第32章臨床感染癥病原體檢驗(yàn)

1、第32章臨床感染癥病原體檢驗(yàn),正常人血液是無(wú)菌的，目前敗血癥一詞不用，常用菌血癥和膿毒癥，膿毒癥是指全身性炎癥反應(yīng)。菌血癥是指細(xì)菌侵入血循環(huán)，在血液中可檢測(cè)到細(xì)菌，包括一過(guò)性和持續(xù)性，有明顯感染癥狀。血液感染是一種危重的全身感染，提供病原學(xué)的診斷極為重要。 ．,1.常見(jiàn)病原菌,2.血液標(biāo)本的病原菌的檢驗(yàn),3.病原菌的檢驗(yàn)程序,1.標(biāo)本采集2.標(biāo)本直接檢查 (1)直接顯微鏡檢查; (2)抗原檢測(cè);

2、(3)核酸檢測(cè);3.分離培養(yǎng)與鑒定 (1)培養(yǎng)基選擇; (2)分離培養(yǎng)與鑒定;4.抗體檢測(cè) 常用ELISA、間接免疫熒光 技術(shù)等方法;5.藥物敏感性試驗(yàn),4.臨床意義,1.葡萄球菌菌血癥 由耐甲氧西林金黃色葡 萄球菌(MRSA)及凝固酶陰性葡萄球菌引起 的逐年增多，占10％～15％。2.腸球菌菌血癥 約占10％,常見(jiàn)泌尿生殖道、 消化道和腹腔感染的病人。3.G-桿菌菌血癥 主要侵犯免疫功

3、能低下的病人。,4. L型菌感染菌血癥 使用抑制細(xì)胞壁的抗 生素，由缺損細(xì)胞壁的細(xì)菌感染所致。5．厭氧菌菌血癥 常合并需氧菌感染，癥 狀重而復(fù)雜。6．真菌血癥 常由條件致病性真菌引起，有 念珠菌、曲霉和毛霉等。7．醫(yī)院感染菌血癥 近年來(lái)明顯增多，占 30％—60％。,第二節(jié) 中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染,1.常見(jiàn)病原體G+菌 葡萄球菌，肺炎鏈球菌， B群、 A群鏈球菌，消化鏈球菌，結(jié)核分枝 桿菌，產(chǎn)單

4、核細(xì)胞李斯特菌、炭疽 芽胞桿菌;G-菌 腦膜炎奈瑟菌，大腸埃希菌，銅 綠假單胞菌，卡他布蘭漢菌，類桿菌， 不動(dòng)桿菌，肺炎克雷白桿菌;,病毒 乙型腦炎病毒,柯薩奇病毒A 、B,脊髓灰質(zhì)炎病毒,新腸道病毒68～71,狂犬病毒;真菌及其他 新生隱球菌,白假絲酵母菌,鉤端螺旋體;,2.微生物檢驗(yàn)程序,見(jiàn)第一節(jié)血液感染或有關(guān)章節(jié)。對(duì)嬰幼兒不能腰穿時(shí)，用PCR技術(shù)檢測(cè)外周血，對(duì)腦膜炎條瑟菌感染者的陽(yáng)性率為100％，

5、且不受抗生素藥物治療的影響；涂片和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性率有限，且時(shí)間長(zhǎng)，用 PCR技術(shù)檢測(cè)腦脊液中結(jié)核分枝桿菌DNA，檢出率高，快速靈敏和特異，但要嚴(yán)格操作規(guī)程，避免假陽(yáng)性。,3.抗體檢測(cè),為病毒檢測(cè)的快速診斷方法，較常用。(1)中和試驗(yàn)：主要檢測(cè)中和抗體lgG，此抗 體持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)有診斷意義，陽(yáng)性率和特異 性均高。雙份血清效價(jià)4倍增高。(2)特異性IgM抗體測(cè)定：此抗體在病后4天即 可出現(xiàn)，2周可達(dá)高峰，常

