血清膽紅素資料

1、,血清膽紅素,5.膽紅素的檢測(cè),內(nèi) 容,黃疸的定義,血清膽紅素升高致使皮膚、粘膜和鞏膜發(fā)黃以及其他組織體液發(fā)生黃染的現(xiàn)象。 正常血清膽紅素濃度：20倍,,幾個(gè)名詞1.游離膽紅素(非結(jié)合膽紅素:UCB) 特性: ◆不溶于水 ◆尿中查不出 2.結(jié)合膽紅素(CB): 特性: ◆水溶性,從尿中排出.,,3.尿膽原 結(jié)合膽紅素從肝細(xì)胞經(jīng)膽管排入腸道后,在回腸末端及結(jié)腸經(jīng)細(xì)菌酶的分解與還原作用,形成

2、尿膽原。4.糞膽原: 尿膽原大部分從糞便排出,稱為糞膽原。,,5.膽紅素腸肝循環(huán) 小部分膽紅素經(jīng)腸道吸收,通過門靜脈回到肝內(nèi),其中大部分再轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合膽紅素,又隨膽汁排入腸內(nèi),形成膽紅素腸肝循環(huán)。,80％-85%來自衰老紅細(xì)胞中血紅蛋白的分解。其他物質(zhì)（旁路性膽紅素）,膽紅素的來源,二、膽紅素正常代謝,1.　膽紅素形成,（1）衰老RBC破壞 ：主要來源（80%～ 85%）,（2）旁路膽紅素：次要來源（15%～ 20

3、%）,A.　RBC在骨髓形成時(shí)即被破壞；,B.　RBC剛進(jìn)入血液循環(huán)即被破壞；,C.　肌紅蛋白、過氧化氫酶及細(xì)胞色素；,D.　未用于血紅蛋白的血紅素或卟啉。,,非結(jié)合膽紅素,2.　膽紅素在血液中的運(yùn)輸,UCB + 觸珠蛋白,3.　膽紅素在肝臟代謝,膽紅素在肝臟代謝分三步,攝取,與葡萄糖醛酸結(jié)合,排泄,,,,,（血液運(yùn)輸）,肝,血清膽紅素,正常血清膽紅素4/5為游離膽紅素，其余為結(jié)合膽紅素兩種膽紅素結(jié)合膽紅素：與葡萄糖醛酸結(jié)合，又

4、稱直接膽紅素。游離膽紅素：未與葡萄糖醛酸結(jié)合，又稱間接膽紅素。游離膽紅素（UCB）是油性的，不溶于水，不通過尿排出；結(jié)合膽紅素（CB）溶于水，可經(jīng)尿排出。TB = UCB + CB,正常膽紅素代謝,肝臟對(duì)非結(jié)合性膽紅素的攝取、結(jié)合與排泄功能：非結(jié)合膽紅素與葡萄糖醛酸結(jié)合形成結(jié)合膽紅素。結(jié)合膽紅素呈水溶性，可經(jīng)腎小球?yàn)V過而從尿中排出，故尿中膽紅素定性試驗(yàn)可呈陽性。 結(jié)合膽紅素經(jīng)毛細(xì)膽管微突、微膽管、細(xì)膽管、小膽管、肝總管

5、、膽總管，經(jīng)十二指腸乳頭排入十二指腸。,80%～85%的膽紅素來源于成熟紅細(xì)胞的血紅蛋白。從血紅蛋白分解來的膽紅素稱之為非結(jié)合膽紅素;非結(jié)合膽紅素迅速與血清白蛋白結(jié)合，形成非結(jié)合膽紅素白蛋白復(fù)合物，再經(jīng)血循環(huán)運(yùn)輸至肝臟。非結(jié)合膽紅素不溶于水，不能從腎小球?yàn)V出，故尿液中不含有非結(jié)合膽紅素,肝腸循環(huán),結(jié)合膽紅素經(jīng)膽道排入腸道后并不能被腸黏膜所吸收，而在回腸末端及結(jié)腸經(jīng)厭氧菌還原酶作用后還原為尿膽原，尿膽原的大部分氧化為尿膽素從糞便中

