血液常用檢查一

1、血液常用檢查,一、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)二、血紅蛋白測(cè)定三、紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查四、白細(xì)胞計(jì)數(shù)五、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)六、白細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查七、血小板計(jì)數(shù)八、血小板形態(tài)學(xué)檢查,紅細(xì)胞計(jì)數(shù),一,血紅蛋白測(cè)定,二,紅細(xì)胞形態(tài)檢查,三,第二節(jié)血液常用檢查（一）,教學(xué)目標(biāo),掌握紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白方法熟悉紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)了解紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定臨床意義,紅細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程,造血干細(xì)胞 →早幼紅細(xì)胞→中幼紅細(xì)胞→晚幼紅細(xì)胞脫核→網(wǎng)織紅

2、細(xì)胞→成熟紅細(xì)胞,紅系祖細(xì)胞→原始紅細(xì)胞,,（有絲分裂）,48h,成熟紅細(xì)胞,,鐵 →鐵代謝原卟啉 →膽色素代謝珠蛋白 →蛋白質(zhì)代謝,衰老紅細(xì)胞,,紅細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程,120天,6,,檢測(cè)方法1.手工顯微鏡法2.血液分析儀法,一、 紅細(xì)胞計(jì)數(shù),7,1.手工顯微鏡法（1）血液分析儀的校正 （2）適用基層醫(yī)療單位和分散就診患者（3）費(fèi)時(shí)、重復(fù)性差，準(zhǔn)確性取決操作者技術(shù)水平 2．血液分析儀法 操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，適

3、用大批量集中檢測(cè)準(zhǔn)確性取決于儀器性能及工作狀態(tài)，定期校準(zhǔn)、質(zhì)控,方法學(xué)評(píng)價(jià),手工顯微鏡法,8,定義：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)后，滴入改良Neubauer計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定范圍內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算即可求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。,9,改良牛鮑計(jì)數(shù)板,計(jì)數(shù)板,,,,,,,,,,,,,壓線細(xì)胞的計(jì)數(shù)原則：,數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下,,,,,,,,,,,12,血細(xì)胞計(jì)數(shù)室各計(jì)數(shù)區(qū)的計(jì)數(shù)對(duì)象、范圍和單位換算,,,計(jì)數(shù)區(qū)域

4、 計(jì)數(shù)細(xì)胞種類 換算方式（以細(xì)胞個(gè)數(shù)/L計(jì)）,,四角4個(gè)大方格 白細(xì)胞 N/4×10×稀釋倍數(shù)×106四角及中央5個(gè)中方格 紅細(xì)胞、血小板 N×5×10×稀釋倍數(shù)×106兩側(cè)計(jì)數(shù)室四角及中央 嗜酸性粒細(xì)胞、體 N&

5、#215;稀釋倍數(shù)×1065個(gè)大方格共10個(gè)大方格 腔液細(xì)胞、精子,,13,紅細(xì)胞稀釋液組成與作用,,,,稀釋液 組成 作用 備注,Hayem液 NaCl、Na2SO4、HgCl2 調(diào)節(jié)滲透壓、增加紅細(xì)

6、 胞懸浮性和防腐作用,高球蛋白血癥時(shí)，蛋白質(zhì)沉淀致紅細(xì)胞凝集,枸櫞酸鈉稀釋液 NaCl、枸櫞酸鈉、甲醛 NaCl和枸櫞酸鈉調(diào) 節(jié)滲透壓 ，枸櫞酸鈉

7、 具抗凝，甲醛防腐,生理鹽水 生理鹽水 急診時(shí)用1%甲醛生理鹽水 甲醛、生理鹽水 急診時(shí)用,14,1.準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板2.加稀釋液：

8、2ml3.加血：10μl混勻4.充池5.計(jì)數(shù)6.計(jì)算：紅細(xì)胞數(shù)=N/5*25*10*200*106/L結(jié)果報(bào)告方式：X. X×1012/L,紅細(xì)胞計(jì)數(shù)操作,15,成年：男性（4～5.5）×1012/L 女性（3.5～5.0）×1012/L新生兒： （6.0～7.0）×1012/L,參考值,16,1.分析前質(zhì)量控制患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、存儲(chǔ)溫度和時(shí)間2.分析中質(zhì)量

