生化檢驗(yàn)質(zhì)控方法之大全

1、1,生化檢驗(yàn)質(zhì)控方法之大全,質(zhì)量控制（quality control，QC）是利用現(xiàn)代科學(xué)管理的方法和技術(shù)檢測(cè)分析過程中的誤差，控制與分析有關(guān)的各個(gè)環(huán)節(jié)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。也稱為實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證。,定義：,3,1947年Sundeman首先調(diào)查發(fā)現(xiàn)不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)同一份標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有驚人的誤差。 1950年Levey和Jennings就將工業(yè)質(zhì)控圖移植臨床生化實(shí) 驗(yàn)室，此后，質(zhì)控圖和數(shù)理統(tǒng)計(jì)一直成為臨床生化檢驗(yàn)質(zhì)量

2、控制（QC）的重要手段。 1953年世界上出現(xiàn)了商品性的控制血清。 1954年發(fā)展到國(guó)與國(guó)之間的質(zhì)量調(diào)查。 1960年代初已發(fā)展為全面質(zhì)量控制。 1974年在日本召開了第一次臨床生化檢驗(yàn)質(zhì)量控制國(guó)際 專題討論會(huì)。 隨后WHO和國(guó)際臨床生化學(xué)會(huì)都設(shè)有質(zhì)控領(lǐng)導(dǎo)機(jī)構(gòu)，向各國(guó)提供標(biāo)準(zhǔn)品和控制物，領(lǐng)導(dǎo)和管理國(guó)際性的質(zhì)量控制工作。,專業(yè)發(fā)展,4,主要內(nèi)容 第一節(jié) 全過程質(zhì)量控制

3、 第二節(jié) 室內(nèi)質(zhì)量控制 第三節(jié) 室間質(zhì)量評(píng)價(jià) 第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可 第五節(jié) 試劑盒的選擇和評(píng)價(jià),5,第一節(jié) 全過程質(zhì)量控制,全面質(zhì)量控制的內(nèi)容 ▼ 分析前質(zhì)量控制 ▼ 分析中質(zhì)量控制 ▼ 分析后質(zhì)量控制,全面質(zhì)量控制的內(nèi)容主要包括標(biāo)本分析前的質(zhì)量保證、分析中的質(zhì)量控制和分析后的質(zhì)量評(píng)估

4、三個(gè)主要過程的質(zhì)控。它們之間的實(shí)驗(yàn)保證體系見圖4-1。,全面質(zhì)量控制的內(nèi)容,7,內(nèi)容主要為： ① 人員的素質(zhì)和穩(wěn)定性 ② 實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置和工作環(huán)境 ③ 實(shí)驗(yàn)儀器的質(zhì)量保證 ④ 檢測(cè)方法的選擇和評(píng)價(jià) ⑤ 試劑盒的選擇與評(píng)價(jià) ⑥ 病人準(zhǔn)備 ⑦ 標(biāo)本的采集、處理和儲(chǔ)存 ⑧ 實(shí)驗(yàn)室用水等,（一）分析前質(zhì)量控制,8,內(nèi)容主要包括： ① 標(biāo)本的

5、正確處理和應(yīng)用 ② 項(xiàng)目操作規(guī)程的建立 ③ 室內(nèi)質(zhì)控和結(jié)果分析 ④ 登記和填發(fā)報(bào)告等,(二)分析中的質(zhì)量控制,9,內(nèi)容主要有： ① 運(yùn)送實(shí)驗(yàn)報(bào)告 ② 室內(nèi)質(zhì)控的數(shù)據(jù)管理 ③ 參加室間質(zhì)評(píng) ④ 病人投訴調(diào)查 ⑤ 臨床信息反饋等,（三）分析后的質(zhì)量評(píng)估,10,圖4-1 全面質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)保證體系,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

6、,,分析后質(zhì)量評(píng)估,分析中質(zhì)量控制,分析前質(zhì)量保證,分析中質(zhì)量控制,檢查病人申請(qǐng)檢驗(yàn),病人準(zhǔn)備,標(biāo)本采集,標(biāo)本運(yùn)送,人員素質(zhì)工作環(huán)境實(shí)驗(yàn)用水實(shí)驗(yàn)室管理,臨床醫(yī)生,運(yùn)送報(bào)告病人投訴室間質(zhì)評(píng),儀器質(zhì)量保證方法選擇與評(píng)價(jià)試劑選擇與評(píng)價(jià),反饋信息,標(biāo)本處理,建立操作規(guī)程室內(nèi)質(zhì)控及分析標(biāo)本分析測(cè)定,室內(nèi)復(fù)查,保留標(biāo)本隨時(shí)復(fù)查,登記填發(fā)報(bào)告,11,第二節(jié) 室內(nèi)質(zhì)量控制 臨床生化實(shí)驗(yàn)室常規(guī)開展的室內(nèi)質(zhì)控（Int