6、用于早期診斷。 用 ELISA、間接免疫熒光法等檢測(cè)，敏感 性和特異性較高。,(3)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)：補(bǔ)體結(jié)合抗體為lgG 抗體，常在病后第二周出現(xiàn)，5—6周 達(dá)高峰，單份血清1：4為陽(yáng)性，雙份 血清效價(jià)增高4倍為陽(yáng)性，用于回顧 性診斷或流行病學(xué)調(diào)查。,(4)血凝抑制試驗(yàn)：可用于臨床診斷 及流行病學(xué)調(diào)查。血凝抑制抗體 在病后5天出現(xiàn)， 2周時(shí)達(dá)高峰， 雙份血清抗體效價(jià)增高4倍以上

7、有診斷價(jià)值，陽(yáng)性率高于補(bǔ)體結(jié) 合試驗(yàn)，但可出現(xiàn)假陽(yáng)性。,4.臨床意義,1．細(xì)菌性腦膜炎是常見(jiàn)類型，其中以 流行性腦脊髓膜炎為常見(jiàn)，結(jié)核性 腦膜炎呈回升趨勢(shì)，為防治重點(diǎn)。 肺炎球菌、鏈球菌腦膜炎仍常見(jiàn)， 流感嗜血桿菌腦膜炎以及其他G-桿 菌性腦膜炎有增多趨勢(shì)。,2．真菌性腦膜炎最常見(jiàn)是隱球菌 腦膜炎，其他真菌性腦膜炎如 白假絲酵母菌、球孢子菌漸增 多，免疫功能低下患者易并發(fā)。,3．流行

8、性乙型腦炎是人獸共患的自然 疫源性疾病。4．腸道病毒對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的危害性 已逐漸引起人們的關(guān)注和重視。還 不斷發(fā)現(xiàn)新腸道病毒68-71型引起的 腦膜炎及腦炎。,第三節(jié) 創(chuàng)傷和外科感染1.常見(jiàn)病原菌,2.微生物檢驗(yàn)程序,見(jiàn)第一節(jié)血液感染或有關(guān)章節(jié)。取創(chuàng)傷分泌物和膿液作標(biāo)本；放線菌首先要檢出標(biāo)本中的硫磺顆粒；檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌作抗酸染色鏡檢；檢測(cè)厭氧菌要作厭氧培養(yǎng)。由創(chuàng)傷、手術(shù)、侵人性器械操作等外科

9、治療引起的感染最為常見(jiàn)，并日漸增多。,第四節(jié) 上呼吸道感染,(一)常見(jiàn)病原體 1.革蘭陽(yáng)性 金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿 鏈球菌、肺炎鏈球菌、結(jié)核分枝桿菌、白喉棒 狀桿菌、厭氧菌、炭疽芽胞桿菌、白假絲酵母 菌、放線菌、奮森螺旋體; 2.革蘭陰性 腦膜炎奈瑟菌、大腸埃希菌、肺炎克雷白桿菌、 銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、腸桿菌、不動(dòng) 桿菌、百日咳桿菌、軍團(tuán)菌、肺炎支原體,(

10、二)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序,1. 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)見(jiàn)第一節(jié)血液感染及有關(guān)章節(jié)。2. 病原體檢測(cè)只對(duì)某些疾病診斷具有意義。 由于菌群復(fù)雜，正常寄生菌和種類繁多， 一份咽拭子分離出來(lái)的細(xì)菌不一定與疾病 有關(guān)，另外由于接受藥物治療，使某些細(xì) 菌受到抑制，可影響陽(yáng)性檢出率。因此， 在分析結(jié)果時(shí)應(yīng)緊密結(jié)合臨床。,3. 鼻咽拭子標(biāo)本的檢測(cè)有助于猩紅熱、風(fēng)濕熱、急性腎小球腎炎病人的臨床診斷；還可檢出化膿鏈球菌、奮森螺旋體、腦膜炎奈瑟

