診斷試劑臨床研究要點

1、體外診斷試劑臨床研究技術要點,南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院童明慶,金標準或對照試劑的確定,臨床試驗通常是采用一個對照方法與待評價的方法同時檢測一系列標本，然后對結果進行比較分析。對照方法最好是金標準（Gold standard）方法，金標準：是指在現(xiàn)有條件下，公認的、可靠的、權威的診斷方法。臨床上常用的“金標準”有組織病理學檢查、影像學檢查、病原體分離培養(yǎng)鑒定、長期隨訪所得的結論及臨床常用的其他確認方法等。診斷準確度標準（ Dia

2、gnostic accuracy criteria）是使用一種方法或聯(lián)合多種方法，包括實驗室檢測、影像學檢測、病 理和包括隨訪信息在內(nèi)的臨床信息，來界定狀況、事件和所關注特征有 無的標準。,,對用于早期診斷、療效監(jiān)測、預后判斷等用途的體外診斷試劑，在進行與“金標準”的比較研究的同時，還必須對受試者進行跟蹤研究。研究者應明確受試者的入選標準、隨訪標準和隨訪時間。在沒有金標準方法可以對照時，亦可采用現(xiàn)用的有CFDA批文的方法。首先要

3、選擇目前臨床普遍認為質(zhì)量較好的產(chǎn)品。同時應充分了解所選擇產(chǎn)品的技術信息，包括方法學、臨床預期用途、主要性能指標、校準品的溯源情況、推薦的陽性判斷值或參考區(qū)間等，以利于和試驗試劑在相同或相近的性能特征條件下進行分析。在使用非金標準方法進行對比試驗時，只能進行符合性或一致性檢驗， 不能報告診斷特異度和診斷靈敏度。不能用非金標準的第三方試劑作為“裁判”，來分析評價對比試驗結果不一致的情況。,試驗量的確定,定量試驗可按照《體外診斷試劑臨床試

4、驗技術指導原則》的要求定性試驗亦可按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》來確定標本量，同時還應滿足統(tǒng)計學的要求為了使從樣本檢測結果所獲得的診斷靈敏度和診斷特異度與總體值的差小于允許誤差，對于配對試驗可用如下的公式根據(jù)預實驗結果進行樣本量計算,首先作檢驗假設：,樣本含量（對字數(shù)）的估算公式之一：,舉例預實驗提示甲、乙種培養(yǎng)基對于某菌屬的培養(yǎng)結果如下：甲培養(yǎng)基陽性、乙培養(yǎng)基陰性的π+-=b/(A+B)=0.04，甲培養(yǎng)基陰性、乙培養(yǎng)

5、基陽性的π-+= c/(a+c)=0.24；設α=0.05（雙側檢驗），β=0.10（單側） ；為了比較甲乙兩種培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果，問需觀察多少樣本對子（菌株）數(shù)？計算： πc=（0.24+0.04）/2=0.14,查雙側界值u0.05=1.96，單側 u0.10=1.28。代入公式：,=57（對）,樣本含量的估算公式二： n=(Uα/δ2)2×P(1-P) 或式中：

6、α為Ⅰ型錯誤（棄真）的概率（此處為假陰性率），有單雙側之分；通常取0.05。β為Ⅱ型錯誤（取偽）的概率（此處為假陽性率），只取單側；通常取0.10或0.20.uα和uβ為α和β取值的相應正態(tài)分位數(shù)。δ為總樣本率（p）與總體率（P）的最大允許誤差。P為診斷試劑的診斷靈敏度或診斷特異度。N為試驗的對子數(shù)；n為陽性樣本或陰性樣本數(shù)。,舉例預測待評價診斷試驗的靈敏度為90％ ，特異度85％ ；δ=0．05，規(guī)定α=0．05，病例

7、組和非病組應各調(diào)查多少人?已知：δ=0．05， α =0．05，U0.05 =1．96n=(1．96／0．05) 2×0．85(1—0．85)=196n=(1．96／0．05) 2×0．90(1—0．90) =138非病組需196人，病例組需138人。合計334人,用 計算：π+-=0.14π-

8、+=0.1πc=0.125N=1.5962/0.009=283,標本的收集,收集的標本應該具有代表性，如有病和非?。òū碛^健康人）標本，而不是簡單地只分為有病和健康人標本；有病的應包括各個病型、病情和病期以及不同性別、年齡組的標本，非病的特別應包括一些相似而容易混淆的其他病人，這樣才有利于了解各種生理病理狀態(tài)下的生物學變異，這一點相當重要。定量檢測試劑的比對，標本中分析物的量值要盡量包含整個可報告區(qū)間，如果不能獲得量值包含整個區(qū)

