng)的試劑板。2.2試劑板的選擇DL96E、DL96NE、DL96STAPH、DL96STREP、DL96FUNGUS3試劑板的接種3.1菌懸液與藥敏液的配置菌懸液制備：挑取純培養(yǎng)單個(gè)菌落于稀釋液瓶?jī)?nèi)壁研磨呈細(xì)菌懸液，要求如下：DL96E、DL96NE、DL96STAPH的菌懸液都制備0

4、.5麥?zhǔn)蠁挝?；DL96STREP菌懸液制備2麥?zhǔn)蠁挝唬籇L96FUNGUS菌懸液都制備1麥?zhǔn)蠁挝?；藥敏液的配置：具體請(qǐng)見(jiàn)細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)隨機(jī)體外診斷試劑板使用說(shuō)明書(shū)3.2試劑板的接種3.2.13.2.1DL96EDL96E試劑板試劑板:適用于氧化酶試驗(yàn)陰性的革蘭氏陰性桿菌的鑒定和抗菌藥物適用于氧化酶試驗(yàn)陰性的革蘭氏陰性桿菌的鑒定和抗菌藥物MICMIC測(cè)定。測(cè)定。3.2.1.1菌懸液制備：挑取純培養(yǎng)單個(gè)菌落于稀釋液瓶?jī)?nèi)壁研磨呈細(xì)菌懸液（0.5

5、麥?zhǔn)蠁挝唬?.2.1.2用連續(xù)移液器（配無(wú)菌移液吸頭）吸取該菌懸液加入試劑板A1A12、B1B12和C1—C4孔內(nèi)，每孔XXX檢驗(yàn)科臨床微生物實(shí)驗(yàn)室DL96細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號(hào)：WSWSOP1日期：年月版號(hào)：第1頁(yè)，共4頁(yè)3.2.4.6用連續(xù)移液器（配無(wú)菌移液吸頭）吸取該菌懸液加入試劑板A5A12孔內(nèi)，每孔100μl。3.2.4.7吸菌懸液500μl，加至肉湯培養(yǎng)基A內(nèi)，充分混勻，繼續(xù)加入試劑板A1A4、B1B7孔內(nèi)，每孔10

6、0μl。3.2.4.8在A1A4、A9、B1B7孔分別滴加無(wú)菌石蠟油2滴。3.2.4.9吸剩余肉湯培養(yǎng)基A50μl，加至肉湯培養(yǎng)基B內(nèi)，充分混勻，繼續(xù)加入試劑板的其余各孔（所有的抗菌藥物MIC測(cè)定試驗(yàn)孔、生長(zhǎng)對(duì)照孔C及6.5%NaCl），每孔100μl，并在C1孔滴加無(wú)菌石蠟油2滴。3.2.4.10剩余的菌液及吸頭浸入殺菌溶液內(nèi)浸泡滅菌。3.2.53.2.5DL96FUNGUSDL96FUNGUS試劑板試劑板:適用于真菌的鑒定和抗菌藥物

7、適用于真菌的鑒定和抗菌藥物MICMIC測(cè)定。測(cè)定。3.2.5.1菌懸液制備：挑取純培養(yǎng)單個(gè)菌落于稀釋液瓶?jī)?nèi)壁研磨呈菌懸液(1個(gè)麥?zhǔn)蠁挝?。3.2.5.2用連續(xù)移液器（配無(wú)菌移液吸頭）吸取該菌懸液100μl加至同化稀釋液內(nèi)，充分混勻，加入試劑板C1C11和D1D12孔內(nèi)，每孔100μl。3.2.5.3用連續(xù)移液器（配無(wú)菌移液吸頭）吸藥敏稀釋液100μl加入E12孔內(nèi)。3.2.5.4再吸菌懸液20μl，加至藥敏稀釋液內(nèi)，充分混勻，加入試劑板

8、E1E11和F2F12孔內(nèi)，每孔100μl。3.2.5.5剩余的菌液及吸頭浸入殺菌溶液內(nèi)浸泡滅菌。3.3試劑板的孵育撕開(kāi)不開(kāi)膠的紙對(duì)齊貼于測(cè)試板，3537℃孵育（DL96FUNGUS試劑板放置30℃濕盒內(nèi)孵育）4隨機(jī)試劑板的檢測(cè)4.1試劑板孵育培養(yǎng)1824小時(shí)后（個(gè)別生長(zhǎng)緩慢可延長(zhǎng)3648小時(shí)）檢測(cè)試劑板，按照使用說(shuō)明的要求向DL96E、DL96NE、DL96STAPH、DL96STREP測(cè)試板加入輔助試劑。4.1.1DL96E：先于A

9、12孔（VP）滴加VP試劑A、B各1滴，20分鐘后，再于A11孔（IND）滴加靛基質(zhì)試劑1滴，數(shù)分鐘后，于A10孔（PHE）滴加苯丙氨酸試劑1滴，立即判讀結(jié)果。4.1.2DL96NE：1.先于A11孔（IND）滴加靛基質(zhì)試劑1滴，數(shù)分鐘后，再于A10孔（NIT）滴加硝酸鹽還原試劑A、B各1滴，立即判讀結(jié)果。4.1.3DL96STAPH：先于A12孔（VP）滴加VP試劑A、B各1滴，30分鐘后，再于A10孔（PYR）滴加PYR試劑1滴及A