毒死蜱降解菌的分離、鑒定及其降解特性.pdf

1、有機磷農藥是目前世界上使用量最大的殺蟲劑之一,其在農業(yè)生產上的廣泛應用在提高作物產量的同時也給環(huán)境帶來了嚴重的污染,已對人類健康構成威脅。國內外在毒死蜱農藥的微生物降解方面進行了一系列研究,主要集中在菌株的分離、鑒定和降解性能研究方面,部分菌株降解效率較低,還需繼續(xù)擴大降解菌菌種資源,篩選出高效的降解菌株。
　　 本研究采用富集馴化方法分離到三株毒死蜱降解菌,它們能夠利用毒死蜱作為唯一碳源進行生物降解；優(yōu)化了毒死蜱降解菌的生長條

2、件,檢測了其降解能力和毒死蜱代謝產物,并對菌株內的毒死蜱降解基因進行了定位和克隆。主要研究內容如下:
　　 1從農藥廠污水曝氣池的活性污泥中,篩選到三株能夠降解毒死蜱的細菌,分別命名為:CP1、CP6和CP7。通過形態(tài)學觀察、16S rDNA序列分析等方法,菌株CP1鑒定為人蒼白桿菌(Ochrobactrum anthropi)。菌CP6為假單胞菌屬(Pseudomonas sp.),菌株CP7為伯克霍爾德氏菌屬(Burkhol

3、deria sp.)。其16SrDNA基因序列在GenBank中的序列號分別為:HQ589348、JF280144和JF280145。
　　 2選擇了其中降解能力最好的一株菌CP1,利用正交實驗和Box-Behnken響應面法對影響CP1菌株降解毒死蜱的主要因素進行優(yōu)化分析,得到菌株CP1對毒死蜱的最適降解條件為:農藥濃度100 mg／L,pn值為7.0,溫度為28.5℃。優(yōu)化后,CP1對毒死蜱的降解率由最初的70.26％提高到

4、75.18％。毒死蜱降解優(yōu)化試驗提高了CP1菌株對毒死蜱的生物降解性能。
　　 3運用色譜法和質譜法檢測了菌株CP1降解毒死蜱的代謝產物,結果發(fā)現,菌株CP1對毒死蜱的代謝產物不同于通常的三氯吡啶酚,而是一種新的物質,推測該物質是由毒死蜱結構中P-S的斷裂而產生。這說明,CP1菌株中含有的毒死蜱降解酶不同于已知的有機磷降解酶,從而可以推測菌株CP1中含有特異性的毒死蜱降解基因。
　　 4用質粒擴增的方式檢測野生型CP1菌