7、ernal quality control，IQC），旨在檢測(cè)和控制常規(guī)工作的精密度和準(zhǔn)確度，提高常規(guī)工作中天內(nèi)和天間標(biāo)本檢測(cè)的一致性。能及時(shí)地、準(zhǔn)確地報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果。,12,人員培訓(xùn) 建立標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程 儀器的檢定與校準(zhǔn) 質(zhì)控品,一、室內(nèi)質(zhì)量控制的任務(wù),13,實(shí)驗(yàn)室每個(gè)工作人員都應(yīng)對(duì)開展質(zhì)量控制工作的重要性、基礎(chǔ)知識(shí)、一般方法有充分的了解，并在實(shí)踐過程中不斷學(xué)習(xí)、提高。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)培養(yǎng)一批開展質(zhì)控工作

8、的技術(shù)骨干。,1．人 員 培 訓(xùn),14,標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（standard operational procedure，SOP）包括儀器使用及維護(hù)的操作規(guī)程，試劑、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品等使用的操作規(guī)程和每個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的操作規(guī)程等。,2．建立標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程,15,對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)儀器如分光光度計(jì)、量具、自動(dòng)生化分析儀以及其它測(cè)定儀器等要定期按要求進(jìn)行檢定和校準(zhǔn)如對(duì)自動(dòng)化分析儀、分光光度計(jì)的摩爾吸收系數(shù)ε的定期校準(zhǔn)。所有校準(zhǔn)和檢定都應(yīng)有時(shí)間、結(jié)果、變

9、更和頻度的記錄和說(shuō)明。,3．儀器的檢定與校準(zhǔn),16,4．質(zhì)控品,定義,為質(zhì)控目的而制備的標(biāo)本稱為質(zhì)控品。質(zhì)控品含有與測(cè)定標(biāo)本同樣的基礎(chǔ)物質(zhì)（通常為小牛血清）其分析物應(yīng)具有參考值、病理值和醫(yī)學(xué)決定水平三種水平濃度。,17,,是指對(duì)臨床診治疾病具有決定性作用的被分析物的濃度，是臨床上按照不同病情給予不同治療方案而確定的閾值。,醫(yī)學(xué)決定水平,定義：,18,某一測(cè)定成分可有多個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平。如血糖有四個(gè)決定水平。2.8mmol/L表示低于此值出

10、現(xiàn)低血糖癥狀，7.1mmol/L表示空腹時(shí)確定糖尿病的水平，8.9mmol/L表示出現(xiàn)尿糖，16.5mmol/L 以上出現(xiàn)高血糖昏迷。,特點(diǎn)：,19,根據(jù)質(zhì)控品的物理性狀不同分為凍干質(zhì)控品、液體質(zhì)控品和混合血清等。根據(jù)有無(wú)測(cè)定值可分為定值（藍(lán)色標(biāo)簽）質(zhì)控品和非定值（紅色標(biāo)簽）質(zhì)控品。各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)各自的情況選用以上一種質(zhì)控品作為室內(nèi)質(zhì)控品。,質(zhì)控品的種類,20,①人血清基質(zhì)，分布均勻。 ②無(wú)傳染性。 ③添加劑和調(diào)制

11、物的數(shù)量少。 ④瓶間CV%酶類應(yīng)小于2%，其它應(yīng)小于1% 。 ⑤凍干品復(fù)溶后穩(wěn)定，2～8℃時(shí)不少于24小時(shí)，－20℃時(shí)不少于20天；某些不穩(wěn)定成分（如BIL，ALP等）在復(fù)溶后4小時(shí)的變異應(yīng)小于2% ⑥在實(shí)驗(yàn)室的有效期應(yīng)在一年以上。 ⑦合理的成本。,質(zhì)控品應(yīng)具有的特征是：,21,①嚴(yán)格按質(zhì)控品說(shuō)明書操作。 ②凍干質(zhì)控品的復(fù)溶要確保溶劑的質(zhì)量。 ③凍干質(zhì)控品復(fù)溶的

12、加量要準(zhǔn)確一致。 ④凍干質(zhì)控品復(fù)溶應(yīng)輕輕搖勻切忌劇烈震搖。 ⑤質(zhì)控品應(yīng)按規(guī)定方法保存不用超期品。 ⑥質(zhì)控品要與標(biāo)本同樣測(cè)定條件下測(cè)定。,質(zhì)控品的正確使用和保存,22,二、室內(nèi)質(zhì)量控制的主要方法,確定質(zhì)量目標(biāo) 設(shè)定靶值和控制限Levey-Jennings質(zhì)控圖多規(guī)則質(zhì)控技術(shù),質(zhì)量目標(biāo)是實(shí)驗(yàn)室選用的質(zhì)控方法所需達(dá)到的目標(biāo)，質(zhì)量目標(biāo)可用總允許誤差的形式表示．　　目前中

13、國(guó)尚未確立各項(xiàng)目的總允許誤差，可參考美國(guó)（表４-１）和歐洲（表４-２）．,一、確定質(zhì)量目標(biāo),24,最佳變異(optimal conditions variance OCV)表示實(shí)驗(yàn)室在最佳條件下測(cè)定項(xiàng)目所能達(dá)到的最好精密度水平。 常規(guī)變異(routine conditions variance RCV)表示實(shí)驗(yàn)室在常規(guī)條件下測(cè)定項(xiàng)目所能達(dá)到的精密度水平。RCV2OCV時(shí)，不可接受．二者是反映實(shí)驗(yàn)室工作水平的基礎(chǔ)指標(biāo)，也是開展室內(nèi)質(zhì)控