9、間的標本，至少應包括參考區(qū)間的大部分、臨床決定水平和有臨床意義的大部分區(qū)間。標本的量值大小要盡量均勻分布,,標本要和常規(guī)檢測用的標本一致；為了減少標本的變異，要做好病人采樣前的準備；要確定采樣時機（如果分析物隨生物鐘變異的話）；標本應盡可能新鮮，必要時應采用專門的運送系統(tǒng)采集和運送。如標本不能立即進行操作，則標本須按要求保存（必要時要做標本中分析物的穩(wěn)定性試驗）。有些標本在保存前需預處理，預處理的操作應按說明書規(guī)定進行。為了防止試驗

10、過程的批間變異，如有可能可將收集的標本妥善保存后同時檢測，其前提是標本儲存穩(wěn)定性已知。,試驗安排和質(zhì)控,比對試驗可設計為十天（或run）計劃或二十天（run）計劃，十天計劃的每次操作（run）均做兩次質(zhì)控，至少應包括陽性和陰性質(zhì)控（或低值和高值，或低、中、高值）；二十天計劃（或二十天以上）的每次操作至少做一次質(zhì)控。質(zhì)控物應和評價用的標本同時進行檢測（可以安排在每run的起始和結束各一次）。一旦發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結果失控，這批試驗結果必須剔除；同時

11、立即查找原因，采取糾正措施加以糾正。質(zhì)控物的基本性能要素是穩(wěn)定、均勻和沒有基質(zhì)效應（matrix effects）。質(zhì)控物可由試劑盒生產(chǎn)商或其他廠商提供，亦可自制，但必須滿足上述基本要求。通常的定性試驗只要準備陽性和陰性質(zhì)控物即可，對于產(chǎn)生兩個以上結果的定性試驗，可參照定量試驗的質(zhì)控要求進行。,每份標本的檢測結果只能是單次檢測結果。不能用重復檢測差異結果來糾正試驗數(shù)據(jù)；如果有理由一定要重測，在這種情況下，一致和不一致的標本都要重測。

12、已知結果的參考品系列（reference panels，參考品系列的真值已知或能夠溯源到好的診斷方法或臨床診斷，通常被國際機構或專業(yè)學會承認；該系列有各種不同濃度，可能含有干擾物，且干擾因不同方法而異）或能力比對（proficiency test，PT）用材料亦可作為標準結果來比較兩個方法，但它們可能存在基質(zhì)干擾（matrix interferences），免疫學方法還可能有分析物的表位區(qū)別（和天然的表位不同），因此用這些材料來比較兩

13、個方法時，如果分析物濃度接近陽性和陰性判定限（cutoff值），?？蓪е洛e誤定性結果。,同步盲法測試,標本的編號可由非檢測者實施并封存，等檢測完成后再揭盲。為了防止心理暗示影響操作者對結果的判斷，對照試驗應由不同操作者雙盲操作。如由同一人操作，則需將標本一分為二分別編號并封存。,定量試驗結果的科學評價,配對t檢驗,,回歸分析 Y=b X + a 求:相關系數(shù)r，或決定系數(shù)r2,,,,醫(yī)學決定

14、水平處的預期偏倚及其可信區(qū)間計算對于任何給定的X值，Y的估計值按以下公式計算：在給定的醫(yī)學決定水平Xc處的預期偏倚（Bc）的估計值，按以下公式計算：Bc的95%可信區(qū)間（在Xc處的真正偏倚），按以下公式計算：,,,,,定性試驗結果的科學評價,判斷待評價方法與金標準方法在檢測結果上是否有顯著差別，可以對上述四格表（表1）進行卡方檢驗（chi-square test）。當計算出來的X2值小于X20.05界值時，則兩種方法檢測結果的

15、差異無統(tǒng)計學意義。,判斷兩種方法的一致性，還可以進行kappa檢驗：觀察一致率：Po=機遇一致率：Pe= + ]/n K=Kappa值在0~1之間。kappa值越高表示一致性程度越好。一般認為，kappa值在0.75~1之間為一致性高，0.4~0.74之間為一致性一般，小于0.39以下為一致