實驗-考馬斯亮藍法測定蛋白質含量

1、實驗五實驗五考馬斯亮藍法測定蛋白質含量考馬斯亮藍法測定蛋白質含量一、實驗目的一、實驗目的1.掌握考馬斯亮藍染色法定量測定蛋白質含量的原理與方法2.熟練分光光度計的使用和操作方法。二、二、實驗原理實驗原理考馬斯亮藍G250測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種，它與蛋白質的疏水微區(qū)相結合，這種結合具有高敏感性。它在酸性溶液中呈棕紅色，最大光吸收峰在465nm，當它與蛋白質結合形成復合物時，其最大吸收峰改變?yōu)?95nm?？捡R斯亮藍G250—蛋白

2、質復合物呈藍色，在一定范圍內，595nm下光密度與蛋白質含量呈線性關系，故可以用于蛋白質含量的測定?？捡R斯亮藍結合法是近年來發(fā)展起來的蛋白質定量測定法，本方法具有操作方便、快速、干擾因素少的特點。離心機的使用說明：1.要離心的離心管和管套要稱重，重量不等時將水加在管套里。2離心管的放置是對角線放置，要求必須對稱。3.先將離心機轉速旋鈕恢復到零刻度后，再定時間，定好時間后緩慢旋轉轉速旋鈕，使離心機均勻的提速到預定轉速。分光光度計的使用說明

3、：1.接通電源開關，預熱20min后，再選擇須用的單色光波長。2.放入已加入溶液的比色皿，蓋上樣品室蓋，推動試樣架拉手，使對照比色皿（溶液裝入4／5高度，置第一格）置于光路上，調節(jié)100％透射比按鈕，使吸光度值A=0.00。3.推動試樣架拉手，使樣品比色皿置于光路上，讀出吸光度值。4.測量完畢，取出比色皿，洗凈后置于乙醇溶液中浸泡脫色。5.電源開關置于“關”，拔下電源插頭。三、試劑與器材：試劑與器材：1.試劑：（1）0.9％NaCl：9

4、gNaCl溶解在1L的容量瓶中。（2）標準蛋白質：稱取50mg結晶牛血清蛋白定溶于50ml容量瓶里。（3）染液：考馬斯亮藍G2500.5g，溶于250mL95%乙醇，再加入曲線。2.待測樣品測定試管中加蛋白質樣品1.0mL，再加入5.0mL考馬斯亮藍G250試劑，搖勻，放置5min后，在595nm波長下吸光度值，記錄A595。根據所測A595從標準曲線上查得蛋白質含量。并計算蛋白樣品的濃度（mgml）。五、五、實驗結果及分析實驗結果及分