14、工作的基礎(chǔ)工作。,最佳變異和常規(guī)變異的設(shè)定,25,1、穩(wěn)定性較長(zhǎng)的質(zhì)控品 ①暫定靶值的設(shè)定：對(duì)新批號(hào)的質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)至少20次質(zhì)控測(cè)定的結(jié)果，計(jì)算出平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，作為暫定靶值和暫定標(biāo)準(zhǔn)差。 ②常用靶值的設(shè)立：以最初20個(gè)數(shù)據(jù)和三至五個(gè)月在控?cái)?shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)的累積平均數(shù)作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常用靶值和常用標(biāo)準(zhǔn)差。2、穩(wěn)定性較短的質(zhì)控品3、特殊情況的處理,二、設(shè)定靶值和控制限,26,對(duì)新批號(hào)的質(zhì)控品應(yīng)確定控

15、制限，控制限通常是以多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差表示，即以標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)表示。不同項(xiàng)目（定量測(cè)定）的控制限要根據(jù)其采用的質(zhì)控規(guī)則來(lái)決定。,4、設(shè)定控制限,27,1、均數(shù)－標(biāo)準(zhǔn)差（ -s）質(zhì)控圖　是臨床最常用的質(zhì)控圖，以監(jiān)測(cè)分析的精密度。均數(shù)－標(biāo)準(zhǔn)差（-S）質(zhì)控圖,三、Levey-Jennings質(zhì)控圖,根據(jù)前面確定的靶值（ ）和標(biāo)準(zhǔn)差繪制 -s質(zhì)控圖，得到均值線（ ）、警告線（ ±2s）和失控線（ ±3s

16、）。與質(zhì)控圖制作相同批號(hào)的控制血清，每天隨病人標(biāo)本分析，結(jié)果點(diǎn)在圖上，直線連接。,（1）方法:,28,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,d,均數(shù),+2S,-2S,+3S,-3S,正常分布,,29,正常分布規(guī)律： ① 95%數(shù)據(jù)落在 ±2s內(nèi) ② 不能有連續(xù)5次結(jié)果在同一側(cè) ③ 不能有5次結(jié)果漸升或漸降 ④ 不能連續(xù)2個(gè)點(diǎn)落在 ±2s以外 ⑤ 不

17、應(yīng)該有落在 ±3s以外的點(diǎn),（2）結(jié)果分析：,30,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,趨勢(shì)變化,漂移,精密度變化,,-3S,+3S,+2S,-2S,d,2S,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,31,① 漂移，提示存在系統(tǒng)誤差。 ② 趨勢(shì)性變化，說(shuō)明試劑或儀器的性能已發(fā) 生變化。 ③ 精度變化，提示測(cè)定的偶然誤差較大，如 儀

18、器、試劑不穩(wěn)定等。,異常表現(xiàn):,32,（1) 方法： 要求在常規(guī)條件下，同時(shí)測(cè)定2份定值質(zhì)控血清，并要求質(zhì)控血清所含測(cè)定物濃度最好分別為醫(yī)學(xué)決定水平的上限（高值）或下限（低值），或者是分析方法測(cè)定范圍的上限和下限。將測(cè)定結(jié)果分別繪成2份不同濃度的 －s質(zhì)控圖，當(dāng)有一份質(zhì)控血清測(cè)定值處于質(zhì)控圖上2s～3s界限內(nèi)，發(fā)出“警報(bào)”信號(hào)時(shí)，即應(yīng)采用其余各條規(guī)則對(duì)質(zhì)控圖進(jìn)行全面檢查，若符合其中一條，就應(yīng)把該批分析測(cè)定的結(jié)果判為“失控”。,2.

19、Westgard多規(guī)則質(zhì)控法,33,① 12S警告規(guī)則：當(dāng)2份質(zhì)控血清中的任意1份測(cè)定值處于±2s～±3s界限內(nèi)，為“警報(bào)”信號(hào)。② 13S規(guī)則：當(dāng)2份質(zhì)控血清中的任意1份測(cè)定值超過±3s界限，為“失控”。提示存在隨機(jī)誤差。,（2）判斷規(guī)則：,,,,,,,,,,,,,,,,2s,-2s,-3s,3s,x,,③ R4S規(guī)則：同一批中二個(gè)質(zhì)控結(jié)果之差超出4s范圍，其中一個(gè)超出＋2s限值，另一個(gè)超出－2s限值，

20、為“失控”，屬隨機(jī)誤差過大。 ④ 22S規(guī)則：同批兩個(gè)質(zhì)控品結(jié)果同方向超出±2s限 值，或同一質(zhì)控品連續(xù)兩次質(zhì)控結(jié)果超出±2s限值為“失控”，多由系統(tǒng)誤差造成。,34,,,,,,,,,3s2s,-2s-3s,3s 2sX-2s-3s,⑤ 41S規(guī)則：當(dāng)1份質(zhì)控血清的測(cè)定結(jié)果連續(xù)4次超過＋1s或－1s界限，或2份質(zhì)控血清的測(cè)定結(jié)果同時(shí)連續(xù)2次超過＋1s或－1s界限時(shí)，為“失控”，一般由系統(tǒng)誤差所至。⑥

