聯(lián)苯降解菌achromobactersp.bp3的分離鑒定及降解基因的克隆

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文聯(lián)苯降解菌Achromobacter sp.BP3的分離鑒定及降解基因的克隆姓名：董小軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：洪青20080601英文摘要I S O L A T I O N A N D C H A R A C T E I U Z A T I o N O FB I P H E N Y L ．D E G R A D I N G B A C T E R I U M 彳C 日R D 幾億坫彳C 珊S

2、P ．B P 3 ，A N D C L O N I N G O F C A T A B O L I C G E N E SA B S T R A C TA b a c t e r i a ls t r a i nc a p a b l eo f u t i l i z i n gb i p h e n y la st h es o l ec a r b o ns o u r c ef o ri t s g r o w t hw a s

3、i s o l a t e df r o m p e t r o l e u m - c o n t a m i n a t e d s o i l ．T h i sb a c t e r i u m W a s i d e n t i f i e dp r e l i m i n a r i l ya sA c h r o m o b a c t e r s p ．b a s e do n i t sp h y s i o l o g

4、 i c a l & b i o c h e m i c a lc h a r a c t e r sa n d16 Sr D N As e q u e n c e a n a l y s i s ，a n dd e s i g n a t e da sB P 3 ( G e n B a n k A c c e s s i o n N o ．E F 0 5 7 3 9 0 ) ．S t r a i nB P 3 c o u l

5、d t r a n s f o n n5 0m g ’L - 1o f b i p h e n y l w i t h i n12 h ，a n d y e l l o wm e t a - c l e a v a g ep r o d u c t ( 2 一h y d r o x y ·6 - O X O - 6 一p h e n y l h e x a - 2 ，4 - d i e n o a t c ，H O P D A

6、 ) d u r i n g b i p h e n y ld e g r a d a t i o n W a s d e t e c t e d ．T h eo p t i m a lp H f o rb i p h e n y ld e g r a d a t i o n r a n g e df r o mp H 7 ．0t op H 9 ．0 ，a n dt h eo p t i m a lt e m p e r a t u r

7、 e W a s3 5 0 C ．T h ed e g r a d a t i o nr a t ec o r r e l a t e d 塒mt h ei n i t i a l i n o c u l u m s i z e p o s i t i v e l y ．O n t h e c o n c e n t r a t i o n o f3 - 5 0 m g ’L ～，b i p h e n y l W a sd e g r

8、 a d e dr a p i d l y ．N os i g n i f i c a n te f f e c to f Z n 2 + ，A I ”，a n dF e 2 + W a so b s e r v e df o rb i p h e n y ld e g r a d a t i o n b y s t r a i nB P 3 ，w h e r e a sC u 2 + ，N i 2 + ，a n dC d 2 + s

9、h o w e d o b v i o u s i n h i b i t o r y e f f e c t ．S i x p o s i t i v ec l o n e s 晰t h 2 ，3 - d i h y d r o x y b i p h e n y l1 , 2 - d i o x y g e n a s e ( 2 ，3 - D H B P D O ) a c t i v i t yw e r e o b t a i

10、 n e d b y t h e c o n s t r u c t i o n o f e x p r e s s i o n l i b r a r y ．A n d t h r e e s t r u c t u r a l g e n e sd e s i g n a t e da sb p h C , b p h C 2 a n d x y l E f o rm e t a —c l e a v a g eo f 2 ，3 -

11、 D H B P w e r e p r e d i c t e d b a s e do ns e q u e n c i n ga n dO R F a n a l y s i so n l i n e ．T h ea m i n oa c i ds e q u e n c eo fB p h C 2 a n dX y l Es h o w e d 10 0 ％s i m i l a r i t y w i t h2 ，3 - D

12、H B P D Oa n d c a t e c h o l2 ，3 - d i o x y g e n a s e ，r e s p e c t i v e l y ,w h i l eB p h C e x h i b i t e d t h eh i 曲e s ts i m i l a r i t yo f 4 9 ％、Ⅳi 也2 ，3 - D H B P D O ．T h e s et h r e eg e n e sw e r

13、 el i g a t e di n t oe x p r e s s i o nv e c t o rp E T 2 9 a , r e s p e c t i v e l y , a n df u n c t i o n a le x p r e s s e di nEc o l iB L 2 1 ( D E 3 ) ．F u r t h e ra n a l y s i sr e v e a l e dt h a tb p h C

14、 2 a n dx y l El o c a t e do nt h e 幼乃o p e r o nf o rb i p h e n y ld e g r a d a t i o na n d x y t o p e r o n f o rx y l e n ed e g r a d a t i o n ，r e s p e c t i v e l y ．A16 ．7 - k bD N A f r a g m e n tc o n s

15、i s t e d 、) l ，i t l l e n t i r eb p h c l u s t e r ( b p h R A l , 4 2 X A 3 ．4 4 B C 2 H J I D ) W a so b t a i n e du s i n gn o r m a lP C R a m p l i f i c a t i o na n dc h r o m o s o m ew a l k i n g ．G e n e

16、se n c o d i n g i n t e g r a s ea n dt r a n s p o s o nr e l a t e d s e q u e n c e sw e r ed e t e c t e d u p s t r e a ma n dd o w n s t r e a mo f 幼^ c l u s t e r , r e s p e c t i v e l y ,i n d i c a t i n gt

17、h eb p h c l u s t e r m a y l o c a t eo na b i gm o b i l eg e n e t i ce l e m e n t ( M G E ) b a s e d o n t h e ．1 i t e r a t u r e a v a i l a b l e ．x y l E l i e d o nax y l o p e r o nc o m p r i n gx y l Z L