6、排出體外，也稱糞膽素；小部分尿膽原被回腸和結(jié)腸黏膜吸收，經(jīng)門靜脈血流回到肝內(nèi)，在回到肝內(nèi)的尿膽原中，有大部分再經(jīng)肝細(xì)胞作用后又轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合膽紅素，又隨膽汁排入腸道內(nèi)，這一過程稱為“膽紅素的腸肝循環(huán)”。有小部分未能轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合膽紅素，而是經(jīng)體循環(huán)由腎臟排出體外，正常人每天由尿液排出的尿膽原一般不超過6.8μmol。尿內(nèi)尿膽原定性試驗(yàn)為弱陽性或陽性(正常膽紅素代謝)。,,膽紅素代謝過程,正常膽紅素代謝圖解,Text in here,J.W.Mc

7、Nee于1923年提出：,H.Ducci于1947年提出：,溶血性黃疸肝細(xì)胞性黃疸阻塞性黃疸,肝前性黃疸肝性黃疸肝后性黃疸,分類,黃疸分類,,,,,,,此外，還有肝細(xì)胞有某些先天性缺陷，不能完成膽紅素的正常代謝而發(fā)生的先天性非溶血性黃疸。,肝前性黃疸/溶血性黃疸：,肝源性黃疸,肝后性黃疸,由于紅細(xì)胞破壞增加，膽紅素生成過多而引起的溶血性黃疸。,肝細(xì)胞病變以致膽紅素代謝失常而引起的肝細(xì)胞性黃疸。,肝內(nèi)或肝外膽管系統(tǒng)發(fā)生機(jī)械性梗阻

8、，影響膽紅素的排泄，導(dǎo)致梗阻性（阻塞性）黃疸。,,,,常見疾病,,,,,,先天性溶血性貧血：如地中海貧血(血紅蛋白病)、遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥。,后天性獲得性溶血性貧血：如自身免疫性溶血性貧血、遺傳性葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏(蠶豆病)、異型輸血后溶血、新生兒溶血、惡性瘧疾、伯氨奎林等藥物、蛇毒、毒蕈中毒、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿等。,.肝細(xì)胞性黃疸 各種肝臟疾病，如病毒性肝炎、中毒性肝炎、藥物性肝病、各型肝硬化、原發(fā)與繼發(fā)性肝癌、敗血癥

9、及鉤端螺旋體病等，都可因肝細(xì)胞發(fā)生彌漫損害而引起黃疸。,阻塞性黃疸根據(jù)阻塞的部位可分為肝外膽管及肝內(nèi)膽阻塞兩類。,,,,黃疸的臨床分類,先天性溶血性黃疸、獲得性溶血性黃疸、由無效造血引起的旁路性高膽紅素血癥等。,高膽紅素血癥、Gilbert綜合癥、某些藥物及檢查用試劑(如膽囊造影劑)引起的黃疸等。,Gilbert綜合癥、Crigler-Najjar綜合征(1型與Ⅱ型)、新生兒生理性黃疸等。,,,,膽紅素生成過多,膽紅素?cái)z取障礙,膽紅素結(jié)

10、合障礙,非結(jié)合膽紅素增高為主,,,,黃疸的臨床分類,膽結(jié)石、胰頭癌、膽管或膽總管癌、壺腹癌、膽管閉鎖,肝內(nèi)膽管結(jié)石、華支睪吸蟲病,肝炎、藥物性肝病、妊娠期復(fù)發(fā)性黃疸,,,,肝外膽管阻塞,肝內(nèi)膽管阻塞,肝內(nèi)膽汁淤積,結(jié)合膽紅素增高為主,小兒黃疸,生理性黃疸由于新生兒的膽紅素代謝特點(diǎn)，即出生后膽紅素的生成過多而代謝和排泄能力低下，致使血液中的膽紅素水平升高，約50%～60%的足月兒和80%的早產(chǎn)兒出現(xiàn)暫時(shí)性的、輕度的黃疸過程，稱為生理性黃

