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1、生物化學(xué)實驗報告——蛋白質(zhì)濃度測定:考馬斯亮藍(lán)染色法1蛋白質(zhì)濃度測定蛋白質(zhì)濃度測定——考馬斯亮藍(lán)染色法考馬斯亮藍(lán)染色法(實驗報告)(實驗報告)實驗日期:2015年4月28日實驗溫度:室溫實驗地點:生物化學(xué)與遺傳學(xué)實驗室指導(dǎo)老師:班級:2013級生物技術(shù)1班姓名:學(xué)號:I.實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?.學(xué)習(xí)考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法;2.熟悉蛋白質(zhì)含量測定的影響因素。II.實驗原理實驗原理考馬斯亮藍(lán)是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的,
2、這是一種迅速、可靠的通過染色法測定溶液中蛋白質(zhì)濃度的方法??捡R斯亮藍(lán)G250在酸性游離狀態(tài)下呈棕紅色,最大吸收波長465nm,與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色,最大吸收波長595nm,在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G250結(jié)合,反應(yīng)2min即可到達(dá)平衡,復(fù)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。蛋白質(zhì)—考馬斯亮藍(lán)G250復(fù)合物吸光系數(shù),使得在測定蛋白質(zhì)濃度時靈敏度很高,可測微克級蛋白質(zhì)含量。III.實驗試劑與儀器實驗試劑
3、與儀器1.實驗試劑生物化學(xué)實驗報告——蛋白質(zhì)濃度測定:考馬斯亮藍(lán)染色法3標(biāo)準(zhǔn)蛋白μg數(shù)020406080100A59500.5170.8050.9411.1571.1921.4651.4402.樣品測定中試管2支分別加未知濃度蛋白質(zhì)(或人正常血漿)0.4mL,各加5.0mL考馬斯亮藍(lán)試劑搖勻,室溫放置5min,以“0”號管為空白比色,以所測A595于標(biāo)準(zhǔn)曲線查蛋白質(zhì)含量。V.實驗結(jié)果分析實驗結(jié)果分析結(jié)果分析:實驗未能達(dá)到預(yù)期的一條直線,
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