11、菌、麻風(fēng)桿菌等以協(xié)助診斷；對(duì)白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的診斷有意義，應(yīng)結(jié)合臨床。,4. 呼吸道還可見(jiàn)病毒感染，常見(jiàn) 普通感冒或流行性感冒，咽炎 和扁桃腺炎等，均應(yīng)結(jié)合臨床 進(jìn)行診斷。,第五節(jié) 下呼吸道感染,(一)常見(jiàn)病原體1.革蘭陽(yáng)性 金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、 肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、腸球菌、結(jié)核 分枝桿菌、白喉棒狀桿菌、炭疽芽胞桿 菌、白假絲酵母菌、毛霉、曲霉;,2.革蘭陰性

12、 腦膜炎奈瑟菌、黃色球菌、大腸埃希菌、克雷白桿菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、百日咳桿菌、軍團(tuán)菌、支原體,3.病毒 腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨細(xì)胞病毒、純皰疹病毒、麻疹病毒等,(二)細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)程序一般要求下呼吸道感染培養(yǎng)的細(xì)菌濃度應(yīng)≥107CFU／ml，可視為病原菌，104CFU／ml視為污染菌。介于兩者之間時(shí)，要連續(xù)分離培養(yǎng)兩次以上。,痰培養(yǎng)標(biāo)本的前處理：用無(wú)菌鹽水將洗滌3次，洗去痰

13、中的常居菌，然后加入等量的(pH7．6)1％胰酶溶液，放置37℃90min即可使痰液均質(zhì)化。,支氣管分泌物等要離心沉淀，以生理鹽水適當(dāng)稀釋后,直接涂片染色鏡檢:1)正染色法：適用于多種標(biāo)本及培養(yǎng) 物，將標(biāo)本固定于潔凈玻片上直接 染色。常用革蘭染色，蘇本索一伊 紅染色(HE)，乳酸酚棉藍(lán)染色，過(guò) 碘酸錫夫染色(PAS)，嗜銀染色(GMS) 等;,2)負(fù)染色法：用真菌不著色而使背 景著色,檢查新型隱球菌，如

14、用 墨汁負(fù)染色鏡檢找隱球菌。,(三)臨床意義,1.下呼吸道感染指肺實(shí)質(zhì)性炎癥的肺 炎和支氣管粘膜炎癥的支氣管炎， 是病死率高的疾病。近幾年來(lái)呈上 升趨勢(shì)。,2.細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)診斷有重要意義， 采集痰要來(lái)自于下呼吸道合格 的標(biāo)本，提高檢出率和陽(yáng)性的 正確率。,3.細(xì)菌性肺炎為最常見(jiàn)的類型，肺 炎鏈球菌所致仍為常見(jiàn)，由流感 嗜血桿菌，金黃色葡萄球菌、MRSA 和G-桿菌所致肺炎比例明顯上升， 軍團(tuán)菌

15、肺炎引起了重視。在醫(yī)院感 染中，條件致病菌和耐藥菌的G-桿 菌占50％以上，成為醫(yī)院內(nèi)肺炎的 主要致病菌。,4.支原體肺炎常以不典型肺炎表現(xiàn)， 近年發(fā)生率上升, 約80％的慢性 氣管炎病人合并有支原體感染。約 占肺炎的10％-20％ 。,5.真菌性肺炎是致病性真菌和條件致 病性真菌所引起。目前以條件致病 性真菌感染致病為主，并呈上升趨 勢(shì)，以白假絲酵母菌為主，毛霉、 曲霉和隱球菌也常見(jiàn)。常合并多

16、種 細(xì)菌感染。,第六節(jié) 消化道感染,(—)常見(jiàn)的病原體 1.腸毒素為主的病原菌 霍亂弧菌、志賀菌(福氏、宋內(nèi))、 大腸埃希菌(ETEC、EHEC、EAggEC)、 金黃色葡萄球菌、難梭菌、產(chǎn)氣莢 膜梭菌。,2.侵襲性為主的病原菌 沙門菌、大腸埃希菌(EPEC、EIEC )、 志賀菌(鮑氏、志賀)、彎曲菌、副溶 血弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、結(jié)核 分枝桿菌、白假絲酵母菌。,3.病毒 輪狀