9、控制 計(jì)數(shù)誤差（技術(shù)誤差和固有誤差）、白細(xì)胞影響 3.分析后質(zhì)量控制結(jié)合臨床資料,質(zhì)量控制,血紅蛋白 (血色素， Hb 或 HGB) 組成,二、血紅蛋白測(cè)定,珠蛋白：4條，種屬特異性亞鐵血紅素：4個(gè)，無(wú)種屬特異性,,,亞鐵血紅素結(jié)構(gòu)示意圖,O2,,HbA： α2β2 成人占95%以上,HbA2： α2δ2 成人約占2～3%,HbF(胎兒Hb)：α2γ2 成人1%以下,每個(gè) Hb 分子由 2 條α類肽鏈和 2 條非α

10、類肽鏈組成，每條珠蛋白肽鏈含有 1 個(gè)亞鐵血紅素,,HbO2(氧合血紅蛋白),各種血紅蛋白衍生物(據(jù)鐵原子第六配位鍵的結(jié)合情況),Hbred(還原血紅蛋白),HbCO(碳氧血紅蛋白),Hi (高鐵血紅蛋白),SHb(硫化血紅蛋白),,,主要成分,少量,與氧結(jié)合,未結(jié)合,與CO結(jié)合,Fe2＋→Fe3＋,與S結(jié)合,21,氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測(cè)定法 十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）法疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)法堿羥血紅

11、蛋白法疊氮高鐵血紅蛋白測(cè)定法溴代十六烷基三甲胺血紅蛋白測(cè)定法（CTAB）,檢測(cè)方法,,一. 原理,Hb,＋CN－,,氧化,,HiCN為棕紅色，最大吸收峰540nm。根據(jù)標(biāo)本的吸光度可知Hb濃度。,HiCN,Hi,注：硫化血紅蛋白(SHb)不能被轉(zhuǎn)化,,氰化鉀 0.05g高鐵氰化鉀 0.2g磷酸二氫鉀 0.14g非離子表面活性劑 1.0 ml蒸餾水 加至

12、1000 ml,二. 試劑,HiCN轉(zhuǎn)化液(文齊液),調(diào)pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。,氧化,調(diào)節(jié)pH,促溶,防混濁,提供CN-,,三. 方法,4.實(shí)際工作中，可用HiCN參考液，按生化方 法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或求出K值后計(jì)算。 K＝∑Hb（g）/∑A,1. 5.0 ml Hb轉(zhuǎn)化液＋血20ul,混勻,靜置5min。,2.分光光度計(jì)比色，波長(zhǎng)540nm，以空白轉(zhuǎn)化 液調(diào)零，測(cè)定吸光度“A”。,3.如用符合

13、WHO標(biāo)準(zhǔn)的光度計(jì)，則可據(jù)“A”直 接計(jì)算Hb濃度。,氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法,25,血紅蛋白濃度計(jì)算公式：Hb(g/L)=A?540HiCN/44×64458/1000×251 =A×367.7A?540HiCN：測(cè)定管吸光度44：毫摩爾消光系數(shù)64458/1000：1mmol/L Hb溶液中所含Hb克數(shù)251為稀釋倍數(shù),,三. 方法,4.實(shí)際工作中，可用HiCN參考液，按生

14、化方 法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或求出K值后計(jì)算。 K＝∑Hb（g）/∑A,1. 5.0 ml Hb轉(zhuǎn)化液＋血20ul,混勻,靜置5min。,2.分光光度計(jì)比色，波長(zhǎng)540nm，以空白轉(zhuǎn)化 液調(diào)零，測(cè)定吸光度“A”。,3.如用符合WHO標(biāo)準(zhǔn)的光度計(jì)，則可據(jù)“A”直 接計(jì)算Hb濃度。,氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法,,Hb(g/L) A 50 0.128 100 0.265 15

15、0 0.385 200 0.523,K=∑Hb/∑A = 500/1.301 = 384.32,Hb=K A,,,氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法,,1.KCN為劇毒藥品，防污染。2.HiCN轉(zhuǎn)化液不能存于塑料瓶中。 否則CN-下降，結(jié)果偏低。3.分光光度計(jì)應(yīng)定期校正并使用 配套的比色杯。4.標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值應(yīng)定期校正。,四. 注意事項(xiàng),氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法,29,,,血紅蛋白,SDS

