利用聚酮類生物合成研發(fā)新抗生素的進展

1、,腸道傳染病診斷,,細菌室 金炎,傳染病概述,一.傳染病定義 由病原微生物（病毒、細菌、立克次體、螺旋體等）感染人體后產(chǎn)生的有傳染性的疾病。,二.造成傳染病流行的基本條件,（一）傳染源－指病原體已在體內(nèi)生長繁殖并能將其排出體外的人和動物。 （有患者、隱性感染者、病原攜帶者及受感染的動物）（二）傳播途徑－病原體離開傳染源后，到達另一個易感者的途徑。 （包括呼吸道、消化道、生活接觸、蟲媒、血液

2、、土壤等）（三）人群易感性－對某一傳染病缺乏特異性免疫力的人稱為易感者。 （易感者比例在人群中達到一定水平時，如果有傳染源和合適 的傳播途徑，則傳染病的流行很容易發(fā)生）,三. 傳染病的特征,（一）基本特征 1.有病原體；2.有傳染性；3.有流行病學特征；4.有感染后免疫。（二）臨床特點 1.潛伏期；2.癥狀期；3.恢復期。（三）常見癥狀和體征

3、 發(fā)熱、出疹、毒血癥狀及單核巨噬細胞系統(tǒng)反應等。,四. 傳染病的預防,（一）控制傳染源 早發(fā)現(xiàn)、早報告、早隔離、早診斷、早治療（五早）。（二）切斷傳播途徑 消毒和隔離（三）保護易感人群 預防接種；鍛煉身體、改善營養(yǎng)。,五. 《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的三類法定傳染病,甲類傳染病是指：鼠疫、霍亂。乙類傳染病是指：傳染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、脊髓灰質(zhì)

4、炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、流行性出血熱、狂犬病、流行性乙型腦炎、登革熱、炭疽、細菌性和阿米巴性痢疾、肺結(jié)核、傷寒和副傷寒、流行性腦脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生兒破傷風、猩紅熱、布魯氏菌病、淋病、梅毒、鉤端螺旋體病、血吸蟲病、瘧疾、甲型H1N1流感。--26丙類傳染病是指：流行性感冒、流行性腮腺炎、風疹、急性出血性結(jié)膜炎、麻風病、流行性和地方性斑疹傷寒、黑熱病、包蟲病、絲蟲病、手足口病，除霍亂、細菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒

5、以外的感染性腹瀉病。--11,感染性腹瀉,一、定義：感染性腹瀉廣義系指各種病原體腸道感染引起之腹瀉，這里僅指除霍亂、細菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉，為《中華人民共和國傳染病防治法》中規(guī)定的丙類傳染病。,二、病原：,目前已知引起腹瀉的病原體有數(shù)十種之多，但國內(nèi)報告以細菌性和病毒性腹瀉占多數(shù)。不同自然環(huán)境和生產(chǎn)、生活方式不同的地區(qū)，引起腹瀉病的主要病原體有所不同。,,總體上居首位的是志賀氏菌及輪狀病毒，第二位是腸致瀉

6、性大腸桿菌，第三位是空腸彎曲菌及沙門氏菌第四位及第五位是非O1/非O139群霍亂弧菌，其他致瀉性弧菌和小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌。,腸道傳染病基礎知識,腸道傳染病：系指腸道傳播、臨床上表現(xiàn)為胃腸道癥狀為主的一組傳染病種類細菌性：霍亂（含O139）、傷寒、菌痢、O157:H7出血性大腸桿菌、細菌性感染性腹瀉。病毒性：甲、戊型病毒性肝炎、脊髓灰質(zhì)炎、病毒性感染性腹瀉。寄生蟲：阿米巴痢疾、鞭蟲病、蛔蟲病、包蟲病等傳播途徑：糞－口（食物

