tp抗體的測(cè)定及臨床意義概要

1、梅毒螺旋體抗體的測(cè)定及臨床意義南方醫(yī)院檢驗(yàn)科 裘宇容,梅毒螺旋體（蒼白密螺旋體）,梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。人體受感染后，螺旋體很快播散到全身，幾乎可侵犯全身各組織與器官，臨床表現(xiàn)多種多樣，且時(shí)顯時(shí)隱，病程較長(zhǎng)。 2005年國(guó)家衛(wèi)生部公布,在全國(guó)27 種法定報(bào)告的 甲、乙類(lèi)傳染病中,梅毒發(fā)病人數(shù)僅次于肺結(jié)核、乙型肝 炎、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、淋病而高居第五位(2

2、002 年為第七位)。 二. 傳播途徑,一. 概況,1、性接觸傳播 占95%。 主要通過(guò)性交或其他性行為，如同性戀、接吻等。梅毒密螺旋體大量存在于一、二期梅毒患者的生殖器和其他部位的皮膚粘膜表面，也存在于唾液、精液、乳汁、尿液和血液等體液中。未經(jīng)治療的梅毒患者在感染1～2期內(nèi)最具傳染性。隨著病期延長(zhǎng)，傳染性越來(lái)越小，4年后通過(guò)性接觸無(wú)傳染性。,3、胎盤(pán)傳播 未經(jīng)治療的梅毒孕婦在整個(gè)病程都可經(jīng)

3、胎盤(pán)傳播給胎兒。其中在一期或二期患者，血中螺旋體最多。如不治療造成流產(chǎn)或死胎的約為50%，發(fā)生胎傳播梅毒的危險(xiǎn)約50%，感染梅毒1年后的胎盤(pán)傳播的危險(xiǎn)性逐漸降為50%以下。病期超過(guò)4年雖通過(guò)性接觸無(wú)傳染性，但仍可傳給胎兒，病期越長(zhǎng)，傳染性越小。,2、輸血傳染,4、產(chǎn)道傳播 新生兒在出生時(shí)，頭部、肩部損傷或接觸了母體生殖器都能受母體陰部的螺旋體感染，而引起嬰兒的后天性梅毒。5、其他傳播 哺乳、接觸梅毒患者污染的

4、衣被、毛巾、食具或污染的醫(yī)療器械，都可引起梅毒的間接傳播。,人類(lèi)對(duì)梅毒無(wú)先天免疫性，尚無(wú)疫苗接種進(jìn)行人工免疫，僅能在受感染后產(chǎn)生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染,三、梅毒的免疫性,首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測(cè)出，早期梅毒抗梅治療3～9個(gè)月后或晚期梅毒治療2年后，大部分病人IgM可轉(zhuǎn)陰性，再感染時(shí)又出現(xiàn)陽(yáng)性，故IgM型抗體的存在是活動(dòng)性（現(xiàn)癥）梅毒的表現(xiàn)。感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體

5、，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間，IgG抗體仍可通過(guò)記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測(cè)出。,一種是梅毒特異性抗體IgM和IgG,胎兒在宮內(nèi)感染梅毒螺旋體后，胚胎晚期（6～9個(gè)月）已能合成IgM型抗體，出生后第3個(gè)月開(kāi)始形成IgG型抗體；IgM抗體不能通過(guò)胎盤(pán)，而IgG抗體能通過(guò)胎盤(pán)，如患兒血清中檢側(cè)出19S-IgM抗梅毒螺旋體抗體是診斷先天梅毒的有力證據(jù)一種是非特異性抗體---反應(yīng)素（reagin）

6、是梅毒螺旋體破壞人體組織過(guò)程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機(jī)體所產(chǎn)生的抗體。一般在感染后5～7周（或下疳出現(xiàn)后2～3周）產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。,,四. 梅毒的診斷1、病史2、臨床表現(xiàn)3、實(shí)驗(yàn)室檢查。（1）血清學(xué)檢驗(yàn)(測(cè)抗體) （2）病原學(xué)檢查：直接查梅毒螺旋體(暗 視野顯微鏡,直接熒光抗體法)（3）梅毒螺旋體核酸測(cè)定。,非特異性類(lèi)脂質(zhì)抗原血清試驗(yàn)： 是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原

