三氯苯酚降解相關基因的合成與功能分析——PsUGT2I基因.pdf

1、三氯苯酚是一種含氯芳香環(huán)化合物，在自然界中難以降解，并對人類具有具有致癌、致畸、致突變的“三致”效應，有六種同分異構體。目前，化學和物理分解法不僅費用高昂，效果差，甚至還會產(chǎn)生二次污染，研究還不是很完善。利用植物轉基因技術，采用植物降解、微生物降解、或催化轉化高毒性芳香化合物，將成為安全、快速、高效、經(jīng)濟的新型治理方法。
　　 糖基轉移酶(Glycosyltransferase，簡稱GTs)超家族，在生物體內催化活化的糖連接到不

2、同的受體分子，如蛋白、核酸、寡糖、脂和小分子上，形成聚糖或糖蛋白、糖脂等的酶。存在于植物體內的糖基轉移酶是參與糖苷化的重要成元。而糖苷化過程是次級代謝的重要步驟。已經(jīng)有報道，植物利用此過程可以對含有苯環(huán)的芳香烴、氯代物具有轉化、降解的功能。本研究根據(jù)EMBL中公布的歐洲云杉(Picea Sitchensis)尿嘧啶-葡糖轉移酶(UGT2)基因，再依據(jù)植物密碼子偏好性，利用PTDS法化學合成PsUGT2I基因。合成的PsUGT2I基因翻譯

3、所得的氨基酸序列與網(wǎng)上公布的PsUGT2氨基酸序列一致。
　　 為了進一步分析PsUGT2I基因的功能，首先構建雙元表達載體，電擊轉化到農(nóng)桿菌中。通過蘸花法轉化擬南芥。經(jīng)潮霉素篩選、PCR檢測，得到了轉基因陽性植株。對轉基因植株的生理分析表明，相對于野生型，PsUGT2I轉基因擬南芥植株對2，4，5-TCP耐受性比較強;且轉基因植株表現(xiàn)出較低的可溶性糖含量。同時，提取擬南芥蛋白液用作體外降解TCP分析，發(fā)現(xiàn)轉基因植物對2，4，5