7、、水、日常生活接觸）病原體：外界抵抗力和在外界的成活能力強傳染源：病人、帶菌者目前認為是唯一的傳染源明顯季節(jié)性：主要出現(xiàn)在夏秋季感染對象：沒有呼吸道傳染病明顯。,一、霍亂概況,全球霍亂概況,世界霍亂信息（WHO流行病每周記錄）,,我國霍亂流行階段,第1 階段(1961 —1965 年) 為早期流行階段;第2 階段(1966 —1976 年) 疫情報告少, 可信度低;第3 階段(1977 —1986 年) 為嚴重流行階段第4

8、 階段(1987 —1992 年) 發(fā)病數(shù)、地區(qū)逐年減少第5 階段(1993年1999年) ,疫情又出現(xiàn)回升, 發(fā)生O139 血清群新型霍亂,且與埃爾托霍亂并存第6階段（2000年至今），疫情處于低水平， O139 血清群霍亂廣泛擴散，埃爾托霍亂流行強度大大下降,全國霍亂發(fā)病情況,,二、霍亂基本情況,霍亂,霍亂（cholera）是由O1 血清群和O139 血清群霍亂弧菌引起的急性腸道傳染病。主要臨床表現(xiàn)是腹瀉（水樣便）、嘔吐，如不及

9、時治療，患者可死于低血容量性休克、代謝性酸中毒及腎功能衰竭等。病死率4％左右。 特征：發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣、 能引起大流行。,霍亂的臨床特征,典型臨床癥狀為 劇烈腹瀉，水樣便黃水樣便清水樣便米泔水樣便或血水樣便并伴有嘔吐迅速出現(xiàn)嚴重脫水，循環(huán)衰竭肌肉痙攣-特別是腓腸肌,霍亂病原體分類,古典生物型 小川型A

10、B O1群 稻葉型AC 埃爾托生物型 彥島型ABC霍亂弧菌

11、 霍亂病原菌 O139群（Bengal） 非O1群 O2-O200群 腹瀉病原菌01群的特異抗原有A、B、C三種，其中A抗原為01群所共有，A抗原與其他B與C抗原結(jié)合則可分為三型，即：原型

12、——AC（稻葉，Inaba）、異型——AB（小川，Ogawa）和中間型——ABC（彥島，Hikojima）,,,,,,,,,,病原學,霍亂弧菌：在弧菌屬中將與O1群霍亂弧菌具有共同鞭毛抗原(H抗原)、生化性狀類似、但菌體抗原不同的弧菌統(tǒng)稱為霍亂弧菌。根據(jù)菌體（O）抗原 不同，已分出200個 以上的O血清型。,霍亂病原學特點,1、形態(tài)與染色弧狀或逗點狀革蘭染色陰性有一根單鞭毛，細菌運動非?；顫姡属~群穿梭樣或流星狀,致

13、病性,霍亂弧菌經(jīng)口進入人體胃部，當胃酸缺乏或被稀釋或入侵菌量較多時（108），即可進入小腸，依其粘附因子緊貼于小腸上皮細胞表面，在小腸的堿性環(huán)境中大量繁殖，產(chǎn)生大量的霍亂腸毒素，細菌崩解還可釋出內(nèi)毒素?；魜y腸毒素抑制腸粘膜細胞對鈉的正常吸收，并刺激隱窩細胞分泌氯化物和水，導致腸腔水份與電解質(zhì)大量聚集，出現(xiàn)劇烈的水樣腹瀉和嘔吐。,流行病學,霍亂是人類傳染病，病人和帶菌者是本病的主要傳染源。 從感染譜來看，人感染本病后的

14、反應是多種多樣，受感染的多，發(fā)病的少；輕癥的多，重癥的少，嚴重脫水的典型病人只占感染者的一小部分。,六.報告程序與方式,傳染病報告實行屬地化管理。傳染病疫情信息實行網(wǎng)絡直報。甲類傳染病在2小時內(nèi)進行網(wǎng)絡直報，乙類及丙類傳染病在24小時內(nèi)網(wǎng)絡報告。網(wǎng)報病種：甲乙丙3類39種法定傳染??； 水痘等12種非法定傳染性疾病。,其他感染性腹瀉,,,隨著時空地點的變化，每個傳染病都有一個自然發(fā)病率：50