21、10 規(guī)則：當(dāng)1份質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果連續(xù)10次偏于均值一側(cè)時(shí)，或2份質(zhì)控血清的測(cè)定結(jié)果同時(shí)連續(xù)5次偏于 一側(cè)時(shí)，為“失控”，是系統(tǒng)誤差所致。,35,,,,,,,,s,2S,3S,-s,-2s,-3s,,,,,,,,,,,s,-s,36,1、操作者在測(cè)定質(zhì)控時(shí)，如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)違背了質(zhì)控規(guī)則，應(yīng)填寫失控報(bào)告單，對(duì)失控結(jié)果要進(jìn)行回顧、分析是否人為錯(cuò)誤操作等原因。2、重新測(cè)定一次，若在控，則說(shuō)明是由于人為原因所致，若仍然失控，則應(yīng)更換同

22、一批號(hào)另一瓶質(zhì)控血清，若在控則說(shuō)明是質(zhì)控物變質(zhì)或污染。,（三）失控后處理,質(zhì)控品必須分裝、冷凍保存,37,3、如仍失控，取另外一個(gè)批號(hào)的質(zhì)控物或定值血清，以同樣方法測(cè)定一次，如結(jié)果在控，提示前一批質(zhì)控血清可能存在問題，認(rèn)真查找質(zhì)控變質(zhì)原因，予以改正。4、如仍不在允許范圍內(nèi)，則仔細(xì)檢查儀器各部分性能是否正確，若仍然失控，更換試劑，重新測(cè)定，如在控則可能由于試劑放置時(shí)間過長(zhǎng)變質(zhì)。5、如結(jié)果仍失控，則仔細(xì)檢查儀器各部分性能是否正常，包括光

23、路、水路、電路等系統(tǒng)，維修保養(yǎng)后重測(cè)。,范例一BUN結(jié)果偏高,解決方案： 1、換定標(biāo)液，將朗道的定標(biāo)液換成試劑本身的定質(zhì)控做所有項(xiàng)目質(zhì)控，然后用質(zhì)控單獨(dú)做BUN項(xiàng)目質(zhì)控后，BUN標(biāo)液，結(jié)果仍偏高，排除定標(biāo)液的本身問題。 2、用定標(biāo)液做質(zhì)控結(jié)果亦偏高，排除質(zhì)控品問題。 3、先用結(jié)果降低。結(jié)論：試劑本身存在一定的系統(tǒng)誤差，可能項(xiàng)目之間存在交叉污染。解決辦法：更換試劑的位置，更換干燥棒，如不行則需更換不同廠家的試

24、劑。結(jié)果：更換試劑位置，結(jié)果恢復(fù)正常。,范例二 RF出現(xiàn)負(fù)值,可能原因分析：1、RF采用的是免疫比濁法，其測(cè)定的付波長(zhǎng)為700nm，儀器在700nm處有很強(qiáng)的非特異性吸收峰，導(dǎo)致付波長(zhǎng)吸收峰增高，當(dāng)標(biāo)本的濃度很低時(shí)，主波長(zhǎng)的吸光度值比付波長(zhǎng)的低，結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值。2、定標(biāo)液濃度較高，而比濁法不能用線性定標(biāo)方式，必須采用多點(diǎn)定標(biāo)的方法。低濃度時(shí)就很可能出現(xiàn)負(fù)值。3、抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)后帶現(xiàn)象?？赡艿慕鉀Q方案：1、將檢測(cè)的付波長(zhǎng)

25、去掉（可能會(huì)結(jié)果偏高，乳糜血的干擾）2、更換定標(biāo)液3、稀釋。,39,40,41,42,43,44,45,第三節(jié) 室間質(zhì)量評(píng)價(jià),室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（external quality assessment，EQA）是指多家實(shí)驗(yàn)室分析同一標(biāo)本，由外部獨(dú)立機(jī)構(gòu)收集、分析和反饋實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，評(píng)定實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的質(zhì)量，觀察實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，建立起各實(shí)驗(yàn)室分析結(jié)果之間的可比性。,46,①鑒定實(shí)驗(yàn)室的工作缺陷（操作程序、制度）②建立方法的可接受限③鑒

26、定方法的可信性④為實(shí)驗(yàn)室執(zhí)照評(píng)定或認(rèn)可提供客觀依據(jù)⑤評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作人員的能力⑥評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的可比性 目的是通過實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)，觀察各實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的準(zhǔn)確性、一致性，并采取一定措施，使各實(shí)驗(yàn)室結(jié)果漸趨一致。,（一）室間質(zhì)評(píng)的目的,47,（二）室間質(zhì)評(píng)應(yīng)具備的條件 ① 要有一支素質(zhì)較高的質(zhì)控技術(shù)隊(duì)伍 ② 室間質(zhì)評(píng)要有室內(nèi)質(zhì)控的基礎(chǔ) ③ 要有良好質(zhì)控血清作為調(diào)查樣本 ④ 樣本定值方法可靠，有參考實(shí)驗(yàn)室作后盾

