聯(lián)苯降解菌BP3三個(gè)2,3-二羥基聯(lián)苯1,2-雙加氧酶基因的表達(dá)及酶學(xué)特性研究.pdf

1、聯(lián)苯的氯代衍生物多氯聯(lián)苯(PCBs)是廣泛應(yīng)用的重要工業(yè)原料。大量研究表明多氯聯(lián)苯對(duì)人類有致癌作用。多氯聯(lián)苯的微生物降解一直是環(huán)境微生物研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。多氯聯(lián)苯的微生物好氧降解是通過聯(lián)苯代謝途徑進(jìn)行的。2，3-二羥基聯(lián)苯(2，3-DHBP)的開環(huán)是該途徑中的一步重要反應(yīng)，它由2，3-二羥基聯(lián)苯1，2-雙加氧酶催化。
　　 前期研究分離到一株聯(lián)苯降解菌Achromobacter sp.BP3。通過構(gòu)建其基因組文庫，篩選到三個(gè)含

2、有2，3-二羥基聯(lián)苯1，2-雙加氧酶基因的陽性克隆，它們帶有的重組質(zhì)粒分別為p118-2、p118-3和p118-5，對(duì)其中的外源片段進(jìn)行測序和分析后，推測了三個(gè)2，3-二羥基聯(lián)苯1，2-雙加氧酶基因(bphC、bphC2及xylE)。
　　 本研究將三個(gè)基因分別構(gòu)建到表達(dá)載體pET29a上，在E.coli BL21(DE3)中進(jìn)行了功能表達(dá)，獲得C-末端含有六個(gè)寡聚組氨酸的目的蛋白，利用Ni2+親和層析法純化，并研究其酶學(xué)特性

3、。
　　 酶學(xué)特性研究結(jié)果顯示：1.BphC、BphC2和XylE的最適反應(yīng)溫度分別為30℃、30℃和50℃；2.BphC、BphC2和XylE的最適反應(yīng)pH值分別為8.0、9.0和9.0；3.在1 mmol/L的濃度下，Cu2+和Co2+對(duì)三個(gè)酶的活性均有抑制作用，但對(duì)BphC的抑制最強(qiáng)烈(抑制率大于90％)，Mg2+對(duì)BphC酶活性基本沒有影響，對(duì)BphC2和XylE有抑制作用；Fe2+能促進(jìn)BphC2和XylE酶活性，表明