15、-80年代，我國細菌性痢疾發(fā)病率在46.37-1018.93/10萬（1.018/100）。1994年～1997年的監(jiān)測資料表明，我國年報告病例在60～85萬，發(fā)病率居甲乙類傳染病之首，病死率為0.04～0.07%。其中志賀氏菌致病性強，10-100個細菌細胞就可使人發(fā)病，多數(shù)臨床分離的菌株為多重耐藥性。,建國以來痢疾發(fā)病率變化,,腸致瀉性大腸桿菌目前已發(fā)現(xiàn)5種，即1腸致病性大腸桿菌（EPEC），引起嬰幼兒水樣或蛋花湯樣便；2 腸產(chǎn)毒性

16、大腸桿菌（ETEC）引起病人霍亂樣水樣便；3 腸侵襲性大腸桿菌（EIEC），病人發(fā)生細菌性痢疾樣便；4 腸出血性大腸桿菌，病人早期為水樣便，后為血便；5 腸集聚性粘附大腸桿菌（EAEC），該菌與小兒頑固性腹瀉有關。,,沙門氏菌某些菌型可致人的急性腹瀉和食物中毒暴發(fā)。全球已發(fā)現(xiàn)2000多個菌型，我國至少已檢出255個型或變異型，其中已知能引起人類致病的有57個型，主要在A～F群內(nèi)，所以在沙門氏菌血清學鑒定時，可先用A～F多價O血清檢查。鼠

17、傷寒沙門氏菌感染遍及全國各地，該菌在醫(yī)院兒科、產(chǎn)科嬰兒室的交叉感染屢有報告。,,四、診斷標準一）流行病學資料一年四季均可發(fā)病，一般夏秋季多發(fā)，有不潔飲食（水）和/或與腹瀉病人、腹瀉動物、帶菌動物接觸史，或有去不發(fā)達地區(qū)旅游史。如為食物源性則常為集體發(fā)病及有共進可疑食物史。某些沙門氏菌（如鼠傷寒沙門氏菌等）、腸致病性大腸桿菌（EPEC）、輪狀病毒和柯薩奇病毒等感染可在醫(yī)院產(chǎn)房嬰兒室、兒科病房、托幼機構(gòu)發(fā)生暴發(fā)或流行。,,（二）臨床表現(xiàn)

18、1 腹瀉（1）大便每日≥3次 （2）糞便的性狀異常：可為稀便、水樣便、亦可為粘液便、膿血便。（3）可伴有惡心、嘔吐、食欲不振、發(fā)熱及全身不適等。病情嚴重者，因大量丟失水分引起脫水、電解質(zhì)紊亂甚至休克。2 已除外霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒。,（三）實驗室檢查,1 糞便常規(guī)檢查：糞便可為稀便、水樣便、粘液便、血便、或膿血便。鏡檢可有多量紅、白細胞，也可僅有少量或無細胞。2 病原學檢查：糞便中可檢出霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒以外的致病

19、微生物，如腸致瀉性大腸桿菌、沙門氏菌、輪狀病毒或藍氏賈第鞭毛蟲等，或檢出特異性抗原、核酸或從血清檢出特異性抗體。臨床診斷：具備（二）和（三）中的1，（一）供參考。病原確診：臨床診斷加（三）中的2。,傳染?。和话l(fā)公共衛(wèi)生事件； 暴發(fā)疫情（局部地區(qū)短期內(nèi)突然發(fā)生多例）。突發(fā)標準細菌性痢疾：10例/3天?集體單位；或死亡2例。感染性腹瀉：20例/周?集體單位；或死亡1例 。,醫(yī)療單位腹瀉病門診設置

20、標準及工作規(guī)范 ---疫情報告,做好門診數(shù)旬報霍亂的報告(每周零報告)發(fā)現(xiàn)霍亂病人和疑似病人, 應立即報告醫(yī)院領導,由院領導報告駐地疾控中心進行處理。出現(xiàn)傷寒和副傷寒疑似病人，痢疾病人或其他腹瀉病人突然增多，就診腹瀉病人住址比較集中的情況時,也應盡快報告院領導。 傳染病死亡,霍亂的報告,城鎮(zhèn)應于2小時內(nèi)農(nóng)村應于6小時內(nèi)方式：網(wǎng)