16、-Hb,,SDS,540nm,血紅蛋白濃度,吸光度,十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）法,,方法學(xué)評(píng)價(jià),HiCN法,SDS-Hb法,優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便；顯色快，結(jié)果穩(wěn)定。,缺點(diǎn)：氰化鉀有劇毒； 高白細(xì)胞或高球蛋白血癥等可致渾濁； HbCO轉(zhuǎn)化慢。,參考方法,優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單；結(jié)果穩(wěn)定；無(wú)公害。,缺點(diǎn)：摩爾消光系數(shù)未確定； 破壞白細(xì)胞； 質(zhì)量差異大 。,次選方法,,如何采用SDS-

17、Hb法進(jìn)行血紅蛋白測(cè)定？,1.HiCN法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,2.SDS-Hb法標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制,1)取4份不同濃度抗凝血或溶血液用HiCN法 測(cè)定吸光度，并求出其Hb濃度。,2)再用SDS-Hb法測(cè)定4份標(biāo)本的吸光度。,3)以4份標(biāo)本Hb濃度為橫坐標(biāo)，SDS-Hb法測(cè)得 的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。,32,分析前質(zhì)量控制：同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)分析中質(zhì)量控制技術(shù)誤差：稀釋倍數(shù)、分光光度計(jì)波長(zhǎng)、光縫、比色杯光徑需校正HiCN轉(zhuǎn)化液

18、：棕色玻璃瓶HiCN參考液：關(guān)鍵質(zhì)控物：室內(nèi)質(zhì)控分析后質(zhì)量控制：同紅細(xì)胞計(jì)數(shù),質(zhì)量控制,33,①成年：男性：120～160g／L； 女性：llO～150g／L。②新生兒：170～200g／L。③老年(70歲以上)： 男性：94～122g／L；女性87～112g／L。,參考值,34,①輕度貧血，成年男性Hb＜120g/L， 成年女性＜110g/L；②中度貧血＜90g/L；③重

19、度貧血＜60g/L；④極度貧血＜30g/L。,臨床意義,35,三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查,紅細(xì)胞大小、形態(tài)、染色和內(nèi)涵物的是否異常,1．顯微鏡分析法 采用人工顯微鏡法血涂片染色觀察， 是儀器法校準(zhǔn)的參考方法和檢測(cè)的復(fù)核方法。 2．計(jì)算機(jī)圖像分析 建立統(tǒng)計(jì)模型，以正常紅細(xì)胞形態(tài) 為參比、作出分析， 可用于與紅細(xì)胞形態(tài)變化疾病的輔助診斷。3. 血液分析儀法 提供紅細(xì)胞數(shù)量及其他

20、相關(guān)參數(shù)，對(duì)異 常結(jié)果報(bào)警， 但不能提供確切信息，需用鏡檢血涂片核實(shí)。,,,檢測(cè)原理和方法學(xué)評(píng)價(jià),1.有合格的血液細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)人員 2.選擇細(xì)胞分布均勻區(qū)域進(jìn)行鏡檢 3.注意完整規(guī)范的檢查順序 低倍鏡 細(xì)胞分布和染色 油鏡 細(xì)胞形態(tài),是否存在其他異常細(xì)胞 4．減少人為影響因素 全片瀏覽,質(zhì)量保證,,,,,38,,39,正常紅細(xì)胞,雙

21、凹圓盤形大小均一，平均7.2μm (6.7-7.7μm)；淡粉紅色，Hb充盈良好，中央部位為生理性淡染區(qū)，大小約為直徑的1／3；胞質(zhì)內(nèi)無(wú)異常結(jié)。,40,外周血紅細(xì)胞形態(tài)變化,紅細(xì)胞大小異常 小、大、巨、大小不均紅細(xì)胞性狀異常 球、橢圓、靶、口、鐮、棘、鈍鋸齒、淚滴、裂片、形態(tài)不整血紅蛋白充盈度與著色異常 低色素、高色素、嗜多色、著色不一紅細(xì)胞內(nèi)異常結(jié)構(gòu) 嗜堿性點(diǎn)彩、豪焦小體、卡波環(huán)、寄生蟲 、瘧色素紅細(xì)胞排列異常

22、緡錢狀形成、自凝現(xiàn)象有核紅細(xì)胞,1.紅細(xì)胞大小異常 (1)小紅細(xì)胞： 指直徑小于6μm的紅細(xì)胞。提示血紅蛋白合成障礙，見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血。(2)大紅細(xì)胞：指直徑大于l0μm的紅細(xì)胞，常見于巨幼細(xì)胞性貧血，也可見于溶血性貧血、惡性貧血等。,,(3)巨紅細(xì)胞：指直徑大于15μm的紅細(xì)胞。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血 。(4)紅細(xì)胞大小不均：指同一患者的紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以上。大者紅細(xì)胞直徑可達(dá)12μm，小者直徑僅2