7、檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗(yàn)及療效觀察?？梢苑譃橐韵滤姆N試驗(yàn)，原理基本相同： 1、性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL) ：由于試劑需現(xiàn)配 現(xiàn)用，故而國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室很少采用。但VDRL是唯一可用于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學(xué)方法 2、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn) (RPR)：在特制的紙片 上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn) 凝集，用肉眼可觀察結(jié)果。 3、甲苯胺紅試驗(yàn)（TRUST)

8、：在試劑中加入甲苯胺紅代替炭粉 顆粒，使結(jié)果更易于觀察。 4、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR),梅毒的血清學(xué)試驗(yàn),非特異性類(lèi)脂質(zhì)抗原血清試驗(yàn)的缺陷： 1、特異性：不高。在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、麻風(fēng)病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以此類(lèi)試驗(yàn)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。用于初篩試驗(yàn)。 2、敏感性：不高?？贵w過(guò)量可引起前帶現(xiàn)象（1-2％二期梅毒病人）；由于感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體

9、；晚期梅毒反應(yīng)素又可能轉(zhuǎn)陰--假陰性反應(yīng)，因此這類(lèi)試驗(yàn)不適于一、三期梅毒，對(duì)隱性梅毒和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此此類(lèi)試驗(yàn)做梅毒初篩時(shí)，存在一定數(shù)量的漏檢非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)： 1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)表現(xiàn)為滴度隨治療逐漸下降， 故可以作為療效觀察的指標(biāo) 2、此類(lèi)方法簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉,梅毒的血清學(xué)試驗(yàn),梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)： 用梅毒螺旋體作為抗原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其

10、敏感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法： 1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS)最敏感的方法 技術(shù)操作上也是最困難的，故常不被臨床實(shí)驗(yàn)室作為首選 方法 2、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）國(guó)內(nèi)使用的商品化 TPHA試劑盒均未通過(guò)國(guó)家的批批檢3、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA)確證試驗(yàn)方法4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP

11、-ELISA） 5、梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RT）未通過(guò)國(guó)家的批批 檢,梅毒的血清學(xué)試驗(yàn),梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA IgG） 原理：用超聲裂解的梅毒螺旋體為抗原，致敏惰性明膠顆 粒，此致敏明膠顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋 體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可觀察的凝集反應(yīng)。是TPHA 的升級(jí)產(chǎn)品。 優(yōu)點(diǎn)： 1、試劑穩(wěn)定，批

12、間差小 2、結(jié)果判讀清晰明確 3、敏感性和特異性高不足：結(jié)果判定主觀，不易保存. 成本較高， 不適合大批量檢測(cè),梅毒的血清學(xué)試驗(yàn),Serodia TPPA的操作步驟,6、結(jié)果判讀,5、混勻，加蓋，孵育2個(gè)小時(shí),Serodia TPPA的結(jié)果判讀（定性試驗(yàn)）,梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（TP-ELISA） 原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚

13、丙乙烯板，再加入待檢血清以及酶標(biāo)抗原，形成雙抗原夾心，同時(shí)檢測(cè)IgG、IgM抗體。少數(shù)試劑采用間接法，檢測(cè)IgG 優(yōu)點(diǎn)：1、敏感性和特異性較高 2、價(jià)格較低，適合于對(duì)大量樣品的篩查 3、可實(shí)現(xiàn)操作的自動(dòng)化、客觀化 不足：各家ELISA試劑盒采用的抗原和工藝不 同，使測(cè)定的敏感性和特異性產(chǎn)生較大的 差異，臨床實(shí)驗(yàn)