11、疸。其特點(diǎn)為：足月兒生理性黃疸多于生后2～3天出現(xiàn)，4～5天達(dá)高峰，黃疸程度輕重不一，輕者僅限于面頸部，重者可延及軀干、四肢，糞便色黃，尿色不黃，一般無不適癥狀，也可有輕度嗜睡或納差，黃疸持續(xù)7～10天消退；早產(chǎn)兒多于生后3～5天出現(xiàn)黃疸，5～7天達(dá)高峰。早產(chǎn)兒由于血漿白蛋白偏低，肝臟代謝功能更不成熟，黃疸程度較重，消退也較慢，可延長(zhǎng)到2～4周。,小兒黃疸,病理性黃疸新生兒黃疸出現(xiàn)下列情況之一時(shí)需考慮為病理性黃疸：①黃疸出現(xiàn)早：生后2

12、4小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)；②程度重：足月兒血清膽紅素濃度>220.6µmol/L（12.9mg/dl），早產(chǎn)兒>256.5μmol/L（15mg/dl）；③血清結(jié)合膽紅素增高>26µmol/L（1.5mg/dl）；④進(jìn)展快：血清膽紅素每天上升>85µmol/L（5mg/dl）；⑤黃疸持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，超過2~4周，或進(jìn)行性加重或退而復(fù)現(xiàn)。,孕婦黃疸,,,列舉幾種常見的妊

13、娠期黃疸性疾病：一、先兆子癇毒血癥：發(fā)生在孕婦妊娠20周以后，先兆子癇只是在疾病進(jìn)展時(shí)才累及肝臟。先兆子癇可有ALT升高，除非合并DIC，黃疽少見。肝組織正常，或有出血性壞死，但無炎癥。二、妊娠期肝內(nèi)淤膽癥：以全身上下瘙癢、淤膽的生化改變?yōu)樘卣?。發(fā)生于妊娠中、末期，先有皮膚瘙癢，繼而出現(xiàn)黃疸，直接膽紅素為主。血清膽固醇、膽酸、ALP和γGT升高，而ALT正?；蜉p度升高。瘙癢和黃疸常在分娩后2周內(nèi)消失，再次妊娠再次發(fā)作。三、妊娠急性

14、脂肪肝：罕見的致死性疾病，常發(fā)生在妊娠后期，好轉(zhuǎn)的病例可完全恢復(fù)，再次妊娠時(shí)罕見再發(fā)。起病急劇，常有上腹部劇痛、淀粉酶增高、類似急性胰腺炎。常有重度黃疸，血清膽紅素增高，而尿膽紅素陰性。20%～40%的病例伴有先兆子癰。重癥病人實(shí)驗(yàn)室檢查可有肝衰竭、急性腎功衰竭或彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)的表現(xiàn)。肝臟B型超聲檢查呈脂肪肝波形。如果攜帶乙肝病毒的孕婦發(fā)生這種情況，因HBsAg(+)易被誤診為暴發(fā)性乙型肝炎。,溶血性黃疸,機(jī)制：1、紅細(xì)胞在

15、單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)破壞過多，超過肝細(xì)胞的攝取轉(zhuǎn)化和排泄能力，2、溶血造成貧血、缺氧和紅細(xì)胞破壞產(chǎn)物的毒性作用，使肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的代謝功能降低，造成血清游離膽紅素濃度過高所致。,尿膽原 ?尿膽紅素 ?,UCB ? ?CB 正常CB/TB ?20%,溶血性黃疸發(fā)生機(jī)制示意圖,溶血性黃疸,機(jī)制：1、是由于紅細(xì)胞在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)破壞過多，超過肝細(xì)胞的攝取轉(zhuǎn)化和排泄能力，2、由于溶血造成貧血、缺氧和紅細(xì)

16、胞破壞產(chǎn)物的毒性作用，使肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的代謝功能降低，造成血清游離膽紅素濃度過高所致。特點(diǎn)：血清TB增加，UCB為主，CB基本正常，可代償性增加，從膽道排出腸道也增加，尿膽原增加，重吸收回肝的增加，由于缺氧和毒素，肝處理能力變?nèi)?，通過腎臟排出的尿膽素增多，無膽紅素。通過糞便排出的糞膽素增多，糞便顏色加深。,發(fā)病機(jī)制,溶血,UCB↑,貧血,缺血,破壞產(chǎn)物毒性↑,肝臟加工膽紅素能力↓,,,,,,,,血UCB↑,黃疸,,,（加重肝負(fù)擔(dān)）,腸

