地貧基因診斷f

1、地中海貧血基因,地中海貧血是一組單基因遺傳性溶血性疾病,我國?和β地貧基因突變類型頻率,Zhang J, et al. Hemoglobin. 2012 Sep 3.,地中海貧血基因攜帶率,Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5.Zhao, et al.Chi J Epidemiol 2011,32:352

2、-6.,α地貧基因分子基礎,,,,,缺失型：常見（約占60%）,非缺失型：少見（約占40%）,α地貧基因分子基礎,,,,α1 地貧（ α 0地貧）： 16號染色體兩個α基因喪失;一個缺失，另一個點突變。 - α / - α或α 地α / α 地α ，- - / α α。α2 地貧（ α+地貧）： 16號染色體一個α基因功能喪失。 - α / α α 或 α地α / α α。,,血紅蛋白H

3、病:由于α基因3個缺失/突變，使過量的β珠蛋白肽鏈形成β4多聚體（ HbH）胎兒水腫：4個α基因全部缺失/突變非缺失型α地貧,α地貧基因分子基礎,我國非缺失型? 地貧常見基因類型： ?2 CD 30 ? GAG (?Glu) Unstable Hb ?2 CD 31 AGG?AAG (Arg?Lys) Splicing m

4、utation ?2 CD 59 GGC?GAC (Gly?Asp) Unstable Hb Hb Westmead ?2 CD 122 CAC?CAG (His?Gln) Unstable Hb Hb QS ?2 CD 125 CTG?CCG (Leu?Pro) Unstable Hb

5、 Hb CS ?2 CD 142 TAA?CAA (Gln) Terminator mutation,α地貧基因分子基礎,α 地貧臨床類型與基因類型的關系,,,,臨床 基因靜止型 - α / αα輕型 - α / - α或- - / α α中間型

6、 - - / - α 重型 - - / - -,,,,,β地貧基因分子基礎,,基因缺失：少見(僅見于:41-42),點突變：常見（約占99.5%）,β地貧基因分子基礎,β 地貧臨床類型與基因類型的關系,,,,臨床 基因輕型 β地/ β（ β雜合子）中間型 β地/

7、 β地（ β變異型純合子或雙重雜合子）重型 β地/ β地（ β純合子或雙重雜合子）,,,,,地中海貧血基因診斷技術,PCR：多重PCR，Gap-PCR，QR-PCR等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO）反向點雜交 （RDB）Southern blot 限制性切酶譜分析多重連接酶依賴探針擴增技術(MLPA)多重引物延伸DHPLC基因測序,Genotyping of the--SEA alleles

8、by Gap-PCR,地貧基因診斷技術（Gap-PCR）,地貧基因診斷技術（ASO）,地貧基因診斷技術（ASO）,地貧基因診斷技術（RDB）,,GenotypeFather CDs41-42 (?CTTT) / N MotherIVS-2-654 (C?T) / N FetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal control N / N,地貧基因診斷技術（RDB）,地貧基因診斷技術（MLPA）

9、,地貧基因診斷技術（DHPLC),α地貧 (缺失型)的基因診斷,,,,,Southern 印跡結合 多重PCR結合 缺口PCR(Gap-PCR ) 多重連接酶依賴探針 實時熒光定量 限制性切酶譜分析 溶解曲線分析 結合片段大小分析 擴增技術(MLPA) PCR(RQ-PCR)

10、 優(yōu)點 可用于分析基因的 簡潔，快速，污 對儀器要求低，易推 重復性好，特異性高 確定cDNA拷貝 大片段缺失與重復 染降低，檢測單 廣，檢測大片段缺失。 ，可同時檢測已知與 數(shù)，可同時檢 突變，結果可靠， 個堿基突變及小

11、 未知大片段缺失或重 測已知和未知 穩(wěn)定性高。 片段缺失。 復突變。 大片段缺失缺點 費時、費力、需用

12、 不能檢測未知缺失及 成本高限制了其推廣 放射性同位素。 非缺失突變。應用 PCR 診斷方法的 可鑒定各種缺失 廣泛用于地貧檢測， 作為常見地貧基因篩 作為補充實驗 補充或佐證。

13、 類型。 可區(qū)分雜合子及純 陰性但高度懷疑地貧 或產(chǎn)前篩查 合子 的補充實驗。,,,,,各種α地貧基因診斷方法的優(yōu)缺點及應用,α地貧(非缺失型)的基

14、因診斷,PCR 結合限制性內(nèi)切酶酶譜分析：簡便、快捷，但只限于涉及限制性內(nèi)切酶位點改變的突變和小片段缺失的檢測多重擴增不應突變系統(tǒng)：簡便、快速，同Gap-PCR一樣，廣泛用于α地貧基因檢測聚合酶鏈反應結合寡核苷酸探針的反向斑點雜交:診斷效率高，廣泛用于常見非缺失型基因檢測 基因芯片：并行性、多樣性及自動化，同時診斷α及β地貧 基因測序：可用于檢測未知的非缺失型地貧基因,β地貧基因診斷,點突變,,PCR-RDB基因測序

15、,,植入前基因診斷 （羊膜穿刺取樣） 母體外周血分離胎兒細胞進行產(chǎn)前診斷 母體血漿或血清中胎兒DNA分析,地貧基因產(chǎn)前診斷新技術,地貧基因診斷臨床應用,評價基因診斷結果應注意的問題,不同種族/地區(qū)地貧基因突變點有差別臨床貧血的嚴重程度（即臨床分型）與基因診斷的嚴重程度一致：確診,評價基因診斷結果應注意的問題,臨床貧血嚴重程度與基因診斷不一致（1）臨床“重”，基因“輕”： ①應作家系調(diào)