23、.5μm。常見于嚴(yán)重的增生性貧血，巨幼細(xì)胞性貧血時(shí)尤為明顯,,2．紅細(xì)胞形態(tài)異常 (1)球形細(xì)胞：該紅細(xì)胞在血液中為球形，而在涂片上則顯示細(xì)胞中心著色深濃，體積較小，有球形之立體感。 (2)橢圓形細(xì)胞：紅細(xì)胞呈橢圓形、桿形，兩端鈍圓，長(zhǎng)軸增大，短軸縮短。見于遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥、大細(xì)胞性貧血；偶見于缺鐵性貧血、骨髓纖維化、巨幼細(xì)胞貧血、鐮形細(xì)胞性貧血。正常人血液中約占l％，但不超過(guò)15％。,(3)靶形細(xì)胞：紅細(xì)胞中心部位

24、和細(xì)胞周緣染色較深，其間為不染色的蒼白區(qū)環(huán)，形如射擊之靶 。常見于各種低色素性貧血，尤見于珠蛋白生成障礙性貧血、HbC病，也見于阻塞性黃疽、脾切除后狀態(tài)。 (4)口形細(xì)胞：紅細(xì)胞中央有裂縫，中心蒼白區(qū)呈扁平狀，頗似張開的口形或魚口。常見于口形紅細(xì)胞增多癥，小兒消化系統(tǒng)疾患引起的貧血，也可見于乙醇中毒、某些溶血性貧血及肝病患者等。正常人偶見(<4％)。,(5)鐮形細(xì)胞：紅細(xì)胞外形呈鐮刀狀、線條狀。鐮狀細(xì)胞貧血(HbS-S，HbS

25、-C)和鐮狀細(xì)胞特性(HbA-S)的血標(biāo)本，在缺氧的條件下，有大量鐮細(xì)胞。(6)棘形細(xì)胞：紅細(xì)胞表面有針尖狀突起，其間距不規(guī)則，突起的長(zhǎng)度和寬度可不一。多見于遺傳性或獲得性β-脂白缺乏癥，可高達(dá)70％～80%；也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥。,(7)新月形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞殘缺不全，體積大，狀如新月形，直徑約20μm 。見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿。(8)淚滴形細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞形如淚滴或梨狀。多見于貧血、骨髓纖維化癥時(shí)，偶見

26、于正常人。,(9)緡錢狀形成：紅細(xì)胞表面電荷發(fā)生改變，而使其互相連接如緡錢狀。(10)裂紅細(xì)胞：為紅細(xì)胞碎片或不完整的紅細(xì)胞。見于彌散性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、嚴(yán)重?zé)齻?。正常人血涂片中裂片?xì)胞小于2%。,(11)紅細(xì)胞形態(tài)不整 指紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生各種明顯改變，出現(xiàn)不規(guī)則的奇異形狀，如豆?fàn)?、梨形、蝌蚪狀、麥粒狀和棍棒形等。此種細(xì)胞在某些感染或嚴(yán)重貧血時(shí)多見，最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。,3

27、．染色異常 (1)正常色素性：見于正常人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和白血病等。 (2)低色素性：紅細(xì)胞的生理性中心淺染區(qū)擴(kuò)大，提示其血紅蛋白含量明顯減少。常見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐵粒幼細(xì)胞性貧血、某些血紅蛋白病。,(3)高色素性：中心淡染區(qū)消失，著色較深，胞體成紅色，胞體大。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。 (4)嗜多色性：它是剛脫核而尚未完全成熟的紅細(xì)胞，故其細(xì)胞體積較大。多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓造紅細(xì)胞功能活躍

28、。尤見于溶血性或急性失血性貧血。,4．紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) (1)嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞：指在瑞氏染色條件下，成熟紅細(xì)胞或幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)不一的藍(lán)色點(diǎn)狀物，即核糖核酸(RNA)，屬于未完全成熟紅細(xì)胞，其顆粒大小不一、多少不等。常作為鉛中毒診斷篩選指標(biāo)。,(2)豪焦小體(H-J’s body)：成熟紅細(xì)胞或幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)含有一個(gè)或多個(gè)直徑為l～2μm的暗紫紅色圓形小體?？梢娪诰抻准?xì)胞貧、血脾切除術(shù)后、無(wú)脾癥、脾萎縮、脾功能低下