21、絡直報 電話,要求逢瀉必檢,開展霍亂弧菌培養(yǎng)（含O139）：對就診的病人快診率要求達到100％。水樣便病人應進行霍亂細菌學培養(yǎng)，疑似患者全部檢索，要求霍亂弧菌分離培養(yǎng)率必須達到10％以上，并且要求同時進行O1和O139群霍亂弧菌檢測。無檢驗條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)級醫(yī)院和其它單位，一旦發(fā)現(xiàn)可疑病人，應立即將標本送指定單位檢驗，不要漏診病人。,,縣級及以上醫(yī)院和有條件的其它醫(yī)院，發(fā)現(xiàn)O 157：H7感染的可疑病人（

22、如血便、血性腹瀉的病例）要登記報告并及時采樣，進行O 157：H7大腸桿菌的分離培養(yǎng)。目前對 O 157：H7感染的疑似或確診病人暫按乙類傳染病報告。開展痢疾桿菌的培養(yǎng)。每所醫(yī)院每年上送痢疾菌株至少5株。,,霍亂等感染性腹瀉實驗室檢測技術,感染性腹瀉病原菌實驗室檢測技術,霍亂弧菌的檢驗O157:H7大腸桿菌的檢驗志賀氏菌的檢驗傷寒、副傷寒的檢驗小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢驗空腸彎曲菌的檢驗致腹瀉原蟲的檢驗病毒性腹瀉的檢驗,

23、三、霍亂弧菌的實驗診斷,樣本采集、送檢和保存 霍亂的病原學檢查霍亂弧菌的快速診斷霍亂弧菌的噬菌體-生物分型,霍亂病原檢索對象,監(jiān)測點常規(guī)監(jiān)測腹瀉病門診所有腹瀉病人的病原檢測重點人群的檢索：病人的密切接觸者、與流行有關的重點人群（大型建筑工地、流動人口、食品加工及餐飲業(yè)服務人員、托幼機構(gòu)和環(huán)衛(wèi)部門工作人員 ）可能受污染的食品檢索：海水產(chǎn)品、熟肉制品、冷飲及涼拌食品水體的檢索其他外環(huán)境標本的檢索：公廁糞便、蒼蠅等,樣本采集、

24、送檢和保存,（一）標本的采集和送檢 標本采集的好壞，對整個檢驗工作的質(zhì)量影響很大。糞便標本的采集應爭取在發(fā)病早期、服用抗菌藥物之前并盡快送到檢驗室。,,糞便：標本的采集以病人糞便為主，水樣便采取1～3mL，成形便采取指甲大小的糞量，亦可用直腸棉拭或采便管由肛門插入直腸內(nèi)3～5cm處采取。急性期病人取水樣便標本在增菌培養(yǎng)的同時可取其粘液絮片或用棉拭子直接接種于堿性瓊脂、TCBS瓊脂培養(yǎng)基。帶菌者糞便都應接種堿性蛋白胨水培養(yǎng)基，

25、放37℃增菌6～8h后，從菌膜下表層取一接種環(huán)培養(yǎng)物，劃線接種于堿性瓊脂、TCBS瓊脂培養(yǎng)基。,,采集的標本不能立即檢查的，要放入堿性蛋白胨水或文臘二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固體保存培養(yǎng)基中。標本與保存液比例約為1∶5。 送檢標本時應填寫“標本送檢單”寫明姓名、地址、發(fā)病時間、采集時間、臨床診斷等。運送過程中注意安全，勿污染容器口外壁，專人運送，送檢箱每次用后須做消毒處理,O1群和O139群霍亂弧菌檢驗程序,1、直接

