伯樂gm試驗(yàn) ppt課件

1、伯樂gm實(shí)驗(yàn),李丹,GM試驗(yàn)原理GM試驗(yàn)的臨床價(jià)值GM試驗(yàn)假陽性的情況GM試驗(yàn)假陰性的情況GM試驗(yàn)的優(yōu)勢和局限其他樣本的gm實(shí)驗(yàn)與其他廠家比較,,GM試驗(yàn)檢測的是半乳甘露聚糖（glactomannan，GM），主要適于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷；半乳甘露聚糖是廣泛存在于曲霉和青霉細(xì)胞壁的一種多糖，菌細(xì)胞壁表面菌絲生長時(shí)，半乳甘露聚糖從薄弱的菌絲頂端釋放，是最早釋放的抗原；本試劑盒采用ELISA夾心法，將EBA-2單克隆抗

2、體包被于微孔內(nèi)檢測結(jié)合（結(jié)合物為過氧化物酶連接的抗體）到已激活微孔板上的抗體。加入EDTA的樣本經(jīng)過熱處理(去除免疫復(fù)合物和沉淀可能干擾實(shí)驗(yàn)的血清蛋白質(zhì)，加入微孔板中。如果樣本中有半乳甘露聚糖抗原，則形成單克隆抗體-半乳甘露聚糖-單克隆抗體過氧化物酶復(fù)合物。洗板去除沒有結(jié)合的物質(zhì)加入TMB,顯藍(lán)色，加入2M硫酸終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀讀數(shù)。,1 伯樂GM試驗(yàn)的原理,嚴(yán)重粒細(xì)胞缺乏免疫功能低下（惡性腫瘤、血液病、尿毒癥、艾滋病、器官移植、糖尿病

3、）實(shí)體器官移植入住ICU血液腫瘤骨髓移植長期應(yīng)用激素治療慢性阻塞性肺病,易感染人群,無菌、無熱源采血管，ep管，槍頭，移液器金屬浴加熱模塊，離心機(jī)支持1.5ml ep管，支持450nm和620/630nm雙波長的酶標(biāo)儀，水浴鍋,必備耗材和儀器,曲霉細(xì)胞壁成分菌絲在組織中生長釋放熱穩(wěn)定可溶性:血清，纖支鏡灌洗液，腦脊液分子量：根據(jù)來源不同從10000到50000不等，屬于高分子化合物,半乳甘露聚糖,ELISA指將可溶

4、性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。ELISA分為夾心法、間接法和競爭法夾心法常用于檢測大分子抗原間接法常用于檢測抗體競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制，一般用于檢測小分子抗原,Elisa簡介,將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)洗去多余待測檢體，加入另一種對(duì)抗原專

5、一之一次抗體，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果,夾心法操作原理,將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)洗去多余待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結(jié)洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,間接法

6、操作原理,將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,競爭法操作原理,GM可在患者臨床癥狀出現(xiàn)前5-8d獲得陽性結(jié)果曲菌定植時(shí)極少釋放入血，因此有助于鑒別侵襲與定植；GM釋放量與菌量成正比，可以反映感染程度；連續(xù)檢測GM可作為治療療效的監(jiān)測；

7、在造血干細(xì)胞移植患者中的診斷敏感性高；參考值：I≥0.5為陽性。,2 血清GM試驗(yàn)的臨床價(jià)值,使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦，阿莫西林/克拉維酸；高劑量使用激素化療的嚴(yán)重黏膜炎患者谷類食物中的GM抗原通過腸道入血新生兒和兒童（雙歧桿菌定植、食用乳制品）；血液透析；自身免疫性肝炎等；食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物。交叉反應(yīng)真菌：青霉、擬青霉、隱球菌、頭狀地霉、組織胞漿菌。,3 GM試驗(yàn)假陽性的情況,釋放入血

8、循環(huán)中的曲霉GM并不持續(xù)存在而是會(huì)很快清除；以前使用了抗真菌藥物1.三唑類（降低GM水平）2.米卡芬凈類（升高GM水平）病情不嚴(yán)重；非粒細(xì)胞缺乏的患者。,4 GM試驗(yàn)假陰性的情況,優(yōu)勢： 鑒別曲霉菌侵襲性感染與定植； 早于臨床癥狀和影像學(xué)異常5-8d； GM診斷侵襲性曲霉感染的敏感度高于G試驗(yàn)； 血清中存在時(shí)間較短，可作為療效監(jiān)測。,5 GM試驗(yàn)的優(yōu)勢和局限,,局限：陰性實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能排除侵襲曲霉病的診斷。侵襲

9、性曲霉病的高危病人，應(yīng)當(dāng)每周檢測兩次。沒有使用新生兒樣本來評(píng)估曲霉菌抗原檢測試劑盒的性能。在慢性牙腫病（CGD）和Job’s綜合征的患者中，檢出率減低在侵襲性曲霉病人中，如果采取積極的抗真菌治療，可能導(dǎo)致曲霉抗原檢測試劑盒的靈敏度降低其他屬的真菌如孢擬青霉，青霉，白地酶和組織胞漿有EBA-2單克隆抗體反應(yīng)性等許多因素引起的假陽性和假陰性,R5/R4大于等于1.5，R3/R4小于等于0.4兩個(gè)R4之間差距不大于0.2,結(jié)果判讀

10、,G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的聯(lián)合使用,同時(shí)測定G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)有助于早期診斷侵襲性真菌感染！,纖支鏡灌洗液（肺泡灌洗液）診斷曲霉菌在肺部是定植還是侵襲性生長，關(guān)鍵在于其是否合成GM.如果痰液或肺泡灌洗液標(biāo)本培養(yǎng)到曲霉菌 且GM試驗(yàn)檢測結(jié)果為陽性，即可診斷為曲霉菌侵襲性感染腦脊液穿刺液,6.其他樣本的gm實(shí)驗(yàn),相比天津喜諾操作簡單1.我們的板條是包被好抗體的2.喜諾的抗體需要現(xiàn)配現(xiàn)用，而我們?cè)缇团浜昧?.結(jié)果計(jì)算簡單，不用制作線性回歸