醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗二抗酸染色

1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗二,微生物學(xué)教研室：3029130 科教科：3029945,實驗內(nèi)容,1.實驗一結(jié)果的觀察和分析； 2.細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測技術(shù)； 3.抗酸染色； 4.實驗考試。,一、實驗一結(jié)果的觀察和分析,空氣中細(xì)菌,咽喉部細(xì)菌,二、內(nèi)毒素的檢測技術(shù)（鱟試驗）,1.內(nèi)毒素檢測方法 家兔發(fā)熱法，鱟試驗。,2.鱟試驗原理3.材料 鱟試劑， 內(nèi)毒素試劑， 鱟試劑專用

2、溶解水， 無菌無熱源質(zhì)吸管,4.方法步驟（每4個人一組，兩支鱟試劑，一支實驗一支對照）（1）取兩支鱟試劑打開，分別加入0.1ml 鱟試劑 溶解水，使之溶解。（2）其中一支加入0.1ml內(nèi)毒素，標(biāo)記上實驗組， 另一支加入0.1ml溶解水，作為對照。（3）垂直放入37℃溫箱，20-30min觀察結(jié)果。5.結(jié)果及應(yīng)用 實驗組出現(xiàn)凝固，對照組不出現(xiàn)凝固,,三、抗 酸 染 色 Acid

3、fast stain,（一）實驗?zāi)康摹?1.掌握分枝桿菌抗酸染色的操作方法和意義。 2.熟悉抗酸染色的原理。（二）實驗原理 分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色，同時分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。 齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成

4、復(fù)合物，用3%鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。,1.細(xì)菌：卡介苗 （BCG）。 2.抗酸染液：石炭酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精、堿 性美蘭溶液。 3.其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片，玻片夾等。,（三）實驗材料,（四）方法與步驟1.細(xì)菌涂片的制備 涂片 干燥 固定 2.染色1）初染：用玻片夾

5、夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2~3 滴，在火焰高處（2~10cm）徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，加熱3~5min，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2）脫色：3%鹽酸酒精脫色30s~1min；用水沖洗。3）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1min；用水沖洗。4）玻片用吸水紙吸干，油鏡觀察。,,,（五）實驗結(jié)果,紅色為抗酸染色陽性； 藍(lán)色為抗酸染色陰性。,結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無序，偶呈分枝