26、分離培養(yǎng)2、增菌后分離培養(yǎng),（二）分離培養(yǎng),直接分離培養(yǎng),急性期病人水樣大便標本在增菌培養(yǎng)的同時可取其粘液絮片或用棉拭子直接接種在選擇性培養(yǎng)基上。目前常用的強選擇性培養(yǎng)基有TCBS瓊脂、堿性瓊脂、慶大霉素瓊脂等?；魜y弧菌在TCBS上因分解蔗糖呈黃色菌落,此是 WHO推薦使用培養(yǎng)基。,增菌,所有糞便標本都應接種堿性蛋白胨水培養(yǎng)基，放37℃增菌6～8h后，從菌膜下表層取一接種環(huán)培養(yǎng)物，劃線接種于強選擇性堿性瓊脂和TCBS瓊脂平板各兩個。,

27、各種培養(yǎng)基上的生長情況,疑似菌落初步鑒定,每個堿性瓊脂、TCBS瓊脂平板上各挑取5個以上(少于5個的全部挑取)疑似菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板/營養(yǎng)瓊脂斜面或克氏雙糖置37℃18-24h純培養(yǎng)(即每份樣品至少從2個分離平板上獲得約10株可疑菌落菌株)，取斜面純培養(yǎng)物進行血清鑒定、并涂片進行革蘭氏染色及氧化酶試驗等。挑取可疑菌落作玻片凝集與O1群多價和單價血清作玻片凝集反應與O139群抗血清做凝集反應,血清鑒定自分離培養(yǎng)基上挑取可疑菌落

28、與01群霍亂弧菌多價/單價診斷血清及0139群霍亂弧菌診斷血清做玻片凝集試驗。如可疑菌落在血清中很快(一般在10s內(nèi))出現(xiàn)肉眼可見的明顯凝集，在生理鹽水中不凝集者判為陽性。可疑菌落較多時，應挑選5個以上的菌落逐個進行玻片凝集檢查，必要時，取原劃線菌落邊緣透明部分再做玻片凝集，均為陰性時方可報告未檢出01群及0139群霍亂弧菌。對首發(fā)病例菌株需送上一級實驗室做進一步鑒定或復查。,快速輔助診斷,制動試驗玻片凝集試驗免疫熒光球試驗膠體金

29、免疫層析快速檢測PCR試驗

30、

31、 SPA試驗等。,制動試驗,急性期病人的糞便內(nèi)含有大量的弧菌，取一滴水樣便滴在玻片上直接鏡檢（最好用暗視野或相差顯微鏡）可見具有流星狀動力的細菌，當加入一滴01群霍亂免疫血清后，運動停止，凝集成塊為陽性。

32、,快診試紙條--膠體金免疫層析快速檢測技術,【原理】采用膠體金免疫層析雙抗體夾心法，檢測標本中霍亂弧菌。以膠體金作為標記物，交聯(lián)抗霍亂弧菌單克隆抗體，與樣品中的霍亂弧菌結(jié)合。形成雙抗體夾心一步法，呈現(xiàn)出目測可見的紅色條帶，顯色程度與抗原含量成正比。 注： 快診試紙條：分O1群和O139群,【實驗操作步驟】,1、待檢樣品的處理1)        直接檢測：:水樣便

33、直接檢測。2)        增菌檢測：水樣便：1-2ml接種于8-9ml堿性蛋白胨水，37℃培養(yǎng)6-8h或過夜。,,2、快速檢測卡加樣： 1)將檢測卡放置與潔凈、干燥的工作臺上 2)實驗前，請將試劑恢復至室溫 3)用吸管取前增菌液樣品2-3滴，加入檢測卡一端的加樣孔，計時并觀察反應結(jié)果 4)2-15分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，20分鐘之后結(jié)果不能判讀,【結(jié)果判斷】,