27、 ⑤ 統(tǒng)一測(cè)定方法及校準(zhǔn)品,48,1．方法 組織若干實(shí)驗(yàn)室，共同在規(guī)定時(shí)間內(nèi)測(cè)定同一批樣品、收集測(cè)定結(jié)果，作統(tǒng)計(jì)分析并按規(guī)定評(píng)分。,（二）室間質(zhì)評(píng)的方法,49,能力比對(duì)分析（proficiency testing,PT）是室間質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)方案之一，現(xiàn)已成為全球性室間質(zhì)量保證系統(tǒng)的主要內(nèi)容，以保護(hù)病人的利益和公眾的福利。 PT方案是通過實(shí)驗(yàn)室之間的比對(duì)判斷實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力的活動(dòng)。 美國(guó)國(guó)會(huì)1988年臨床實(shí)驗(yàn)

28、室修正案（Clinical laboratory improvement amendment,CLIA′88）強(qiáng)制性地將PT作為實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的主要內(nèi)容之一。,能力比對(duì)分析,50,表4-3 美國(guó)CLIA’88能力比對(duì)檢驗(yàn)對(duì)臨床化學(xué)的分析質(zhì)量要求,51,52,國(guó)際CLIA′88的PT方案規(guī)定，臨床生物化學(xué)項(xiàng)目每年至少進(jìn)行3次PT調(diào)查，每次調(diào)查至少包括5個(gè)不同的質(zhì)控樣本，在一年內(nèi)，對(duì)于任一項(xiàng)至少可得15個(gè)測(cè)定結(jié)果。通過各實(shí)驗(yàn)室間持續(xù)的比較，作

29、出結(jié)果判斷。,（一）方法,53,針對(duì)某一項(xiàng)目的得分（Score）： S1 = 對(duì)調(diào)查的全部項(xiàng)目的得分： S2 =,（二）計(jì)算,54,國(guó)際CLIA′88技術(shù)細(xì)則規(guī)定，S1、S2均應(yīng)大于80，否則判為不滿意。且如果S1或S2連續(xù)兩次或兩次以上不滿意，即為失敗，對(duì)于某一個(gè)接受結(jié)果，不再進(jìn)行優(yōu)劣分級(jí)。,（三）判斷,55,PT是對(duì)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作進(jìn)行評(píng)價(jià)的活動(dòng)，目的是為了全面提高檢驗(yàn)的

30、質(zhì)量。 所以對(duì)PT調(diào)查的標(biāo)本應(yīng)完全按照病人標(biāo)本一樣對(duì)待，與病人標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行分析，切忌互相核對(duì)結(jié)果，這樣才能反映實(shí)驗(yàn)室真正的日常工作水平。 各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該與PT組織者密切合作，解決實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的各種問題，不斷提高檢驗(yàn)質(zhì)量。,（四） 目的意義,1．目的,56,通過能力比對(duì)分析可獲得本實(shí)驗(yàn)室與使用同一方法的其他實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的差異，以及與做同一試驗(yàn)但使用不同方法的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果比較的情況。 能力比對(duì)分析還可評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的分析能力，監(jiān)控

31、實(shí)驗(yàn)室可能出現(xiàn)的技術(shù)問題，可作為實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的外部監(jiān)督工具。,2．意義,57,變異指數(shù)得分法1985年全國(guó)臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制會(huì)議上通過的提案，建議變異指數(shù)得分計(jì)算公式如下： V = VI = 其中，Ｘ為各實(shí)驗(yàn)室某項(xiàng)目的測(cè)定值，T為靶值，V為變異百分?jǐn)?shù)，VI為變異指數(shù)，CCV為已選定的變異系數(shù)。,補(bǔ) 充,58,表

32、4-5 WHO推薦的CCV值,K+Na+Cl-Ca2+P3+Glu,2.91.62.24.07.87.7,5.77.78.93.97.59.6,BUNUACrTPAlbTBIL,判 斷 標(biāo) 準(zhǔn),在計(jì)算時(shí)，VIS只計(jì)整數(shù)位，不帶正負(fù)符號(hào)。當(dāng)VI ≤ 400時(shí),VIS = VI; 當(dāng)VI ＞ 400時(shí)，VIS = 400。,59,我國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)為：VIS≤80為優(yōu)良80＜ VIS≤150為

33、及格VIS＞200，表明結(jié)果中有臨床上不允許的誤差。 VIS=400的測(cè)定結(jié)果會(huì)造成臨床的嚴(yán)重失誤，是絕對(duì)不許可的,WHO的標(biāo)準(zhǔn)為:VIS＜50為優(yōu)秀VIS＜100為良好VIS＜150為及格。,60,VIS方案過去運(yùn)用的相當(dāng)廣泛，但隨著科學(xué)的發(fā)展，已暴露出自身的不足，比如說(shuō)酶、HDL、膽固醇等指標(biāo)已成為當(dāng)今實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)項(xiàng)目，但由于VIS方案還沒有給出它們的CCV值，所以無(wú)法計(jì)算VIS。而CCV值的確定是一個(gè)復(fù)