17、道尿膽原↑,腸肝循環(huán)尿膽原↑,經(jīng)腎排泄尿膽原↑,,,,溶血性黃疸發(fā)生機(jī)理示意圖,非結(jié)合,結(jié)合,單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng),,3.實(shí)驗(yàn)室檢查 (1)血清總膽紅素(TB)增高 (2)非結(jié)合膽紅素（UCB）增高 (3)結(jié)合膽紅素（CB）基本正常 (4)尿膽原增加 (5)糞膽原增加:糞便顏色加深 (6)尿隱血試驗(yàn)陽性,溶血性黃疸病因,肝細(xì)胞性黃疸,機(jī)制：1、肝細(xì)胞受損致對(duì)膽紅素的攝取、結(jié)合及排泄功能降低，UBC增高。而未受損的肝細(xì)胞，仍能將U

18、CB轉(zhuǎn)換成CB,CB一部分仍能經(jīng)毛細(xì)膽管從膽道排泄，一部分經(jīng)已損害或壞死的肝細(xì)胞反流入血中；2、因肝細(xì)胞腫脹、匯管區(qū)滲出性病變與水腫，使膽汁排泄受阻而反流進(jìn)入血液循環(huán)中。,肝細(xì)胞性黃疸發(fā)生機(jī)制示意圖,尿膽原 輕度? 尿膽紅素 +,UCB ? CB ?CB/TB 20~60 %,肝細(xì)胞性黃疸,機(jī)制;由于肝細(xì)胞受損致肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的攝取、結(jié)合及排泄功能降低，因而ucb增高。而未受損的肝細(xì)胞，任能將

19、UCB轉(zhuǎn)換成CB,CB一部分仍能經(jīng)毛細(xì)膽管從膽道排泄，一部分經(jīng)已損害或壞死的肝細(xì)胞反流入血中；亦可因肝細(xì)胞腫脹、匯管區(qū)滲出性病變與水腫，使膽汁排泄受阻而反流進(jìn)入血液循環(huán)中。特點(diǎn)：血中CB和UCB都增加，CB增加多大于UCB，尿中CB陽性，尿膽原因肝功能障礙增加。,,發(fā)病機(jī)制 肝細(xì)胞損傷 膽紅素的攝取和結(jié)合功能下降 血中UCB增加

20、 膽汁排泄受阻:腫脹、炎癥、膽栓的阻塞 血中CB增加,,,,,實(shí)驗(yàn)室檢查◆CB ◆UCB ◆尿膽原 ◆肝功能異常: ◇ ALT ◇ TB（TBIL） ◇ CB UCB ◇ A G ◇ A / G,,,,,,,,,,,病因,膽汁瘀積,肝內(nèi)性,肝外性,肝內(nèi)阻塞性,肝內(nèi)膽汁瘀積,肝內(nèi)泥沙結(jié)石；癌栓；,急性膽囊炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化藥物性膽汁性瘀積；,膽

21、總管結(jié)石；膽總管狹窄；膽總管水腫；腫瘤、蛔蟲；,,,,,,,,發(fā)病機(jī)制,膽道阻塞,膽道壓力↑,小膽道、毛細(xì)膽管破裂,膽汁中膽紅素返流入血（CB）,藥物致膽汁瘀積,膽汁分泌功能障礙,毛細(xì)膽管通透性增加,膽汁濃縮,膽鹽沉淀、膽栓形成,,,,,,,,黃疸,,,13,,5.實(shí)驗(yàn)室檢查◆血清CB ◆尿膽紅素陽性 ◆尿膽原陰性 ◆血清堿性磷酸酶 ◆總膽固醇,,,,先天性非溶血性黃疸,肝細(xì)胞有某些先天性缺陷，不能完成膽紅素的正常代謝，稱為先

22、天性非溶血性黃疸。臨床癥狀和體征輕或無，較難確診，預(yù)后多良好，臨床常無需治療。,,(四)先天性非溶血性黃疸 機(jī)理: 肝細(xì)胞對(duì)膽紅素的攝取、結(jié)合和排泄有缺陷導(dǎo)致黃疸。1.Gilbert綜合征（吉伯特綜合征） 非結(jié)合膽紅素增高癥(Gilbert syndrome,GS)患者中以年齡18～30 歲者較多見 男女之比為10∶1,,機(jī)理:肝細(xì)胞攝取UCB功能障礙和微粒體內(nèi)葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶不足,導(dǎo)致血中UCB增高。表現(xiàn): ◆