14、室在選用ELISA試劑前應(yīng)認(rèn) 真進(jìn)行評(píng)估. 基因重組抗原,假陰性.,梅毒的血清學(xué)試驗(yàn),有研究表明:使用由rTP47,rTP17和rTP15這3種重組表達(dá)相關(guān)抗原包被的ELISA試劑盒,有非常好的敏感性和特異性.ELISA試劑對(duì)II期、潛伏期和療后梅毒的特異性和敏感性都較好，但對(duì)I期梅毒的敏感性尚有待提高。,樣品對(duì)ELISA及PA檢測(cè)結(jié)果的影響,敏感性和特異性ELISA比TPPA法稍差。13736份標(biāo)本T

15、PPA法 陽(yáng)性214RPR法 陽(yáng)性192(18例確診假陽(yáng)性 22例假陰性)ELISA法 陽(yáng)性204(4例假陽(yáng)性),無(wú)償獻(xiàn)血者(18～55歲)中, ELISA法為0.58%。 其中51～55歲陽(yáng)性率達(dá)2.14 ( 9 /421)無(wú)臨床癥狀，只有抗體陽(yáng)性。陽(yáng)性結(jié)果難以用正在或曾經(jīng)感染梅毒解釋。,普通人群：陽(yáng)性率> 1

16、.5% ( 1.52% ～1.61% ) 。 其中> 50歲 53.3% ～62.3% 71～80歲 27.7% ～27.9%。,ELISA或TPPA法假陽(yáng)性（老年人）,梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)所測(cè)為抗T. pa llidum的IgG/ IgM類(lèi)抗體。試驗(yàn)中所用抗原FTA2ABS：T. pallidum subsp pallidum 的Nichols株凍干懸液TPPA：Nichol

17、s株超聲處理EL ISA：純化的/基因重組的分子量(MW) 47 000、45500、17000、15500的T. pa llidum特異抗原,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的假陽(yáng)性生物學(xué)基礎(chǔ),人類(lèi)共生的螺旋體很多，雖然有些螺旋體可能不致病,但可能參與齒齦類(lèi)、牙周病、腹瀉等的發(fā)病。已發(fā)現(xiàn)抗T. pallidum MW 37 000的鞭毛鞘蛋白的單克隆抗體和抗MW47 000脂蛋白的單克隆抗體可與某些口腔螺旋體反 應(yīng)。齒齦炎和牙周病患者常產(chǎn)生抗梅毒螺旋

18、體( T.pallidum subsp. pallidum )MW 47 000、37 000、14 000和12 000抗原的IgG類(lèi)抗體。甚至少部分健康人也可測(cè)出抗MW 47 000和37 000抗原的抗體。,,如何解決假陽(yáng)性問(wèn)題？,進(jìn)行梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)時(shí)，待測(cè)血清預(yù)先用非致病性密螺旋體T. phageden is的Reiter株 提取物吸收（或陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行吸收試驗(yàn)。即使如此,試驗(yàn)的特異性仍只能達(dá)99%左右,不能絕對(duì)排除假陽(yáng)性

19、,關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（一）,先以非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（RPR、TRUST等）進(jìn)行初篩，再以梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA、TPHA、ELISA等）進(jìn)行確認(rèn)。 優(yōu)點(diǎn)：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)價(jià)格低廉，使 梅毒檢測(cè)的成本可以保持在低水平 缺點(diǎn)：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的敏感性較 差，導(dǎo)致臨床上易出現(xiàn)漏檢的情況。,先進(jìn)行梅毒螺旋體抗原

20、血清試驗(yàn)，陽(yáng)性時(shí)再進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)。,關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（二）,關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗(yàn)程序的探討（二）,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA等）,為了控制一些傳染性疾病的院內(nèi)感染,現(xiàn)已規(guī)定凡是手術(shù)、輸血(供、受血者) 、各種創(chuàng)傷性檢查的患者, 均須進(jìn)行包括HBV、HCV、H IV (1 + 2)和梅毒螺旋體的相關(guān)血清學(xué)檢驗(yàn)。 這4種病原所致傳染病由于對(duì)健康和生命造成的危害以及患病后對(duì)患者參軍、入學(xué)、