呼吸道病原體檢測(cè)ppt課件

1、呼吸道病原體檢測(cè),陸歡平,呼吸道感染,呼吸道感染是指病原體感染人體的鼻腔、咽喉、氣管和支氣管等呼吸系統(tǒng)分為上呼吸道感染和下呼吸道感染,上呼吸道感染,常見急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱，是呼吸道最常見的一種傳染病常見病因?yàn)椴《?，少?shù)由細(xì)菌引起?；颊卟环帜挲g、性別、職業(yè)和地區(qū)。不僅具有較強(qiáng)的傳染性，而且可引起嚴(yán)重并發(fā)癥,下呼吸道感染,包括急性氣管/支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎、支氣管擴(kuò)張等由病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體

2、、軍團(tuán)菌等微生物引起，其防治應(yīng)遵循預(yù)防為主、準(zhǔn)確診斷、及時(shí)治療的原則，治療時(shí)必須明確引起感染的病原體以選擇有效的抗生素,呼吸道病原體,常見的呼吸道病原體主要有病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體和立克次體等據(jù)統(tǒng)計(jì)，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起一種病原體可引起多種臨床癥狀，同一臨床表現(xiàn)可由多種病原體引起,呼吸道病原體,細(xì)菌：細(xì)菌引起呼吸道感染的機(jī)會(huì)比病毒少。一旦感染，癥狀多較嚴(yán)重，定位比較明顯，如扁桃體炎、中耳炎、鼻竇炎等。由細(xì)菌引起的兒

3、童肺炎往往是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌或金黃色葡萄球菌,呼吸道病原體,病毒，包括鼻病毒、冠病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等,呼吸道病原體,支原體、衣原體感染導(dǎo)致的呼吸道感染與其它病原體感染的早期臨床表現(xiàn)類似?？赡茉?-3天后咳嗽的癥狀會(huì)表現(xiàn)比較突出。在小于30歲的年輕人中，肺炎支原體是最重要的下呼吸道病原體,非典型呼吸道病原體,是指除肺炎鏈球菌以外的病原體，包括嗜肺軍團(tuán)菌(LP)、肺炎支原體(MP) 、肺炎衣原體(CP

4、) 、Q熱立克次體(貝納柯克斯體) 、腺病毒(ADV) 、呼吸道合胞病毒(RSV) 、流感病毒(IFV)和副流感病毒(PIV)等,非典型呼吸道病原體,這些病原體變異快，傳播廣，由于不易形成長(zhǎng)期免疫力而難以預(yù)防和控制,流感病毒 副流感病毒病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒,呼吸道病原體檢測(cè),現(xiàn)有的主要方法：病毒分離培養(yǎng)抗原檢測(cè)抗體檢測(cè)分子生物學(xué)方法等,檢測(cè)方法的比較,抗體、抗原檢測(cè)的比較,IgMIgG,機(jī)體產(chǎn)生

5、IgM一般需要一周左右的時(shí)間，而有免疫缺陷或免疫系統(tǒng)不健全的個(gè)體如兒童，特別是3歲以下的小孩，其產(chǎn)生抗體往往需要更久，且抗體產(chǎn)生的水平也較低若檢測(cè)的是IgG，則不能很好地區(qū)分既往感染和急性感染,因此，抗原檢測(cè)的方法對(duì)嬰幼兒和兒童的呼吸道感染的病因診斷、鑒別診斷和臨床用藥指導(dǎo)比抗體法更有優(yōu)勢(shì)檢測(cè)抗體IgM比IgG更有臨床意義,采樣,抗原檢測(cè)拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。 伸入距離為從耳垂部到鼻尖長(zhǎng)度的一半

6、，一般針對(duì)兩周歲以下兒童，伸入距離約為拭子絨毛頭的長(zhǎng)度兩倍拭子伸入后要輕輕捻動(dòng)拭子轉(zhuǎn)3圈。 取樣后在一小時(shí)之內(nèi)洗脫到生理鹽水中，12小時(shí)內(nèi)送檢,抗原檢測(cè)采樣,采樣,抗體檢測(cè),采樣對(duì)結(jié)果影響較大非典型感染多為干咳，無(wú)痰/少痰陽(yáng)性率低（標(biāo)本問(wèn)題，病毒顆粒?。┛乖隗w內(nèi)存在時(shí)間短,抗原檢測(cè)的劣勢(shì),九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè),檢測(cè)原理,間接免疫熒光法（IFA）是基于待測(cè)樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。樣本

7、中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，用免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果,試劑盒組成,實(shí)驗(yàn)步驟1,樣本的稀釋：血清標(biāo)本與PBS按1:1比例稀釋稀釋后的血清加入吸附劑中，徹底混勻。處理后的血清要離心10-15分鐘除去沉淀，以防干擾檢測(cè),實(shí)驗(yàn)步驟2,結(jié)果判斷,陰性結(jié)果熒光圖譜,軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無(wú)熒光；支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合

8、胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色,陽(yáng)性結(jié)果熒光圖譜,腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對(duì)陽(yáng)性血清的1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光；支原體對(duì)陽(yáng)性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光,嗜肺軍團(tuán)菌,陰性：熒光弱、少、不規(guī)則,嗜肺軍團(tuán)菌,陽(yáng)性：熒光密集，且亮度較好，桿狀形態(tài),肺炎支原體,陰性：紅色細(xì)胞周圍無(wú)或少量熒光，亮度弱,肺炎支原體,陽(yáng)性：熒光占視野50%以上，

9、亮度好，形態(tài)為明顯的細(xì)胞膜或胞漿,Q熱立克次體,陰性：熒光弱、少、不規(guī)則,Q熱立克次體,陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，形態(tài)典型,肺炎衣原體,陰性：熒光弱、少,肺炎衣原體,陽(yáng)性：熒光密集，且亮度較好,腺病毒,陰性：熒光弱、少,腺病毒,陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞>3-5個(gè),呼吸道合胞病毒,陰性：熒光弱、少,呼吸道合胞病毒,陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞>3-5個(gè),甲型流感病毒,陰性：熒光弱、少

10、,甲型流感病毒,陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞>3-5個(gè),乙型流感病毒,陰性：熒光弱、少,乙型流感病毒,陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞>3-5個(gè),副流感病毒,陰性：熒光弱、少,副流感病毒,陽(yáng)性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞>3-5個(gè),方法的局限性,抗體水平無(wú)顯著上升時(shí)不能排除感染的可能性單一樣本抗體檢測(cè)結(jié)果不能幫助作出近期感染的診斷。應(yīng)采集雙份樣本（急性期和康復(fù)期）同

11、時(shí)檢測(cè)來(lái)觀察血清轉(zhuǎn)化或抗體水平的明顯升高,方法的局限性,對(duì)患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA檢測(cè)時(shí)，支原體、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，會(huì)在細(xì)胞上發(fā)生非特異性反應(yīng)，這些血清不能用此方法評(píng)價(jià)質(zhì)控孔用于檢測(cè)這種現(xiàn)象,方法的局限性,在嗜肺軍團(tuán)菌和Q熱立克次體中，有時(shí)血清會(huì)含有與卵抗原反應(yīng)的抗體，所以使用卵黃囊固定抗原會(huì)出現(xiàn)非特異性熒光。當(dāng)出現(xiàn)這種情況時(shí)，該血清就不能用IFA進(jìn)行分析了,臨床實(shí)際效果圖,,,九聯(lián)檢,,,,