34、雜而漫長(zhǎng)的過程，并需要隨著儀器的更新隨時(shí)進(jìn)行調(diào)整，從而使VIS的計(jì)算值無(wú)法真正代表當(dāng)前的實(shí)際水平。,VIS方案的評(píng)價(jià),61,一、定義實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可（laboratory accreditation）是由權(quán)威性專業(yè)組織按照一定的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室或?qū)嶒?yàn)室工作人員進(jìn)行檢查、考核，認(rèn)可能夠開展或勝任某些工作，并授予資格的過程。,第四節(jié) 實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,62,①認(rèn)可委員會(huì)②一系列標(biāo)準(zhǔn)及檔案③經(jīng)選拔和培訓(xùn)并取得資格的評(píng)審員,二、基本組成,第五節(jié)臨床

35、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法的選擇與評(píng)價(jià),一、實(shí)驗(yàn)方法的選擇二、實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)三、臨床診斷實(shí)驗(yàn)的性能評(píng)價(jià),63,一、實(shí)驗(yàn)方法的選擇,方法分級(jí) 1、決定性方法：準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。用于發(fā)展及評(píng)價(jià) 參考方法和標(biāo)準(zhǔn)品。 2、參考方法：指準(zhǔn)確度和精密度已經(jīng)充分證實(shí)的分析方法，干擾因素小，系統(tǒng)誤差小，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性直線性及較寬的分析范圍。用于鑒定常規(guī)方

36、法和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。 3、常規(guī)方法：指性能符合臨床或其他目地的需要，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶医?jīng)濟(jì)實(shí)用。,64,標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)： 標(biāo)準(zhǔn)品：一種或幾種物理化學(xué)性質(zhì)已經(jīng)充分確定，被用于校準(zhǔn)儀器或證實(shí)一種測(cè)定方法的物質(zhì)。1、一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品：已經(jīng)確定為穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的數(shù)值已經(jīng)由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量，且有證書，用于校準(zhǔn)決定性方法，評(píng)價(jià)及校準(zhǔn)參考方法以及為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品定值。2、二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品：這類標(biāo)準(zhǔn)品可

37、由實(shí)驗(yàn)室自己配制或?yàn)樯唐?，其中有關(guān)物質(zhì)的量由參考方法定值，主要用于常規(guī)方法的標(biāo)化或?yàn)榭刂莆锒ㄖ怠?、控制物：控制物有凍干或是溶液，以參考方法用一級(jí)或二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品定值，用于質(zhì)量控制，一般不用于標(biāo)化。,65,一、實(shí)驗(yàn)方法的選擇,實(shí)驗(yàn)方法的選擇要求,66,1、實(shí)用性 2、可靠性 3、真實(shí)性,67,二、實(shí)驗(yàn)方法的評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)與分析誤差類型的關(guān)系,分析誤差的類型,評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn),初步實(shí)驗(yàn),指標(biāo),偶然誤差

38、 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密度恒定誤差 干擾實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確度比例誤差 回收實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確度,三、診斷性試驗(yàn)評(píng)價(jià)的相關(guān)指標(biāo),1.敏感度 2.特異度 3.陽(yáng)性似然比 4.陰

39、性似然比 5.受試者工作曲線,三、臨床生物化學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)的性能指標(biāo),1、靈敏度 診斷實(shí)驗(yàn)檢出的陽(yáng)性病人的百分率 臨床靈敏度（%）= 實(shí)際上檢測(cè)為陽(yáng)性病人數(shù)/理論上為陽(yáng)性病人數(shù)2、臨床特異度 指診斷實(shí)驗(yàn)檢查確定未患病的百分率 臨床特異度=檢查結(jié)果為陰性的人數(shù)/全部受檢未患病的人數(shù),69,70,3、參考值：系指一個(gè)地區(qū)的健康

40、人群中，規(guī)定若干條規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)，在總體中抽樣進(jìn)行調(diào)查測(cè)定，將測(cè)定結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理求出均值和標(biāo)準(zhǔn)差，通常將均值定為參考值，將X±2S定為參考范圍。,4、似 然 比（Likelihood ratio；LR）,似然比指的是患某種疾病的患者進(jìn)行某種檢測(cè)所得的指定數(shù)值范圍內(nèi)敏感度和特異度之間關(guān)系.陽(yáng)性似然比：診斷實(shí)驗(yàn)的真陽(yáng)性率與假陽(yáng)性率之比。PLR =敏感度/（1-特異度）陰性似然比：診斷實(shí)驗(yàn)的假陰性與真陰性之比。

41、NLR=（1-敏感度）/特異度,5、ROC 曲 線,ROC曲線(Receiver OperatorCharacteristic curve)：真陽(yáng)性率對(duì)假陽(yáng)性率作圖。并將所對(duì)應(yīng)的點(diǎn)連接起來(lái)所得到的曲線。,血糖測(cè)定及其sen與spe,,75,第六節(jié) 試劑盒的選擇和評(píng)價(jià),本節(jié)主要內(nèi)容生化檢驗(yàn)試劑的發(fā)展