23、長(zhǎng)期間歇性輕度黃疸，多無明顯癥狀 ◆黃疸加重有乏力、消化不良、肝區(qū)不適 ◆為常染色體顯性遺傳性疾病,,2.Dubin-Johnson綜合征（慢性特發(fā)性黃疸） （杜賓-約翰遜）機(jī)理: ◆肝細(xì)胞對(duì)CB及某些陰性離子(X線造影劑)向毛細(xì)膽管排泄發(fā)生障礙,致血清CB增加而出現(xiàn)黃疸。臨床表現(xiàn)特點(diǎn)： ◆為長(zhǎng)期性或間歇性黃疸。,,3.Crigter-Najjar綜合征（CNS） （克里格勒—納亞 綜合征） 又稱先天性葡萄糖醛酸

24、轉(zhuǎn)移酶缺乏癥 機(jī)理： ◆肝細(xì)胞缺乏葡萄糖酸轉(zhuǎn)移酶，致UCB不能形成CB，導(dǎo)致血中UCB增高。 ◆臨床表現(xiàn)： ◇嚴(yán)重黃疸 ◇可出現(xiàn)：核黃疸，見于新生兒,,核黃疸： 膽紅素進(jìn)入腦組織去將中樞神經(jīng)細(xì)胞核染成黃色，所以叫做“核黃疸”。 表現(xiàn)：癥狀多以神經(jīng)系統(tǒng)的損害為主。 早期出現(xiàn)： ◇精神不振、嗜睡 ◇吮奶無力，隨之不食奶（拒奶） ◇出現(xiàn)呻吟、尖叫樣哭聲 ◇眼睛不活動(dòng)（凝視）,,4.Rotor綜合征

25、（羅特綜合征）機(jī)理： ◇ 肝細(xì)胞對(duì)攝取UCB和排泄CB存在先天性缺陷致血中膽紅素增高。表現(xiàn)： ◇黃疸，一般沒有其他癥狀， ◇有時(shí)易疲勞、食欲不振，腹痛。 ◇肝臟大小正?；蜉p度增大。,,三種黃疸實(shí)驗(yàn)室檢查鑒別要點(diǎn)項(xiàng)目 溶血性 肝細(xì)胞性 膽汁積性TB 增加 增加 增加CB 正常 增加 明顯增加CB/TB ＜15-20% ＞

26、30-40% ＞60% 尿膽紅素 - + ++尿膽原 增加 輕度增加 減少或消失ALT、AST 正常 明顯增加 可增高ALP 正常 增高 明顯增高GGT 正常 增高 明顯增高,,,,,尿液檢查 主要是檢測(cè)尿中尿膽原與膽紅素 1.溶血性黃疸時(shí): 尿膽原顯著增加,尿膽紅

27、素陰性; 解釋:溶血性黃疸時(shí),當(dāng)體內(nèi)有大量紅細(xì)胞破壞時(shí)未結(jié)合膽紅素增加，使血中未結(jié)合膽紅素含量增高，由于未結(jié)合膽紅素不能通過腎，故尿膽紅素試驗(yàn)陰性。,,2.肝細(xì)胞性黃疸時(shí): 尿膽原增加、正常或減少(視有無肝內(nèi)膽汁郁積而定)，尿膽紅素陽性;3.阻塞性黃疸時(shí): 尿膽原一般減少甚至缺乏(視梗阻程度而定)，尿膽紅素則顯著增加。,各具特色,相關(guān)檢查：溶血性黃疸：血液檢查可見貧血，Rct增加，骨髓紅細(xì)胞增生旺盛肝