17、病毒、?？刹《?、Norwolk病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、腺病毒。,病原學(xué)檢驗(yàn)程序,采集膿血或糊狀新鮮糞便，應(yīng)在急性期，使用抗生素前進(jìn)行腸道細(xì)菌多為G-桿菌，形態(tài)區(qū)分困難，不做涂片鏡檢。檢驗(yàn)程序見(jiàn)第一節(jié)血液感染。,1.臨床意義,1．感染性腹瀉 最為常見(jiàn)，為胃腸炎 的癥狀，由多種病原體感染所致。2．細(xì)菌性痢疾是指由志賀菌屬(福氏和 宋內(nèi)氏)引起的腸道傳染病。常有里 急后重和膿血樣便，中毒性痢疾見(jiàn)于

18、 小兒。發(fā)病率呈下降趨勢(shì)。糞培養(yǎng)對(duì) 診斷有價(jià)值。,3．細(xì)菌性食物中毒常見(jiàn)于沙門菌、副 溶血弧菌、致病性大腸埃希菌、葡 萄球菌、肉毒棱菌、臘樣芽胞桿菌 食物中毒。多發(fā)生在夏秋季，以暴 發(fā)和集體發(fā)病為特征。,4．致病性大腸埃希菌的腸道感染分 為5類。即ETEC可致霍亂樣腸毒素 水瀉，常見(jiàn)于兒童和旅行者腹瀉； EPEC可引起嬰幼兒腹瀉；EIEC可 引起志賀菌樣粘液膿血便；EHEC

19、的0157：H7血清型可引起出血性 腸炎和溶血性尿毒綜合征；EAggEC 是新近報(bào)道可引起慢性腹瀉的大腸 埃希菌。,5．消化性潰瘍幽門螺桿菌感染主要 部位是胃及十二指腸球部。大量 研究及臨床證明胃炎、消化性潰 瘍主要是HP所引起，HP可能還參 與了胃癌的形成。從此消化性潰 瘍經(jīng)抗感染的治療而成為一個(gè)新 的概念，并取得好的療效。,6．近年來(lái)胃腸炎的病毒感染呈上升的 趨勢(shì) (1)

20、輪狀病毒常引起幼兒腹瀉； (2)腺病毒是引起兒童腹瀉的主要病原， 還可引起成人腹瀉； (3)Norwolk病毒常感染成人和大齡兒 童，引起水樣便或黃稀便的腹瀉； (4)?？刹《境Ｒ饗胗變焊篂a。,第七節(jié) 尿路感染,(一)常見(jiàn)病原菌 80％為G-桿菌，大腸埃希菌占70％以上， 其次為變形桿菌、銅綠假單胞菌、克雷伯 桿菌、腸桿菌、沙雷菌、產(chǎn)氣桿菌、沙門 菌等；20％為G+菌，其中以腸球菌為多見(jiàn)，

21、 次為葡萄球菌、糞鏈球菌、結(jié)核分枝桿菌， 少數(shù)為厭氧菌等； 支原體、衣原體、真菌感染呈上升趨勢(shì)； 急性感染多見(jiàn)于大腸埃希菌，慢性感染多 見(jiàn)于變形桿菌和銅綠假單胞菌。,(二)病原學(xué)檢驗(yàn)程序,(1)要嚴(yán)格無(wú)菌操作,收集晨起第一次清潔 中段尿標(biāo)本，其結(jié)果才可靠。(2)標(biāo)本直接顯微鏡檢查 可用1滴尿涂片 作染色鏡檢是有意義的方法。如平均 每個(gè)視野≥1個(gè)細(xì)菌(表示細(xì)菌定量培 養(yǎng)≥ 105／ml)率

22、達(dá)90％以上。(3)尿細(xì)菌定量培養(yǎng)診斷標(biāo)準(zhǔn)是以細(xì)菌數(shù)≥ 105／ml為真性細(xì)菌尿 ,104-105／ml為 可疑陽(yáng)性，需再?gòu)?fù)查。,(三)臨床意義,1.尿路感染主要經(jīng)尿道口上行感染所致，極 少數(shù)為血行感染，即從體內(nèi)感染灶侵入血 流到達(dá)腎引起腎盂腎炎。尿液細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn) 可反映腎、膀胱、尿道、前列腺等處的炎 癥變化。臨床表現(xiàn)主要有尿頻、尿急、尿 痛、排尿困難和腰痛等。,2．尿路感染常見(jiàn)腎盂腎炎(急性和慢性