42、 試劑盒的選擇和評(píng)價(jià),76,臨床生化試劑盒   臨床生化商品試劑與標(biāo)準(zhǔn)液按檢測(cè)項(xiàng)目組合成一套放在一個(gè)包裝盒內(nèi)叫試劑盒（reagent kit），或叫試劑組合（r

43、eagent set ）。 與自動(dòng)化分析儀匹配的試劑盒的研制、生產(chǎn)和供應(yīng)走向產(chǎn)業(yè)化的道路，它無(wú)疑是臨床生化發(fā)展史上一個(gè)巨大的技術(shù)進(jìn)步。,77,試劑盒的分類和發(fā)展,臨床生化診斷試劑種類繁多，有液體型、粉劑型、片劑型，有單一試劑、雙試劑、干試劑、多試劑等。 縱觀近20多年來(lái)的發(fā)展，臨床生化體外診斷試劑盒的分類和發(fā)展歷史可表示如下：,78,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

44、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,化學(xué)分析法,方法學(xué) 物理性狀 組合形式 操作方式,液體型自配試劑,液體多劑型試劑,手工法多步操作,酶法分析,干粉片型試劑,液體單劑型試劑,流動(dòng)離心式分析儀,免疫學(xué)法,液體型商品試劑,液體雙劑型試劑,任選分立式分析儀,干化學(xué)法,干式多層膠片型試劑,單劑型干片式

45、試劑,干片式分析儀,79,（一）液體型試劑 優(yōu)點(diǎn)是液體型試劑的試劑組分高度均一，瓶間差異小，測(cè)定重復(fù)性好和使用方便；它也無(wú)需加入任何輔助試劑及蒸餾水，避免了外源性水質(zhì)對(duì)試劑的影響，性能較穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確。 缺點(diǎn)是液體型試劑（尤其是酶試劑）保存時(shí)間較短，不便于運(yùn)輸。,,一、液體型試劑和粉（片）劑型試劑,80,所謂液體單試劑就是將某種生化檢驗(yàn)項(xiàng)目所用到的試劑科學(xué)地混合在一起，組成為一種試劑。應(yīng)用時(shí)，只須將標(biāo)本和試劑按一定比例混

46、合，即可進(jìn)行相應(yīng)的生化反應(yīng)，然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)結(jié)果。,,1．液體單試劑,81,內(nèi)源性甘油給甘油三酯測(cè)定的干擾。 內(nèi)外源性NH4+對(duì)尿素酶法測(cè)定的干擾。 內(nèi)源性丙酮酸對(duì)ALT、AST測(cè)定的干擾等。 維生素C和膽紅素對(duì)Trinder反應(yīng)的干擾。,單試劑存在抗干擾能力差的缺點(diǎn)，給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)相當(dāng)大的分析誤差。例如：,82,所謂液體雙試劑就是將某些生化檢測(cè)項(xiàng)目所用到的試劑，按用途科學(xué)地分成兩類，分別配成兩種試劑，通常第一試劑加入后

47、可起到全部或部分消除某些內(nèi)源性干擾的作用，第二試劑為啟動(dòng)被檢測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的試劑，兩種試劑混合后才共同完成被檢項(xiàng)目的生化反應(yīng)。然后用適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)結(jié)果。,,2．液體雙試劑,83,所謂粉劑型及片劑型試劑，即是將試劑的各組分用球磨技術(shù)粉碎成粉劑或混合后壓成片劑，使用前再加入指定的溶液復(fù)溶成液體試劑。,（二）粉（片）劑型試劑,84,用固體原料研磨后制成粉劑或片劑，則存在許多問題： ①要使試劑各組分混合得非常均勻，技術(shù)難度很大； ②分裝過程

48、中的稱量誤差及復(fù)溶時(shí)加水量的準(zhǔn)確性影響試劑的瓶間差； ③水質(zhì)優(yōu)劣對(duì)試劑的穩(wěn)定性和測(cè)定的可靠性有相當(dāng)大的影響。,85,（一）檢查包裝是否完整（二）試劑質(zhì)量初評(píng) （三）試劑性能特征的評(píng)估,二、試劑盒的選擇和評(píng)價(jià),86,（一）檢查包裝是否完整,商品試劑盒不僅應(yīng)具有優(yōu)質(zhì)的試劑內(nèi)容，而且應(yīng)有完整牢固的包裝和詳盡明確的說(shuō)明書。,1、外包裝 外包裝應(yīng)完整牢固，封口嚴(yán)密。,2、內(nèi)包裝 內(nèi)包裝應(yīng)有清晰完整的標(biāo)簽，牢固貼于容器