28、細(xì)胞性黃疸：肝功能損害，白蛋白，凝血功能，AST/ALT，ADA梗阻性黃疸：膽管梗阻相關(guān)的酶（ALP,5‘-NT, γ GT）升高明顯,,堿性磷酸酶，5‘-核苷酸酶，谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶ALP肝中和骨中各占一半，與肝細(xì)胞膜緊密結(jié)合而不易釋放，肝病時(shí)通常ALP升高不明顯；1、因?yàn)槟懼鲃?dòng)不暢，發(fā)生膽汁淤積，ALP逆流入血增多使血ALP升高明顯2、膽汁排泄不暢毛細(xì)膽管內(nèi)壓升高，可誘發(fā)ALP產(chǎn)生增多。ADA是嘌呤核苷酸代謝的關(guān)鍵酶，細(xì)胞內(nèi)

29、ADA釋放入血引起血清ADA升高，因此檢測(cè)血清ADA可反映肝細(xì)胞的實(shí)質(zhì)性損害，許多國(guó)內(nèi)外研究指出，ADA是當(dāng)肝細(xì)胞受到損害壞死或膜通透性增高時(shí)．肝肝損傷的敏感指標(biāo)。,血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素測(cè)定,血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素測(cè)定,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素 膽紅素氧化酶法測(cè)定總膽紅素和結(jié)合膽紅素,Biobase,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素,【原理】 血清中結(jié)合膽紅素可直接與重氮試劑反應(yīng)

30、，產(chǎn)生偶氮膽紅素；非結(jié)合膽紅素須有加速劑咖啡因-苯甲酸鈉-醋酸鈉作用，其分子內(nèi)氫鍵破壞后才能與重氮試劑反應(yīng)，也產(chǎn)生偶氮膽紅素。本法重氮反應(yīng)pH6.5，最后加入堿性酒石酸鈉使紫色偶氮膽紅素(吸收峰530nm)轉(zhuǎn)變成藍(lán)色偶氮膽紅素，在600nm波長(zhǎng)比色，使檢測(cè)靈敏度提高。,Biobase,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素,【參考范圍】 血清總膽紅素：5.1～19μmol/L(0.3～1.1mg/dl)； 血清

31、結(jié)合膽紅素：1.7～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dl)?！九R床意義】 1．血清總膽紅素測(cè)定的意義(1) 有無黃疸及黃疸程度的鑒別。(2) 肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后的判斷 膽紅素濃度明顯升高反映有嚴(yán)重的肝細(xì)胞損害。但某些疾病如膽汁淤積型肝炎時(shí)，盡管肝細(xì)胞受累較輕，血清膽紅素卻可升高。(3) 新生兒溶血癥 血清膽紅素有助于了解疾病嚴(yán)重程度。(4) 再生障礙性貧血及數(shù)種繼發(fā)性貧血(主要見于癌或慢性腎炎引起)，血清總膽

32、紅素減少。,Biobase,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素,【臨床意義】 2．血清結(jié)合膽紅素測(cè)定的意義 結(jié)合膽紅素與總膽紅素的比值可用于鑒別黃疸類型。(1) 比值＜20% 溶血性黃疸，陣發(fā)性血紅蛋白尿，惡性貧血，紅細(xì)胞增多癥等。(2) 比值40%～60% 肝細(xì)胞性黃疸。(3) 比值＞60% 阻塞性黃疸。但以上幾類黃疸，尤其是(2)、(3)類之間有重疊。,Biobase,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅

33、素,【注意事項(xiàng)】1．膽紅素對(duì)光敏感，標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)本均應(yīng)盡量避光保存。2．輕度溶血對(duì)本法無影響，但嚴(yán)重溶血時(shí)可使測(cè)定結(jié)果偏低。其原因是血紅蛋白與重氮試劑反應(yīng)形成的產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，還可被亞硝酸氧化為高鐵血紅蛋白而干擾吸光度測(cè)定。血脂及脂溶色素對(duì)測(cè)定有干擾，應(yīng)盡量取空腹血。3．疊氮鈉能破壞重氮試劑，終止偶氮反應(yīng)。凡用疊氮鈉作防腐劑的質(zhì)控血清，可引起偶氮反應(yīng)不完全，甚至不呈色。4．本法測(cè)定血清總膽紅素，在10～37℃條件下不受溫度變

