血涂片的制備和細(xì)胞大小的測(cè)量

1、一、目的要求 1.掌握血涂片的制備方法； 2.認(rèn)識(shí)紅細(xì)胞及各種白細(xì)胞的典型形態(tài)； 3.掌握顯微測(cè)微尺的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 涂片技術(shù)是制備血液樣品最常用的技術(shù)。將血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本，染色后可對(duì)血液中各種細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀察、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞大小測(cè)量等工作。根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算各細(xì)胞及細(xì)胞核的體積 橢球形：v=4πab2/3 a-長(zhǎng)半徑 b-短半徑

2、 圓球形：v=4πr3/3 r-半徑 圓柱形：v=r2h r-半徑 h-高,實(shí)驗(yàn)一、血涂片的制備和細(xì)胞大小的測(cè)量,三、實(shí)驗(yàn)用品 1.器材:醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、鑷子、經(jīng)脫脂洗凈的載玻片 、 雙凹片（推片）。 2.試劑:Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、方法與步驟(見(jiàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)) 1.血涂

3、片的制備與血細(xì)胞的觀察 2.顯微測(cè)微尺的使用五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1.繪制各種不同類型的血細(xì)胞,并說(shuō)明它們的主要作用； 2.任選5個(gè)紅細(xì)胞，測(cè)量其直徑，并計(jì)算出平均值。,采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹,采血,由于第一滴血中含單核白細(xì)胞較多，因此棄去第一滴血,推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側(cè),再取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動(dòng)輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開(kāi)成線狀。,,,,30~45°

4、;,兩玻片的角度以30~45°為宜，輕輕將雙凹片向前勻速推進(jìn)，即涂成血液薄膜。,染色,待涂片在空氣中完全干燥后，滴加數(shù)滴Wright’s染液蓋滿血膜為止，染色1～3 min。然后滴加等量蒸餾水，使其與染液均勻混合，靜置10～15 min。用蒸餾水沖去染液，吸水紙吸干，鏡檢。,,紅細(xì)胞 也稱紅血球，是血液中數(shù)量最多的一種血細(xì)胞，無(wú)細(xì)胞 核，也無(wú)細(xì)胞器，主要功能是運(yùn)輸和交換氧和二氧

5、化碳。,淋巴細(xì)胞 白細(xì)胞的一種。由淋巴器官產(chǎn)生，機(jī)體免疫應(yīng)答功能 的重要細(xì)胞成分,單核細(xì)胞 是體積最大的白細(xì)胞。其細(xì)胞核常偏位，呈多形性， 如卵圓形、腎形、馬蹄形、不規(guī)則形等,嗜中性粒細(xì)胞 即中性白細(xì)胞，呈圓形，胞質(zhì)淡紅色。胞核幼稚

6、 型的呈桿狀或馬蹄形，成熟的呈分葉狀，三葉的 較多見(jiàn)，中性粒細(xì)胞來(lái)源于骨髓的造血干細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞 是白細(xì)胞的一種，嗜酸性粒細(xì)胞增多的原因很多： 1.變態(tài)反應(yīng)性疾病：如哮喘、蕁麻疹、食物過(guò)敏和血管神經(jīng)性水腫。 2.各種皮膚?。喝缣彀挴彙捳钚云?/p>

7、炎等,嗜堿性粒細(xì)胞 胞質(zhì)內(nèi)含有較大的、橢圓形的嗜酸性顆粒。這類 白細(xì)胞也具有吞噬功能。,顯微測(cè)微尺的使用,顯微測(cè)微尺是用來(lái)測(cè)量在顯微鏡下所觀察到的物體的長(zhǎng)度、面積的工具，包括鏡臺(tái)測(cè)微尺、目鏡測(cè)微尺兩部分。在使用的過(guò)程中，鏡臺(tái)測(cè)微尺起標(biāo)定作用，利用它可以確定目鏡測(cè)微尺旋鈕上每小格代表的實(shí)際長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺標(biāo)定完成后，即可用于細(xì)胞樣品的測(cè)量。,,,,,,,,,

8、,,,,,每格又可分為10個(gè)小格，每小格的實(shí)際長(zhǎng)度為0.01mm=10µm,,總長(zhǎng)0.1mm,鏡臺(tái)測(cè)微尺,,,,,,,,,,,,,,,總長(zhǎng)1mm,共分為10格,目鏡測(cè)微尺,可以通過(guò)旋轉(zhuǎn)旋鈕移動(dòng)目鏡測(cè)微尺中交叉線的位置,使用方法,1.取下目鏡,將目鏡測(cè)微尺的刻度面向下放入目鏡中,旋上透鏡；2.將鏡臺(tái)測(cè)微尺蓋片面朝上放在載物臺(tái)上,用低倍鏡觀察, 調(diào)節(jié)焦距看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度；3.移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺,同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡,使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)

9、測(cè)微尺平行靠近,并將兩尺的“0”點(diǎn)刻度線或某刻度線對(duì)齊.然后從左向右查看兩尺刻度線另一重合處,記錄重合線間目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù).按下式計(jì)算目鏡測(cè)微尺每格等于多少微米。4.移去鏡臺(tái)測(cè)微尺，換血涂片，測(cè)量細(xì)胞長(zhǎng)度。 細(xì)胞長(zhǎng)度=目鏡測(cè)微尺測(cè)量所占小格數(shù)×目鏡測(cè)微尺每 小格代表的實(shí)際長(zhǎng)度,,目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定,,,,,,,,,,,,,,,,,n×aX=

10、 M,,X:目鏡測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度a:鏡臺(tái)測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度n:鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度數(shù)。M:目鏡測(cè)微尺的刻度數(shù)。,例如：鏡臺(tái)測(cè)微尺一小格為10µm，在目鏡測(cè)微尺“0”點(diǎn)到另一點(diǎn)與鏡臺(tái)測(cè)微尺正好重合，鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度數(shù)為5小格，當(dāng)目鏡測(cè)微尺的刻度數(shù)也為5小格，則目鏡測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度即為10µm（物鏡10×）；如目鏡測(cè)微尺的刻度數(shù)為20小格，則目鏡測(cè)微尺每格的實(shí)際長(zhǎng)度即為2.5µm（物鏡4