49、表面。,3、說(shuō)明書 內(nèi)容包括試劑名稱、用途、測(cè)定原理和技術(shù)要求、標(biāo)本要求、衛(wèi)生部批準(zhǔn)的文號(hào)等。,87,,一、說(shuō)明書審查 說(shuō)明書是用戶了解和正確使用試劑盒的指南。審查內(nèi)容包括： ①試劑名稱； ②用途； ③測(cè)定原理和技術(shù)要求； ④試劑盒內(nèi)的包裝內(nèi)容； ⑤適用儀器；,88,,一、說(shuō)明書審查 ⑥標(biāo)

50、本要求； ⑦測(cè)定步驟及注意事項(xiàng)； ⑧貯存的條件及有效期； ⑨性能特征，包括準(zhǔn)確度、精確度、特異性、 　受干擾的程度、線性范圍、參考范圍； ⑩生產(chǎn)單位名稱、地址、郵編及電話。,89,,（二）試劑質(zhì)量初評(píng),通過觀察試劑的顏色、性狀及溶解度等對(duì)試劑質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。粉劑型應(yīng)均勻無(wú)凝塊，不粘附瓶壁；液體型試劑應(yīng)無(wú)沉淀，無(wú)混濁，無(wú)滲漏。,90,,,（三）試劑性能特征的評(píng)估,（一）準(zhǔn)確度

51、 （二）精密度（三）干擾物試驗(yàn) （四）線性范圍（五）穩(wěn)定性,91,,（一）測(cè)定準(zhǔn)確度,1、通常用回收試驗(yàn)來(lái)衡量試劑盒的準(zhǔn)確度。回收率越接近100%，準(zhǔn)確率越高，一般以100%±5%為合格。,2、也可以用對(duì)比試驗(yàn)來(lái)衡量 ：將被檢試劑盒與公認(rèn)的參考方法同時(shí)測(cè)定若干樣本，計(jì)算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)和直線回歸方程。 相關(guān)系數(shù)γ在0.9～1.0之間，斜率b越接近1.0，截距a越接近0，則準(zhǔn)確度越

52、高（y=a+bx）。 b表示比例系統(tǒng)誤差，a表示恒定系統(tǒng)誤差。,92,,（二）檢驗(yàn)精密度,,,試劑批內(nèi)精密度和批間精密度均以變異系數(shù)來(lái)表示，一般批間CV值應(yīng)大于批內(nèi)，但二者應(yīng)無(wú)顯著差異，否則，試劑盒的均一性不符合要求。 1．批內(nèi)精密度 同一樣品用同一瓶試劑測(cè)定10次，求平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。 2．批間精密度 同一樣品，用不同批號(hào)的10瓶試劑測(cè)定，求平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。,93,（三）干擾物試驗(yàn)

53、,通過試驗(yàn)觀察試劑對(duì)干擾物影響的耐受程度。,方法 取一混合標(biāo)本，從中分出幾份，分別加入不同以知量的干擾物，然后測(cè)定出不同干擾物濃度下的待測(cè)物量，比較其測(cè)定結(jié)果，從各自的偏差程度即可了解試劑對(duì)干擾物的耐受程度。,94,,,,（四）測(cè)定線性范圍,線性范圍指該試劑盒按其說(shuō)明使用時(shí)可準(zhǔn)確測(cè)量的范圍。 試劑盒的線性范圍應(yīng)能覆蓋臨床上的參考值范圍和常見疾病的醫(yī)學(xué)決定水平，以減少樣品稀釋重測(cè)的機(jī)會(huì)。一旦線性范圍變窄即應(yīng)廢棄。

54、造成線性范圍變窄的原因常見的有： ①生產(chǎn)中組份投料量不足； ②生產(chǎn)后組分穩(wěn)定性差； ③運(yùn)輸和貯存不當(dāng)?shù)取?95,,,,（五）穩(wěn)定性試驗(yàn),試劑盒穩(wěn)定性是指試劑盒在規(guī)定條件下儲(chǔ)存仍保持其性能指標(biāo)的期限。該期限應(yīng)符合規(guī)定的儲(chǔ)存期。方法有以下三種。 1．原包裝試劑的穩(wěn)定性 按說(shuō)明書的保存方法儲(chǔ)藏，于不同時(shí)期取出一瓶復(fù)溶，測(cè)定試劑吸光度值、標(biāo)準(zhǔn)品含量、定值血清含量、線性范圍、酶促反應(yīng)時(shí)間曲線或化學(xué)反應(yīng)速度時(shí)間曲線及其他

55、性能指標(biāo)，直到這些指標(biāo)變化超出規(guī)定值的10%以上的期限，為原包裝試劑的穩(wěn)定期。,96,2．復(fù)溶后試劑的穩(wěn)定性 將復(fù)溶試劑分別放在4℃、25℃保存，逐日與新復(fù)溶試劑對(duì)比，觀察上述指標(biāo)（見原包裝試劑穩(wěn)定性），直到測(cè)定結(jié)果與新復(fù)溶試劑的差值>10%以上，這一期限為復(fù)溶后試劑的穩(wěn)定期。,3．不同溫度下的保存期 將原包裝試劑盒置25℃、37℃、45℃、4℃保存，以出現(xiàn)說(shuō)明試劑變質(zhì)的指標(biāo)來(lái)確定在不同溫度下的保存期。,97,1、醫(yī)學(xué)決定水平