23、)、 膀胱炎(急性為主)、尿道炎(細(xì)菌性 尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿 道炎)、前列腺炎(常見(jiàn)慢性)等。,3．尿路感染需要明確部位和急性 與慢性，主要依病原菌檢測(cè)， 還要緊密結(jié)合臨床綜合考慮作 出診斷，藥物敏感試驗(yàn)對(duì)指導(dǎo) 臨床合理使用有效抗生素有重 要意義。,第八節(jié) 性傳播疾病,性傳播疾病(STD)是指以性行為為主要傳播途徑的一組傳染病。 STD有二十幾種，1991年8月我國(guó)確認(rèn)

24、8種STD為重要防治的病種，如梅毒、淋病、軟下疳、性病淋巴肉芽腫、非淋菌性尿道炎、艾滋病、尖銳濕疣、生殖器皰疹8種。,STD在概念與病種范圍上不同于傳統(tǒng)的性病，性病是指以性交為主要傳播途徑的傳染病。性病只包括梅毒、淋病、軟下疳、性病淋巴肉芽腫和腹股溝肉芽腫5種。,一、梅毒螺旋體感染的檢查,(一)標(biāo)本采集 取下疳分泌物或二期皮疹或 病灶滲出物或局部淋巴結(jié)等穿刺物為標(biāo)本。(二)微生物檢驗(yàn)1．直接顯微鏡檢查 ①

25、用暗視野顯微鏡直接 鏡檢。有動(dòng)力的梅毒螺旋體。②鍍銀染色 用光學(xué)顯微鏡直接檢查螺旋體。③用直接 熒光檢測(cè)法(IFA)檢查見(jiàn)亮綠色熒光的梅毒 螺旋體,有診斷價(jià)值，主要適用于一、二期 梅毒。,2．梅毒血清學(xué)試驗(yàn) ①非螺旋體抗原 試驗(yàn)主要測(cè)定反應(yīng)素，如VDRI、USR、 RPR試驗(yàn)為篩查試驗(yàn)；②密螺旋體抗 原試驗(yàn)：主要測(cè)定特異性抗體，如 TPHA、FTA—ABS、FTA-ABSDS、MH

26、A- TP試驗(yàn)等，特異性高為證實(shí)試驗(yàn)。,3．PCR 快速敏感特異，可檢測(cè)梅毒 螺旋體DNA片段，對(duì)分析疑難病例 有幫助。4．暗視野鏡檢和血清學(xué)試驗(yàn)為目前 實(shí)驗(yàn)室檢查的金標(biāo)準(zhǔn)。,(三)臨床意義,1．梅毒分期：①一期梅毒為硬下疳， 病灶中有大量螺旋體，適用涂片 直接鏡檢；②二期梅毒是梅毒疹 期，病期在2年以內(nèi)，梅毒疹及淋 巴結(jié)有大量的螺旋體；③三期梅毒 為晚期梅毒，病期2-5年或更長(zhǎng)，

27、 引起心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損。,2．梅毒血清學(xué)試驗(yàn)并非梅毒所特有， 應(yīng)結(jié)合臨床仔細(xì)分析、除外假陽(yáng) 性反應(yīng)。近年來(lái)新方法有應(yīng)用前 景，如①競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)抗螺旋 體抗體；②用梅毒重組蛋白作免 疫印跡法檢測(cè)梅毒血清；③用梅 毒螺旋體全細(xì)胞溶解物作抗原免 疫印跡法；④特異性IgG酶免疫法。,二、淋病奈瑟菌感染的檢查,(一)微生物檢驗(yàn)1.用無(wú)菌棉拭子取尿道膿液或?qū)m頸膿液和 分泌物。抵抗