34、化的影響。呈色在2h內(nèi)非常穩(wěn)定。,Biobase,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素,【注意事項(xiàng)】5．標(biāo)本對(duì)照管的吸光度一般很接近，若遇標(biāo)本量很少時(shí)可不作標(biāo)本對(duì)照管，參照其他標(biāo)本對(duì)照管的吸光度。6．膽紅素大于342μmol/L的標(biāo)本可減少標(biāo)本用量，或用0.154mmol/L NaCl溶液稀釋血清后重測(cè)。7．結(jié)合膽紅素測(cè)定在臨床上應(yīng)用很廣，但至今無候選參考方法，國(guó)內(nèi)也無推薦方法。方法不同，反應(yīng)時(shí)間不同，結(jié)果相差很大。時(shí)間短、非

35、結(jié)合膽紅素參與反應(yīng)少，結(jié)合膽紅素反應(yīng)也不完全；時(shí)間長(zhǎng)，結(jié)合膽紅素反應(yīng)較完全，但一部分非結(jié)合膽紅素也參與反應(yīng)。這是一個(gè)很難權(quán)衡的問題。在沒有結(jié)合膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液的情況下，問題更復(fù)雜。,Biobase,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素H,【評(píng)價(jià)】1．靈敏度和線性范圍 本法摩爾吸光系數(shù)為74 380，標(biāo)本中膽紅素17.1mol/L時(shí)吸光度約0.08(血清用量已達(dá)0.2m1)，正常血清總膽紅素多數(shù)小于17.1mol/L，手工法測(cè)定顯得靈

36、敏度很不夠。在病理血清結(jié)合膽紅素增高在17.1μmol/L以下時(shí)，靈敏度同樣不夠。線性上限雖可做到1.7吸光度，但手工法在膽紅素超過171μmol/L時(shí)，吸光度已達(dá)0.8，應(yīng)減量操作。分析儀檢測(cè)靈敏度高得多，最低吸光度可測(cè)至0.02，線性上限可達(dá)342μmol/L；但本法需3次加試劑，一般無法在全自動(dòng)生化分析儀中使用。2．精密度 正常濃度時(shí)精密度較差，特別是批間CV，據(jù)報(bào)道為14%～20%；而膽紅素342μmol/L時(shí)，精密度佳，批

37、內(nèi)CV為0.95%，批間CV5%～10%。,Biobase,改良J-G法測(cè)定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素H,【評(píng)價(jià)】3．重氮反應(yīng)法測(cè)定膽紅素，也可用甲醇(M-E法)或二甲亞砜等作加速劑，可做成單一試劑，反應(yīng)pH和顯色pH都在酸性，560nm波長(zhǎng)比色，易于自動(dòng)化。但靈敏度比改良J-G法略低，M-E法摩爾吸光系數(shù)為60 500，Hb干擾較明顯，Hb＞1g/L時(shí)，需用樣品空白校正。4．本法靈敏度高，且可避免其它有色物質(zhì)的干擾，是測(cè)定血清總膽紅

38、素的參考方法，但不能自動(dòng)化分析是其缺點(diǎn)?，F(xiàn)有些商品試劑盒稱咖啡因法或J-G法，但不加堿性酒石酸，即不在堿性條件下顯色，其靈敏度和特異性不如上述方法。,Biobase,膽紅素氧化酶法測(cè)定總膽紅素和結(jié)合膽紅素,【原理】 膽紅素呈黃色，在450nm附近有最大吸收峰。膽紅素氧化酶(BOD)催化膽紅素氧化，隨著膽紅素被氧化，A450nm下降，下降程度與膽紅素被氧化的量相關(guān)。在pH8.0條件下，未結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，因而檢測(cè)450n

39、m吸光度的下降值可反映總膽紅素含量；加入SDS及膽酸鈉等陰離子表面活性劑可促進(jìn)其氧化。在pH3.7～4.5緩沖液中，BOD催化單葡萄糖醛酸膽紅素(mBc)、雙葡萄糖醛酸膽紅素(dBc)及大部分δ膽紅素氧化，非結(jié)合膽紅素(Bu)在此pH條件下不被氧化。用配制于人血清中的二?；撬崮懠t素(ditaurobilirubin，DTB)作標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)此條件下450nm吸光度的下降值可反映結(jié)合膽紅素的含量。,Biobase,膽紅素氧化酶法測(cè)定總膽紅

