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文檔簡介
1、流式細胞儀和細胞內細胞因子染色流式細胞儀和細胞內細胞因子染色無紅細胞的單細胞懸浮液制備的脾細胞，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS緩沖液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和細胞進行染色，在黑暗中在冰上20分鐘，進行表面的表達CD8α（APCCY7），CD4（PerCPCY5.5），CD3ε（FITC），CD137（FITC），CD19（PerCPCy5.5標記），或NK1.1（PECY7所有的抗體，BD生物科學，圣地亞
2、哥，CA）。細胞內染色，細胞透性使用的CytofixCytoperm試劑盒試劑盒，根據(jù)生產商的方案，和細胞內細胞因子使用腫瘤壞死因子α，腫瘤壞死因子α或IFNγ（PR700，BD生物科學）。四聚體分析，進行溫育的細胞懸浮液與H2KbTRP2的180188四聚體（SVYDFFVWL，APC標記，Sanquin，）或H2KbOVA257264四聚體，實物禮品CM25分鐘，在37C和5％CO2之前，隨后的表面抗體染色。表面MHCI類檢測是由孵
3、化IFNγ引物和未曝光B16.F10細胞與小鼠抗鼠MHCI類抗體，圣迭戈，隨后孵育檢測的山羊抗小鼠IgG2a抗體，測量樣品在FACS廣東II流式細胞儀（BecktonDickinson公司，圣迭戈，CA）。使用FlowJo軟件的數(shù)據(jù)進行了分析。流式細胞儀和細胞內細胞因子染色流式細胞儀和細胞內細胞因子染色無紅細胞的單細胞懸浮液制備的脾細胞，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS緩沖液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和細胞進
4、行染色，在黑暗中在冰上20分鐘，進行表面的表達CD8α（APCCY7），CD4（PerCPCY5.5），CD3ε（FITC），CD137（FITC），CD19（PerCPCy5.5標記），或NK1.1（PECY7所有的抗體，BD生物科學，圣地亞哥，CA）。細胞內染色，細胞透性使用的CytofixCytoperm試劑盒試劑盒，根據(jù)生產商的方案，和細胞內細胞因子使用腫瘤壞死因子α，腫瘤壞死因子α或IFNγ（PR700，BD生物科學）。四聚體
5、分析，進行溫育的細胞懸浮液與H2KbTRP2的180188四聚體（SVYDFFVWL，APC標記，Sanquin，）或H2KbOVA257264四聚體，實物禮品CM25分鐘，在37C和5％CO2之前，隨后的表面抗體染色。表面MHCI類檢測是由孵化IFNγ引物和未曝光B16.F10細胞與小鼠抗鼠MHCI類抗體，圣迭戈，隨后孵育檢測的山羊抗小鼠IgG2a抗體，測量樣品在FACS廣東II流式細胞儀（BecktonDickinson公司，圣迭戈
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