28、力極低易白溶，應(yīng)立即送 檢或床旁自接接種2.取分泌物標(biāo)本涂片染色鏡檢，為革蘭陰 性雙球菌，特別是見(jiàn)白細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌，有 助于診斷3.抗原檢測(cè) 可用EIASA及免疫熒光技術(shù)檢 測(cè)抗原，對(duì)診斷較有幫助。,4．核酸檢測(cè) PCR檢測(cè)DNA片段，快速 敏感特異，但要注意假陽(yáng)性，需結(jié) 合臨床進(jìn)行診斷。5．分離培養(yǎng)與鑒定 在選擇培養(yǎng)基上 見(jiàn)典型菌落鏡檢，氧化酶、糖發(fā)酵 等生化試驗(yàn)，熒光抗體試驗(yàn)鑒定確

29、 證。6．淋病奈瑟菌培養(yǎng)是目前實(shí)驗(yàn)室的金 標(biāo)準(zhǔn)。,(三)臨床意義,1．淋病奈瑟菌所致淋病，常見(jiàn)于男性淋菌 性尿道炎(急性和慢性)、附睪炎，前列 腺炎等；女性淋菌性尿道炎、宮頸炎、 陰道炎等；女孩陰道炎和尿道炎，主要 由直接或間接傳染。亦可發(fā)生全身性淋 病(淋菌性菌血癥、淋菌性眼炎和咽炎等)。2．淋病是目前世界上發(fā)病率最高的性病， 女性易受感染，易發(fā)生在性活躍的中青年。,三、軟下疳性病的檢查,

30、是由杜克嗜血桿菌感染引起生殖器疼痛性潰瘍及所屬淋巴結(jié)化膿性病變的性傳播疾病。 (一)采集潰瘍膿液或分泌物為標(biāo)本。 (二)微生物檢驗(yàn) 1．標(biāo)本直接涂片染色，呈鏈狀或“龜 群狀’’排列G-菌，可初步診斷。,2．PCR 檢測(cè)病原菌核酸、快速敏感 特異、有助于診斷。 3．分離培養(yǎng)與鑒定 可選用選擇培養(yǎng) 基培養(yǎng)，可見(jiàn)典型菌落。再經(jīng)涂片 染色鏡檢和生化反應(yīng)鑒定，可明確 診斷。4．軟下疳實(shí)驗(yàn)室檢查的

31、金標(biāo)準(zhǔn)為培養(yǎng) 加PCR檢測(cè)。,(三)臨床意義,1．本病性交傳染，間接傳染少見(jiàn)。多見(jiàn) 于女性，男女比1：2，但男性病人癥 狀重。病變多在外生殖器，也可播散 到其他部位的皮膚和粘膜。2．軟下疳發(fā)生1～2周后，有10％～30％ 患者出現(xiàn)一側(cè)腹股溝淋巴結(jié)炎和淋巴 結(jié)周圍炎稱橫痃。,四、性病淋巴肉芽腫的檢查,(一)微生物檢驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)室的金標(biāo)準(zhǔn)是分離培養(yǎng)加PCR。1.取淋巴結(jié)膿液或?qū)m頸和直腸拭子或活

32、檢材料為標(biāo)本：2.標(biāo)本直接涂片作Giemsa染色檢查衣原 體及其包涵體；熒光抗體(DFA)染色 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)衣原體包涵體,3．抗原檢測(cè) ①用熒光抗體(DFA)染色檢測(cè)抗原； ②酶免疫檢測(cè)(EIA)衣原體可溶性 抗原,4．PCR檢測(cè)沙眼衣原體DNA敏感性、 特異性達(dá)100％和93％，可用于 早期診斷;,5．分離培養(yǎng)可用雞胚培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng) 和動(dòng)物接種方法,分離培養(yǎng)病原體， 涂片染色鏡檢