40、素和結(jié)合膽紅素,【注意事項(xiàng)】 1．BOD濃度的選擇 文獻(xiàn)報(bào)道BOD在反應(yīng)液中終濃度為0.18～1.14U/ml。國(guó)內(nèi)有些廠家的試劑盒，BOD在反應(yīng)液中終濃度按標(biāo)示值計(jì)算很高，但反應(yīng)速度很慢。2.選擇BOD濃度時(shí)，可根據(jù)所用制品在測(cè)定高膽紅素血清標(biāo)本或342μmol/L標(biāo)準(zhǔn)液的反應(yīng)速度，即能否在5min反應(yīng)完全而確定。由于測(cè)定結(jié)合膽紅素時(shí)反應(yīng)液pH偏離BOD的最適范圍，因此要求BOD有較高的濃度，一般使反應(yīng)液中終濃度不低于0.5U/

41、ml。,Biobase,膽紅素氧化酶法測(cè)定總膽紅素和結(jié)合膽紅素,【注意事項(xiàng)】 3．Hb在1.0g/L以下時(shí)，對(duì)結(jié)果影響不大。每升血清中分別加入維生素C 0.1g、半胱氨酸0.5g、谷胱苷肽0.5g、尿素0.5g、尿酸0.5g、葡萄糖10g、乙碘醋酸1g、白蛋白40g對(duì)總膽紅素及結(jié)合膽紅素測(cè)定幾乎無干擾。每升血清中加L-多巴0.15g、α-甲基多巴0.15g使結(jié)果偏低約10%。4．BOD的最適pH 在pH7.3～9.0之間酶活性的p

42、H曲線變化幅度不大，但最適pH為8.0～8.2。但在測(cè)定結(jié)合膽紅素時(shí)，為防止Bu反應(yīng)，選擇pH為4.5，這時(shí)樣本中mBc、dBc及大部分δ膽紅素被氧化；pH低于4.0時(shí)，血清樣本易發(fā)生混濁，嚴(yán)重干擾測(cè)定結(jié)果；郭健等報(bào)道，用枸櫞酸鹽、磷酸鹽、硼酸鹽和碳酸鹽緩沖液比較時(shí)，枸櫞酸鹽緩沖液 (0.1mol/L，pH5.0)效果最好。,Biobase,膽紅素氧化酶法測(cè)定總膽紅素和結(jié)合膽紅素,5．結(jié)合膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品 合成的二牛磺酸膽紅素(DTB)為

43、水溶性化合物，可與重氮化氨基苯磺酸直接反應(yīng)，產(chǎn)生吸收光譜與偶氮膽紅素相似的偶氮色素。用J-G法測(cè)得的摩爾吸光系數(shù)與Bu相同。20世紀(jì)80年代后期以來，國(guó)外結(jié)合膽紅素測(cè)定大多用DTB作標(biāo)準(zhǔn)品。DTB反應(yīng)前后的吸收光譜與Bu相似，最大吸收峰也在450～460nm之間。6．混濁問題Doumas報(bào)道，成人黃疸血清或肝素抗凝血漿，反應(yīng)15min幾乎均產(chǎn)生混濁而影響結(jié)果。在磷酸鹽緩沖液中加入尿素可防止混濁。經(jīng)電泳證明混濁是因球蛋白及纖維蛋白原沉淀

44、引起。應(yīng)避免使用肝素抗凝。7．光對(duì)BOD法測(cè)定結(jié)合膽紅素有較大影響。經(jīng)過藍(lán)光治療的新生兒黃疽血清，用BOD法測(cè)定結(jié)合膽紅素結(jié)果遠(yuǎn)比J-G法高，屬假性增高。新生兒血清在體外經(jīng)藍(lán)光照射后，用高效液相色譜法(HPLC)未檢出結(jié)合膽紅素，重氮法結(jié)果通常保持不變，但BOD法結(jié)果顯著增高。藍(lán)光照射能產(chǎn)生光膽紅素，其在 pH3.7易被BOD氧化。此種假性增高對(duì)臨床監(jiān)控新生兒黃疽及鑒別生理性黃疽與初期的病理性黃疽有影響。,Biobase,膽紅素氧化酶