34、有效結(jié)果目測可見有紅色條帶陽性結(jié)果可見兩條紫紅色線條：檢測線和質(zhì)控線 陰性結(jié)果僅見一條紫紅色質(zhì)控線 無效結(jié)果無任何線條出現(xiàn)，說明實驗無效,,膠體金霍亂檢測試劑盒,快速診斷初步報告,1、快診斷實驗陽性者同時涂片染色和懸滴法觀察，如鏡檢為革蘭染色陰性弧菌或懸滴細菌呈“魚群穿梭樣”運動，可作初診報告。為開展疫情處理提供依據(jù)；2、待營養(yǎng)瓊脂平板/營養(yǎng)瓊脂斜面或克氏雙糖置純培養(yǎng)物生長良好后，再進行傳統(tǒng)的鑒定以確認或訂正報告。３、快診

35、斷試驗獲得陰性結(jié)果，不能放棄分離培養(yǎng)，主張快診斷試驗僅用于應急疫情處理時，作為應急使用。,四、霍亂弧菌的鑒定,鑒定標準以血清學性狀為主，結(jié)合形態(tài)學和生化學性狀作出判定。血清學性狀以玻片凝集作檢查；形態(tài)學上可作革蘭氏染色、觀察形態(tài)、檢查動力；生化學上輔以氧化酶試驗和粘絲試驗即可。必要時再做其他試驗，以便于類似細菌做鑒別,O157:H7大腸桿菌,腸出血性大腸桿菌（EHEC）是一種近年來新發(fā)現(xiàn)的可造成人體嚴重健康危害的致病菌。 O1

36、57：H7 大腸桿菌屬于腸出血性大腸桿菌(EHEC)的一個最常見、最重要的血清型。,感染O157：H7 大腸桿菌后,主要臨床癥狀為：突發(fā)性腹痛,初期有水樣便,隨即出現(xiàn)血性糞便,低燒或不發(fā)燒 , 嚴重者可導致腎溶血性尿毒綜合癥（HUS）,血栓性血小板減少性紫癜（TTP）和其它臟器的損傷。因此,快速、準確做出診斷為臨床治療、防止該菌傳播，提供信息等具有特別重要的意義。,1、傳染源,病人 平均排菌時間7天，7天后不易測到。出血性腸炎、溶血

37、性尿毒綜合征病人排菌時間更長，報道最長達124天。 無癥狀攜帶者家畜家禽作為傳染源更重要 帶菌時間長，病原菌在動物糞便中生存時間可長達半年以上，攜帶病原菌的家畜家禽排菌時間可長達一年。更易污染肉、蛋、奶類制品及環(huán)境。帶菌家畜、家禽主要有牛、羊、豬等，雞、鴨、鵝、馬、鹿、狗、兔等也帶菌。,2、傳播途徑,EHEC感染是糞-口傳播，以食源性傳播為主，水源性傳播和接觸傳播也是重要的傳播途徑。有些爆發(fā)可以多途徑并存。,培

38、養(yǎng)特性：兼性厭氧菌，30—42℃生長良好，最適溫度37 ℃普通瓊脂平板 凸起光滑、濕潤、乳白色、渾濁、邊緣整齊的菌落麥康凱瓊脂平板 :發(fā)酵乳糖，菌落呈紅色或粉紅色山梨醇麥康凱瓊脂平板 山梨醇陰性或遲緩發(fā)酵，菌落為無色或中心為淺粉紅色,O157:H7大腸桿菌與其他大腸桿菌的主要區(qū)別：,O157：H7大腸桿菌不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵山梨醇。產(chǎn)生志賀樣毒素(SLT)。,O157:H7大腸桿菌實驗室診斷,（一）樣品的采集送檢1. 糞便標本

39、的采集應爭取在發(fā)病早期，服用抗菌藥物之前，并盡快送到檢驗室。采集腹瀉病人糞便以血性水樣便為主，也可以用直腸棉拭或采便管采取，肛拭標本應染有糞便。 2. 腹瀉病人血性水樣便標本從采集到送檢不得超過24h,采集的標本應插入卡里--布萊爾（Cary-Blair）半固體保存培養(yǎng)基中，立即送試驗室接種于培養(yǎng)基。培養(yǎng)基要定期調(diào)換，保持培養(yǎng)液新鮮。,血清學診斷,在平板上挑選可疑菌落與O157診斷血清、H7血清作試探性凝集試驗，若不凝集，但