33、，免疫熒光檢測(cè)、生 化反應(yīng)作鑒定;6．抗體檢測(cè) ①檢測(cè)補(bǔ)體結(jié)合抗體， 效價(jià)達(dá)l：64有診斷意義；②微量免 疫熒光試驗(yàn)可測(cè)抗體，滴度1：512 有意義。,細(xì)菌性陰道病的檢查,(一)微生物檢驗(yàn)1.由陰道加特納菌引起的生殖道性傳 播疾病。2.采集陰道分泌物及感染部位的標(biāo)本3.直接涂片染色鏡檢，可觀察到線索 細(xì)胞，有大量多形性G-桿菌,實(shí)驗(yàn)室 檢查的金標(biāo)準(zhǔn)。,4．陰道分泌物pH和胺試驗(yàn) pH4．5

34、； 標(biāo)本中滴加10％KOH 1滴即可發(fā)出 魚腥味為陽(yáng)性。5．分離培養(yǎng)與鑒定 將陰道分泌物接 種于人血平板作培養(yǎng)，48h后觀察 菌落特征，同時(shí)作生化試驗(yàn)等進(jìn)行 鑒定。,(二)臨床意義,1．主要是陰道內(nèi)乳酸桿菌受抑制，厭氧菌 大量生長(zhǎng)繁殖，而發(fā)生混合性感染的細(xì) 菌性陰道病。可分解氨基酸產(chǎn)胺而發(fā)生 魚腥味，亦使pH上升。2．主要引起細(xì)菌性陰道病，也可引起產(chǎn)后 感染，流產(chǎn)等婦科疾病。3

35、．分離培養(yǎng)一般不用，因20- 40％正常婦 女陰道中也可檢出此菌，應(yīng)結(jié)合臨床。,六、性傳播衣原體感染的檢查,(一)微生物檢驗(yàn)?zāi)壳皩?shí)驗(yàn)室檢查衣原體的金標(biāo)準(zhǔn)是培養(yǎng)加PCR。1.用無(wú)菌棉拭子采集宮頸、男性尿道分泌物或 病變部位活檢標(biāo)本。2.直接顯微鏡檢查 ①涂片Giemsa染色鏡檢， 見(jiàn)上皮細(xì)胞包涵體有診斷價(jià)值，原體呈紫紅 色或紅色，始體為藍(lán)色或暗藍(lán)色。②免疫熒 光檢查：用直接法熒光抗體(DFA)染色檢查 細(xì)

36、胞內(nèi)有典型的衣原體包涵體；3.抗原檢測(cè) ELISA檢測(cè)衣原體特異性抗原。 具有快速敏感特異性高的特點(diǎn)。,4．核酸檢測(cè) PCR和LCR法：檢查分泌物和 尿標(biāo)本中衣原體DNA片斷，快速敏感特異。5．分離培養(yǎng)與鑒定 有細(xì)胞培養(yǎng)(Hela細(xì)胞)、 雞胚卵黃囊和小白鼠(腹腔、腦內(nèi)、鼻腔 內(nèi))接種三種方法，取培養(yǎng)細(xì)胞涂片、 Giemsa和碘染色鏡檢、熒光抗體染色、 ELISA、PCR等進(jìn)是測(cè)特異性抗體，也

37、可 對(duì)分離出的病原體進(jìn)行血清學(xué)分型。,(三)臨床意義,1．沙眼衣原體沙眼生物變種有18個(gè)血 清型，D-K型引起NGU；A、D、B引 起沙眼。2．由衣原體引起的性傳播疾病，發(fā)病 率呈明顯上升趨勢(shì)，引起全世界重 視，并將此列為獨(dú)立的性傳播疾病。 常可引起女性不孕、男性不育癥。 此病常臨床癥狀輕或隱性感染。,七、性傳播支原體感染的檢查,(一)微生物檢驗(yàn)1.取宮頸分泌物、男性分泌物和無(wú)菌中 段尿

38、或感染部位標(biāo)本。2.將標(biāo)本涂片、革蘭染色或Giemsa染色 鏡檢。因支原體無(wú)固定形態(tài),故意義不大。3.PCR檢測(cè)支原體DNA,敏感性特異性均高， 且快速，但應(yīng)避免假陽(yáng)性。4.支原體營(yíng)養(yǎng)要求高，選用選擇培養(yǎng)基培 養(yǎng),可見(jiàn)典型呈“油煎蛋狀”菌落，為陽(yáng) 性。目前實(shí)驗(yàn)室檢查的金標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)菌培養(yǎng)。,(二)臨床意義,1．解脲脲原體為條件致病菌，故應(yīng)結(jié) 合臨床考慮診斷和治療。2．NGU并非都由沙眼衣原體和支原體 所引

39、起，還有其他微生物可引起， 因此應(yīng)結(jié)合臨床考慮診斷及治療。3.支原體所致的STD呈上升趨勢(shì)，應(yīng)引 起重視。也引起女性不孕、習(xí)慣性 流產(chǎn)不育等危害。,八、性傳播病毒性感染的檢查,(一)微生物檢驗(yàn)1．CA的檢查 金標(biāo)準(zhǔn)是PCR(1)醋酸白試驗(yàn)：病變局部出現(xiàn)白色 丘疹或白斑為陽(yáng)性，因是非特異 性檢查，亦有假陽(yáng)性。,(2)細(xì)胞學(xué)檢查：陰道壁或?qū)m頸細(xì)胞涂片 作巴氏染色檢查，見(jiàn)空泡化細(xì)胞及角 化不良細(xì)

40、胞。(3)病毒學(xué)檢查：因PCR檢測(cè)HPV的DNA，用 DNA探針做原位雜交檢查，其敏感性及 特異性均高，并快速。(4)亦可用免疫組化技術(shù)檢測(cè)病變組織中 的HPV抗原。必要時(shí)做組織病理學(xué)檢查。,2．GH的檢查,金標(biāo)準(zhǔn)是培養(yǎng)加PCR(1)細(xì)胞學(xué)檢查：以水皰底部刮出物涂片， 巴氏染色或姬姆薩染色鏡檢，具有特 征性的多核巨細(xì)胞或核內(nèi)病毒包涵體。(2)病毒抗原檢測(cè)：從病損處取標(biāo)本，用 ELISA或單克隆

41、抗體直接免疫熒光法檢 測(cè)HSV抗原，用于診斷;(3)國(guó)外分別用HSV—1和HSV-2型的單克隆 抗體作酶聯(lián)免疫法測(cè)定標(biāo)本，其敏感性 和特異性均達(dá)到100％，還作型鑒定。,(4)用PCR檢測(cè)標(biāo)本中HSV的DNA，并 可用于分型, 敏感性高且快速方 便。(5)分離培養(yǎng)：常用人胚腎和兔腎細(xì) 胞作為培養(yǎng)基，將皮損處標(biāo)本接 種進(jìn)行培養(yǎng)；還可用雞胚絨毛尿 囊膜培養(yǎng)和小白鼠的乳鼠腦內(nèi)接 種。,

42、(二)臨床意義,性傳播病毒性感染主要是指尖銳濕疣(CA)和生殖器皰疹(GH)兩種性傳播疾病。CA是由人乳頭瘤病毒(HPV)所引起皮膚粘膜良性贅生物的性傳播疾病。HPV目前已發(fā)現(xiàn)77型，引起CA主要是HPV—6和11型，次為16型和18型。 GH主要由人類單純皰疹病毒2型(HSV-2)引起的常見(jiàn)性傳播疾病。,1．CA和GH常根據(jù)病史及典型臨床表 現(xiàn)?？稍\斷，實(shí)驗(yàn)室檢查可幫助 確診及分型鑒定。CA主要經(jīng)性接

43、觸傳播，也可通過(guò)間接傳播，母 嬰垂直傳播。 GH主要經(jīng)性接觸 傳播，也可經(jīng)母嬰垂直傳播。,2．CA發(fā)病率僅次于NGU，有增長(zhǎng)趨 勢(shì)。CA也可引起女性不孕和流產(chǎn)、 男性不育。HPV-6型和11型稱為 良性型；HPV6型和18型稱為高危 型；HPV-31、33和35型稱為中危 型。分型非常重要，決定治療及 預(yù)后。,3.GH中HSV-2型占90％，HSV-1型 占10％。HSV-1型主要引